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Stabilization of Invertase by Molecular Engineering

机译：通过分子工程稳定转化酶

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Extracellular invertase (EC 3.2.1.26) of Saccharomyces cerevisiae was stabilized against thermal denaturation by intermolecular and intramolecular crosslinking of the surface nucle-ophilic functional groups with diisocyanate homobifunctional reagents (O=C=N (CH2)_n N=C=O) of various lengths (n = 4, 6, 8). Crosslinking with 1,4-diisocyanatobutane (n = 4) proved most effective in enhancing thermostability. Stability was improved dramatically by crosslinking 0.5 mg/mL of protein with 30 μmol/mL of the reagent. Molecular engineering by crosslinking reduced the first-order thermal denaturation constant at 60°C from 1.567 min~(-1) (for the native enzyme) to 0.437 min~(-1) (for the stabilized enzyme). Similarly, the best crosslinking treatment increased the activation energy for denaturation from 391 kJ mol~(-1) (for the native protein) to 466 kJ mol~(-1) (for the stabilized enzyme). Crosslinking was confirmed by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis.
机译：酿酒酵母的细胞外转化酶（EC 3.2.1.26）通过使用二异氰酸酯同双功能试剂（O = C = N（CH2）_n N = C = O）的表面亲核官能团的分子间和分子内交联而稳定，以防止热变性。各种长度（n = 4、6、8）。与1,4-二异氰酸根合丁烷（n = 4）的交联被证明对提高热稳定性最有效。通过将0.5 mg / mL的蛋白质与30μmol/ mL的试剂交联，可以显着提高稳定性。通过交联的分子工程将60°C时的一阶热变性常数从1.567 min〜（-1）（对于天然酶）降低到0.437 min〜（-1）（对于稳定化酶）。同样，最好的交联处理将变性的活化能从391 kJ mol〜（-1）（对于天然蛋白质）增加到466 kJ mol〜（-1）（对于稳定的酶）。通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳确认交联。

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