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首页> 外文期刊>Nature protocols erecipes for researchers >Live imaging and quantitative analysis of gastrulation in mouse embryos using light-sheet microscopy and 3D tracking tools
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Live imaging and quantitative analysis of gastrulation in mouse embryos using light-sheet microscopy and 3D tracking tools

机译：使用光片显微镜和3D跟踪工具对小鼠胚胎的胃形成进行实时成像和定量分析

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This protocol describes how to observe gastrulation in living mouse embryos by using light-sheet microscopy and computational tools to analyze the resulting image data at the single-cell level. We describe a series of techniques needed to image the embryos under physiological conditions, including how to hold mouse embryos without agarose embedding, how to transfer embryos without air exposure and how to construct environmental chambers for live imaging by digital scanned light-sheet microscopy (DSL M). Computational tools include manual and semiautomatic tracking programs that are developed for analyzing the large 4D data sets acquired with this system. Note that this protocol does not include details of how to build the light-sheet microscope itself. Time-lapse imaging ends within 12 h, with subsequent tracking analysis requiring 3-6 d. Other than some mouse-handling skills, this protocol requires no advanced skills or knowledge. Light-sheet microscopes are becoming more widely available, and thus the techniques outlined in this paper should be helpful for investigating mouse embryogenesis.
机译：该协议描述了如何通过使用光片显微镜和计算工具在单细胞水平上分析所得图像数据来观察活体小鼠胚胎中的胃形成。我们描述了在生理条件下对胚胎成像的一系列技术，包括如何在没有琼脂糖包埋的情况下容纳小鼠胚胎，如何在不暴露于空气的情况下转移胚胎，以及如何通过数字扫描光片显微镜（DSL）构造用于实时成像的环境室。 M）。计算工具包括手动和半自动跟踪程序，这些程序是为分析使用此系统获取的大型4D数据集而开发的。请注意，该协议不包括如何构建光片显微镜本身的详细信息。延时成像在12小时内结束，随后的跟踪分析需要3-6 d。除了某些鼠标处理技能外，此协议不需要任何高级技能或知识。光片显微镜正变得越来越广泛，因此，本文概述的技术应有助于研究小鼠的胚胎发生。

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