一种利用金色链霉菌生长期条件选育优胜菌株的方法

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其是一种利用金色链霉菌生长期条件选育优胜菌株的方法。

背景技术

金霉素(Chlortetracycline)，又称氯四环素，属四环素类中衍生物的一种。化学名：6-甲基-4-二甲氨基 -3，6，10，12，12a-五羟基-1，11-二氧代-7-氯-1，4，4a，5，5a，6，11，12a-八氢-2-并四苯甲酰胺。分子量：478.8； 分子式：C₂₂H₂₃ClN₂O₈。金霉素抗菌谱广，对阳性菌、阴性菌、螺旋体、立克次氏体、支原体、衣原体、 某些原虫等均可产生抑制作用。金霉素的抗菌作用主要在于抑制细菌的生长，在其较高浓度时具有杀菌作 用，其作用机制是干扰蛋白质的合成。适用于鸡白痢、伤寒、猪细菌性肠炎以及禽类副伤寒、霍乱等疾病。 同时，作为理想的饲料添加剂它还具有预防潜在感染、改善消化代谢、抑制肠道内有害微生物，促进有益 微生物生长、提高饲料效能等。在全球范围内，金霉素是所有饲料药物添加剂中使用量最大的品种，是国 际上重要的兽用抗生素之一。

金色链霉菌(Streptomyces aureofaciens)为链霉菌科，链霉菌属，孢子丝长，5-8圈螺旋形。孢子呈球 形、卵圆形、长圆形，表面略崎岖不平。菌落呈金黄色。在30℃以下时，合成金霉素的能力较强，当温度 超过35℃时，则只合成四环素而不合成金霉素。

菌种保藏的目的在于尽可能保持其原有性状和活力的稳定，确保菌种不死亡、不变异、不被污染，以 便于研究、交换和使用。在实际生产实践过程中，菌种经过长期人工培养或保藏，由于自发突变的作用而 出现负突变引起某些优良特性变弱或消失，这种变异的结果往往导致菌种的退化，而金色链霉菌生产过程 中的自然变异往往会出现正突变，产生优良菌株。

发明内容

本发明的目的在于利用金色链霉菌生长期条件选育优胜菌株，提供一种以微生物的自然突变为基础的 菌种选育方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

(1)生产前期发酵液培养；

(2)平皿分离培养；

(3)挑单菌落接种试管斜面培养；

(4)摇瓶初筛、复筛，效价鉴定；

(5)砂土管保存；

(6)生产应用；

本发明的优点和有益效果为：

1、本发明利用生产前期的金色链霉菌，通过平皿分离培养、试管斜面培养、摇瓶初复筛得到优胜菌 株，应用生产，提高效价和产量，具有显著的经济效益。同时，为菌种选育提供新的思维方式和方法。

2、本发明确定了利用金色链霉菌生产前期条件筛选优胜菌株的方法和条件，为进一步研究和开发生 产资源，以及在满足畜牧业需求、促进饲料工业发展等方面提供重要的现实意义。

具体实施方式

下面结合实施例，对本发明进一步说明，下述实施例是说明性的，不是限定性的，不能以下述实施例 来限定本发明的保护范围。

实施例1：

一种利用金色链霉菌生长期条件选育优胜菌株的方法，其步骤为：

(1)选取生产至29h的金色链霉菌发酵液，接种至分离平皿。

(2)平皿分离培养：32℃条件下培养3-5天至成熟备用。

(3)试管斜面培养：从培养好的平皿中挑取单菌落，接种试管斜面，32℃，培养3-5天。

(4)摇瓶初筛、复筛，效价鉴定：将试管斜面接种至摇瓶种子培养基，28℃下培养17h，接种摇瓶发 酵培养基，28℃，培养7天，测效价，挑选本批效价/正常生产效价≥105％或接近105％的菌株进行复筛。

(5)砂土管保存。

(6)生产应用：将RC2-196应用于生产中，最终效价和总亿分别比正常生产批次提高了5％和16％。

实施例2：

一种利用金色链霉菌生长期条件选育优胜菌株的方法，其步骤为：

(1)选取生产至29h的金色链霉菌发酵液，接种至分离平皿。

(2)平皿分离培养：32℃条件下培养3-5天至成熟备用。

(3)试管斜面培养：从培养好的平皿中挑取单菌落，接种试管斜面，32℃，培养3-5天。

(4)摇瓶初筛、复筛，效价鉴定：将试管斜面接种至摇瓶种子培养基，28℃下培养17h，接种摇瓶发 酵培养基，28℃，培养7天，测效价，挑选本批效价/正常生产效价≥105％或接近105％的菌株进行复筛。

(5)砂土管保存。

(6)生产应用：将RC2-185应用于生产中，最终效价和总亿分别比正常生产批次提高了6％和1％。