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【24h】

High‐Content Screening for Protein‐Protein Interaction Modulators Using Proximity Ligation Assay in Primary Neurons

机译：在原发性神经元中使用近距离连接测定的蛋白质 - 蛋白质相互作用调节剂的高含量筛选

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The proximity ligation assay (PLA) allows the detection and subcellular localization of protein‐protein interactions with high specificity. We recently developed a high‐content screening model based on primary hippocampal neurons cultured in 384‐well plates and screened a library of ～1100 compounds using a PLA between tau and bridging integrator 1, a genetic risk factor for Alzheimer's disease. We developed image‐segmentation and spot‐detection algorithms to delineate PLA signals in the axonalnetwork, but not in cell bodies, from confocal images acquired via a high‐throughput microscope. To compare data generated from different plates and through different experiments, we developed a computational routine to optimize the image analysis parameters for each plate and devised a range of quality‐control measures to ultimately identify compounds that consistently increase or decrease our read‐out. We provide the following protocols.
机译：接近连接测定（PLA）允许与高特异性的蛋白质 - 蛋白质相互作用检测和亚细胞定位。 我们最近开发了基于在384孔板中培养的原发性海马神经元的高含量筛选模型，并使用TAU和桥接积分器1之间的PLA筛选了一种〜1100种化合物的文库，这是Alzheimer疾病的遗传危险因素。 我们开发了图像分割和点检测算法，以通过高吞吐学显微镜获取的共聚焦图像描绘腋窝中的PLA信号，但不在细胞体中。 为了比较从不同板和通过不同的实验产生的数据，我们开发了一种计算程序，以优化每个板的图像分析参数，并设计了一系列质量控制措施，最终识别始终如一地增加或减少读出的化合物。 我们提供以下协议。

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