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Western Blotting with Solutions containing Nanoliter Volumes of Antibody

机译：用含有纳米凝胶体积抗体的溶液蛋白质印迹

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Whether screening small mammal serum during antibody production or attempting to preserve a stock of precious antibody, this protocol's western blotting method using aliquots containing nanoliter volumes of antibody will benefit researchers. Time-tested western blotting workflows allowing separation and analysis of proteins are routinely utilized in clinical and laboratory settings. The necessity for relatively large quantities of antibody is a major limitation to this universal tool. This article provides a step-by-step protocol for detecting proteins of interest with solutions containing nanoliter volumes of antibody without altering the preceding gel electrophoresis and transfer methods. Important considerations, frequently encountered problems,and means of optimizing reproducibility are discussed. Complementary diagrams, images, and videos are provided. The protocol is demonstrated using 0.3 nanoliters of anti-serum to detect fibronectin in a human foreskin fibroblast cell line. Finally, two support protocols detailing methods of extracting proteins from cultured cells are reported. Published 2019. This article is a US Government work and is in the public domain in the USA.
机译：无论是在抗体生产过程中筛选小哺乳动物血清，都试图保留珍贵抗体库存，该方案使用含有纳米凝胶体积抗体的等分试样的蛋白质印迹方法将受益研究人员。在临床和实验室环境中常规使用允许分离和分析蛋白质分离和分析的时间测试的蛋白质印迹工作流程。对于该普遍工具来说，相对大量抗体的必要性是对该普遍工具的一个主要限制。本文提供了用于检测感兴趣的蛋白质的逐步方案，含有纳米凝胶体积抗体的溶液，而不改变前凝胶电泳和转移方法。讨论了重要的考虑因素，经常遇到的问题和优化再现性的方法。提供了互补图，图像和视频。使用0.3纳密的抗血清证明该方案以检测人包皮细胞系中的纤连蛋白。最后，报道了两种支持方案详述从培养细胞中提取蛋白质的方法。 2019年出版。本文是美国政府工作，并在美国的公共领域。

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