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A simple approach to mediate genome editing in the filamentous fungus Trichoderma reesei by CRISPR/Cas9-coupled in vivo gRNA transcription

机译：通过CRISPR / CAS9耦合在体内GRNA转录中介导丝状真菌Trichoderma Reesei中基因组编辑的简单方法

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Objective To simplify CRISPR/Cas9 genome editing in the industrial filamentous fungus Trichoderma reesei based on in vivo guide RNA (gRNA) transcription. Results Two putative RNA polymerase III U6 snRNA genes were identified in the genome of T. reesei QM6a by BLASTN using Myceliophthora. thermophila U6 snRNA gene as the template. The regions approximately 500 bp upstream of two U6 genes were efficient promoters for the in vivo expression of gRNA. The CRISPR system consisting of Cas9 and in vivo synthesized gRNA under control of the T. reesei U6 snRNA promoters was sufficient to cause a frameshift mutation in the ura5 gene via non-homologous end-joining-mediated events. Conclusions We report a simple gene editing method using a CRISPR/Cas9-coupled in vivo gRNA transcription system in T. reesei.
机译：目的基于体内引导RNA（GRNA）转录来简化工业丝状真菌richoderma ReeSei中的Crispr / Cas9基因组。 结果使用菌丝噻吩并用肌电球菌在T.Reesei QM6A的基因组中鉴定了两个推定的RNA聚合酶III U6 SnRNA基因。 嗜热紫外线SnRNA基因作为模板。 在两个U6基因的上游区域约为500bp的区域是用于GRNA的体内表达的有效启动子。 通过CAS9和在T.Reesei U6 SnRNA启动子的控制下由Cas9和体内合成GRNA组成的CRISPR系统足以通过非同源末端接合介导的事件引起URA5基因中的帧突变突变。 结论我们在T.Reesei中使用CRISPR / CAS9偶联的CRISPR / CAS9偶联了一种简单的基因编辑方法。

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