皮肤疤痕治疗用药物组合物及利用其的皮肤疤痕治疗方法

技术领域

本发明涉及包含肉毒杆菌毒素与空气的混合物的皮肤疤痕治疗用药物组合物以 及利用其的皮肤疤痕治疗方法。

背景技术

皮肤保护身体器官免受外部环境的威胁并起到维持体温的自动温度调节装置的 作用。皮肤由多个不同的层构成，各层具有特定的功能。主要的层包括表皮、真皮 和皮下组织。表皮是覆盖由结缔组织构成的真皮的上皮细胞形成的层叠层。表皮和 真皮均由作为脂肪组织的内部层的皮下组织而进一步支撑。

作为皮肤的最上层的表皮的厚度只有0.1至1.5毫米（Inlander,Skin,New York, NY：People's Medical Society,1-7（1998））。表皮由角质形成细胞构成，根据它们 的分化状态分成多层。表皮可以进一步分成角质层和由颗粒细胞、棘（melphigian） 细胞和基底细胞构成的活性表皮层（viable epidermis）。角质层吸收水分，为了维持 其柔软性和细腻性，需要10重量%以上的水分。吸湿性部分地来自角质蛋白的锁水 能力。如果角质层丧失其细腻性和柔软性，则容易变粗糙并碎裂，从而导致干燥的 皮肤。存在于表皮正下方的真皮的厚度为1.5至4毫米。真皮在皮肤的三个层中最 厚。另外，真皮是包括汗腺和油线（通过被称为粉刺或毛孔的皮肤的开口部而分泌 物质）、毛根、神经末端以及血管和淋巴管的皮肤的大部分结构物存在的部分 （Inlander,Skin,New York,NY：People's Medical Society,1-7（1998））。但是真皮的 主要成分是胶原蛋白和弹性蛋白。皮下组织是皮肤的最深部层。皮下组织起到维持 体温的绝缘层和用于保护器官的冲击吸收层的作用（Inlander,Skin,New York,NY： People's Medical Society,1-7（1998））。另外，皮下组织为了储备能量而储藏脂肪。 皮肤的pH在正常状态下为5与6之间。皮肤的酸性是由于来自皮脂腺的分泌物两 性氨基酸、乳酸和脂肪酸的存在引起的。所谓“酸性外膜（mantle）”的用语是意味 着存在于皮肤的大部分区域的水溶性物质的存在。皮肤的缓冲能力部分地由皮肤的 角质层所储藏的该分泌物而引起。

肉毒杆菌毒素（也成为肉杆菌毒素或肉毒杆菌神经毒素）是由属于革兰氏阳性 菌的肉毒梭状芽孢杆菌（Clostridium botulinum）生成的神经毒素。肉毒杆菌毒素阻 碍通过神经肌肉接头（neuromuscular junction）的乙酰胆碱的突触传递或释放而起到 肌肉麻痹的作用，另外，认为还以其他方式发挥作用。它们的作用从根本上切断正 常诱发肌肉痉挛或收缩的信号而导致麻痹。肉毒杆菌毒素与血清相关（serologically  related），被分为不同的8种神经毒素。其中，7种，即，肉毒杆菌神经毒素血清型 A、B、C、D、E、F和G能够诱发麻痹。它们分别由利用血清型-特异性抗体的中和 而区分。即便如此，这样的7种活性肉毒杆菌毒素血清型的肉毒杆菌毒素蛋白质的 分子量均为约150kD。由细菌分泌的肉毒杆菌毒素是包含与150kD肉毒杆菌毒素蛋 白质分子相关的非-毒素蛋白质的复合体。肉毒杆菌毒素A型复合体可以通过肉毒梭 状芽孢杆菌以900kD、500kD和300kD形态生成。肉毒杆菌毒素B型和C型从表面上 看只生成700kD或500kD复合体。肉毒杆菌毒素D型生成300kD和500kD复合体。 肉毒杆菌毒素E型和F型只生成约300kD复合体。复合体被认为（即，大于约150kD 的分子量）包括非毒素的血凝素蛋白质和非毒素且无毒性的不是血凝素的蛋白质 （non-toxin and nontoxic nonhematoglutinin）。这样的2种非毒素蛋白质在摄取毒素的 情况下，能够为了对肉毒杆菌毒素分子提供对变性的稳定性和对消化性酸（digestive  acid）的保护而发挥作用。另外，更大（分子量大于约150kD）的肉毒杆菌毒素复 合体能够使肉毒杆菌毒素从肉毒杆菌毒素复合体的肌肉内注射部位扩散的速度变得 更慢。肉毒杆菌毒素的不同的血清型在它们造成影响的动物种类以及它们诱发的麻 痹的严重程度和持续时间方面有不同。例如，肉毒杆菌毒素A型利用对鼠引起的麻 痹率进行测定时比肉毒杆菌毒素B型强500倍。另外，确认了肉毒杆菌毒素B型在对 于A型的灵长类的LD₅₀的约12倍的480U/kg的给药量下对灵长类无毒性。由于肉毒 杆菌毒素的分子大小和分子结构，肉毒杆菌毒素无法通过角质层和下部皮肤架构 （underlying skin architecture）的多个层。

肉毒杆菌毒素A型被认为是人们已知的最致命的天然生物作用剂。C.肉毒杆菌 的孢子在土壤中被发现，可以在灭菌不当而密封的食品容器中生长。该细菌的摄取 能够诱发可致命的肉毒杆菌中毒症。

另一方面，疤痕是指损伤的皮肤治愈的痕迹，特别是凹陷疤痕是指表皮损伤后 真皮的缺损或纤维化等皮肤的病理学反应。对其的治疗方法有利用激光或各种化学 物质或磨皮机（dermabrator）剥皮至缺损部位的皮肤层的方法、或用真皮内切除术 （subcision：将真皮下部拆上来的方法）提高缺损的疤痕的高度的方法。但是，剥皮 术的情况下，对日常生活有很多影响，使疤痕填满的效果降低，真皮内切除术由于 疤痕边界的粘连的纤维化而精确地对齐疤痕的高度的效果降低，因此手术后在美容 方面难以令人满意。

肉毒杆菌毒素具有肌肉麻痹效果，因此为了对包括面部痉挛、成人发病性挛缩 斜颈、肛裂、眼脸痉挛、脑性麻痹、颈部肌紧张异常、偏头痛、斜视、腭关节障碍、 以及各种种类的肌肉痉挛和发作的各种疾病实现治疗效果而利用。在近来，肉毒杆 菌毒素的肌肉麻痹效果在皱纹、眉间纹以及其它面部肌肉的痉挛或收缩的治疗等治 疗以及面部整形应用中活用。但是，几乎没有对于利用肉毒杆菌毒素治疗疤痕的研 究的报道，特别是对于将肉毒杆菌毒素制备成混合物的形态，并将其利用特异的方 法注入皮肤，从而能够有效改善皮肤疤痕疾病的方法没有报道。

因此，如果能够利用用于各种疾病治疗的肉毒杆菌毒素来改善现有的疤痕治疗 方法的问题，则能够有效地用于皮肤疤痕的治疗，因此迫切需要对于利用肉毒杆菌 毒素的新的疤痕治疗用组合物及治疗方法的研究。

发明内容

发明目的

本发明的发明人对利用肉毒杆菌毒素的皮肤疤痕治疗方法进行了研究的过程 中，确认了将肉毒杆菌毒素与空气进行混合并注入真皮，则能够消除真皮的弹性， 使凹陷的疤痕部位变平，能够非常有效地增加皮肤疤痕治疗效果，从而完成了本发 明。

本发明的目的是提供包含肉毒杆菌毒素与空气的混合物的皮肤疤痕治疗用药物 组合物以及利用其的皮肤疤痕治疗方法。

技术方案

为了实现上述目的，本发明提供包含肉毒杆菌毒素与空气的混合物的皮肤疤痕 治疗用药物组合物。

另外，本发明提供将上述组合物注入真皮而实施的皮肤疤痕治疗方法。

有益效果

根据本发明的肉毒杆菌毒素与空气的混合物注入真皮时，使真皮的弹性暂时消 除，疤痕凹陷部位变平，从而能够精确地进行真皮内切除，提高脉冲染料激光或点 阵激光的治疗效果，能够对日常生活没有影响地仅通过一次的手术有效地改善疤痕。

附图说明

图1是表示对手术前（A）和注入本发明的组合物后进行一次真皮内切除术（B） 后、经过6个月后的疤痕的改善效果进行比较的示意图。

图2是表示对手术前（A）和注入本发明的组合物后进行3次真皮内切除术（B） 后的疤痕的改善效果进行比较的示意图。

图3是在1名患者的左侧和右侧面部选定5个部位的凹陷疤痕部位而表示的图。

图4是对根据肉毒杆菌毒素与空气混合比（1：1、1：2、1：3的体积比）的皮 肤疤痕的改善效果进行比较的示意图。

具体实施方式

本发明提供，包含肉毒杆菌毒素与空气的混合物的皮肤疤痕治疗用药物组合物。

上述肉毒杆菌毒素与空气的混合物注入真皮时，使真皮的弹性暂时消除，疤痕 凹陷部位变平，从而能够精确地进行真皮内切除，提高脉冲染料激光或点阵激光的 治疗效果，能够对日常生活没有影响地仅通过一次的手术有效地改善疤痕。

在本发明中“肉毒杆菌毒素”是指具有肉毒杆菌毒素的生物学活性的分子，可以 是蛋白质、多肽、肽、融合蛋白质、剪切的（truncated）蛋白质、嵌合蛋白质、突 变蛋白质或重组蛋白质。

上述毒素的生物活性是指在本发明的主旨内的肌肉麻痹或胞外分泌，特别是乙 酰胆碱或其他神经阻断物质的胞外分泌的抑制。

纯的或实质上纯的肉毒杆菌神经毒素，可以根据例如文献[Corrent topics in  Microbiology and Immunology（1995）,195,p.151-154]中记载的方法由包含肉毒杆菌 毒素的蛋白质复合体获得。纯的或实质上纯的肉毒杆菌神经毒素可以通过例如包含 肉毒梭状芽孢杆菌（Clostridium botulinum）菌株的发酵培养基或培养肉汤（broth） 的纯化而获得，例如可以利用肉或蛋白质丰富的食品使其丰富。

上述肉毒杆菌毒素可以在根据血清型的血清型A、B、C、D、E、F和G中选 择1种以上，可以包括肉毒杆菌神经毒素A型中市售的或等，不受 限制。也可以包括市售的肉毒杆菌毒素B型的Myobloc

上述肉毒杆菌毒素与空气能够以1：0.1至1：10的体积比混合而构成皮肤疤痕 治疗用药物组合物，优选以1：2至1：4的体积比混合。

本发明的组合物能够以用于疤痕治疗的多种形态利用，能够出于消除真皮的弹 性并使疤痕凹陷部位变平的目的而用于真皮内切除术预处理。

本发明的组合物还可以包含在药物组合物的制备中通常使用的适当的载体、赋 形剂和稀释剂。

本发明的组合物能够制成液剂、气溶胶剂、灭菌注射溶液形态的剂型而使用， 但最优选将肉毒杆菌毒素与空气的混合物制成气溶胶形态的剂型而使用。将上述组 合物制成制剂时，可以使用通常使用的填充剂、增量剂、粘结剂、湿润剂、崩解剂、 表面活性剂等稀释剂或赋形剂。

本发明的组合物可选地还可以包含分散剂。如本说明书中使用的那样，分散剂 是具有对肉毒杆菌毒素和本发明的载体不需要或不能抑制的凝集进行防止或最小化 的特性的任意物质或添加剂。例如，分散剂仅在由于容量限制而只能采用浓缩的肉 毒杆菌毒素溶液的情况下有用。在这种情况下，分散剂使肉毒杆菌毒素以分散的状 态存在，从而防止如果没有分散剂则会发生的毒素的凝集。一般来说，分散剂（1） 无刺激性，（2）不破坏肉毒杆菌毒素，（3）不带来透过性的增加，（4）具有可靠且 稳定的粒子大小，（5）不带电荷，（6）不妨碍毒素和经皮用载体的复合体。

本发明的注入意味着以任意的适当的方法对个体提供预定量的本发明的组合 物。

本发明的药物组合物优选给药量根据患者的疤痕状态以及体重、疾病的程度、 药物形态、给药途径以及时间而不同，但本领域技术人员能够适当选择。为了优选 的效果，本发明的组合物在注入1次时，以肉毒杆菌毒素A型为基准，可以以0.1 单位（unit）至3000单位的量进行给药，优选以1单位至10单位的量进行给药。 上述组合物的给药可以一天给药一次，也可以分数次给药。

本发明的组合物可以为了皮肤疤痕的治疗而单独使用，或与手术、放射治疗、 激素治疗、化学治疗以及使用生物反应调节剂的方法并用，优选对真皮并用脉冲染 料激光（pulsed dye laser）或点阵激光、真皮内切除术（subcision）。

另外，本发明提供气溶胶喷射试剂盒，其中，包含将上述组合物制成气溶胶形 态的剂型的组合物。

本发明还包括如下的试剂盒，其中，包含用于向皮肤注入肉毒杆菌毒素的装置 和载体，还包含适合应用于受试者的皮肤或上皮的液体、凝胶、膏等。本发明的组 合物进行给药的试剂盒根据医疗专家的指导或者由患者或受试者，还可以包括适合 其目的的配套涂敷器（custom applicator）。

另外，本发明提供皮肤疤痕治疗方法，其中，包括：

（1）将肉毒杆菌毒素与空气的混合物通过28G至31G注射针注入真皮而消除伤 痕部位真皮的弹性的步骤；以及

（2）对上述（1）步骤的消除了弹性的真皮进行选自真皮内切除术，脉冲染料激 光或点阵激光中的1种以上的手术的步骤。

对本发明的方法，按步骤更详细地进行说明。

上述（1）步骤涉及注入肉毒杆菌毒素与空气的混合物而消除伤痕部位真皮的弹 性的步骤，对受试者的皮肤疤痕凹陷部位注入将肉毒杆菌毒素与空气以1：0.1至1： 10的体积比，优选地以1：2至1：4的体积比混合的混合物而构成。

上述注入可以利用28G至31G注射针将上述混合物对真皮进行给药而构成，优 选通过31G的注射针喷射混合物，可以根据伯努利的流体力学法则以非常强的压力 对疤痕部位进行喷射而注入。另外，作为注射针，可以使用28G至31G的BD胰岛 素注射器。

上述喷射优选以气溶胶形态进行喷射。

上述（2）步骤是注入肉毒杆菌毒素与空气的混合物后，进一步进行选自真皮内 切除术、脉冲染料激光或点阵激光中的1种以上的手术的步骤。

上述真皮内切除术对通过（1）步骤的混合物的注入而暂时消除弹性的真皮进行， 从而能够更精确地对准疤痕的高度。

上述脉冲染料激光或点阵激光能够与肉毒杆菌毒素与空气混合物的治疗效果一 同对疤痕治疗显示出协同作用。

以下，通过制备例和实施例详细说明本发明。但是，下述制备例和实施例仅作 为例示本发明，本发明的内容不被下述制备例和实施例所限定。

实施例1.混合了肉毒杆菌毒素与空气的组合物的制备

在装有肉毒杆菌毒素A1型的肉毒杆菌50U的瓶中注入生理盐水10CC而进行 稀释，制备0.5U/CC的肉毒杆菌毒素溶液。将制备的肉毒杆菌毒素溶液分别注入 BD Ultra-Fine^TM II Short Needle Insulin Syringe3/10cc31Gx8mm（5/16in）注射器，在 该注射器中填充普通空气来制备肉毒杆菌毒素与空气的混合物。此时，将肉毒杆菌 毒素与空气的混合比分别以1：1、1：2、1：3、1：4的体积比进行区分而制备。

为了比较上述制备的组合物的疤痕改善效果，在以后的实施例中设定了不包含 肉毒杆菌毒素的普通空气注入组、不包括空气的肉毒杆菌毒素注入组作为对照组。

实施例2.皮肤疤痕的改善确认

将上述实施例1中制备的组合物（将肉毒杆菌毒素0.03cc、空气0.12cc混合而 组成）对实际具有疤痕的5名患者的真皮进行给药，进行真皮内切除术，确认皮肤 疤痕的改善效果。真皮内切除术进行1次或3次，将手术后经过6个月后的皮肤疤 痕的样子与手术前的皮肤疤痕进行比较。

将结果示于图1和图2。

如图1和图2所示，进行根据本发明的疤痕治疗的结果，具有皮肤疤痕的所有 患者均显示显著的疤痕改善效果，特别是仅通过1次手术也显示出80%以上的治疗 满意度，从而显示出患者的满意度非常大。

实施例3.根据肉毒杆菌毒素与空气的混合比的皮肤疤痕的改善效果比较

为了将上述实施例2中用肉眼确认的皮肤疤痕的改善效果用数值进行确认，将 不包含肉毒杆菌毒素的单纯空气、不包括空气的肉毒杆菌毒素以及肉毒杆菌毒素与 空气分别以1：1、1：2和1：3的体积比混合的制剂注入患者的萎缩性疤痕，利用 脉冲染料激光和点阵激光进行治疗。更具体而言，为了消除根据个人的疤痕恢复能 力差异的分析误差，在1名患者的左侧和右侧面部选定5个凹陷疤痕部位（图3） 后，对相应部位分别注入上述混合制剂，将疤痕的改善效果数值化。为了将凹陷疤 痕的改善程度数值化，利用将面部表面进行3维分析并以数值进行测量的3D LifeViz  II^TM（Quantificare,France）。

将结果示于图4和表1。

【表1】

如图4所示，利用3D LifeViz II^TM能够确认作为对照组的仅注入了空气的凹陷 疤痕数值与注入了肉毒杆菌毒素与空气的混合物的凹陷疤痕部分的体积差异（图 4）。特别是如表1所示，将肉毒杆菌毒素与空气分别以1：1、1：2和1：3混合的 制剂与对照组的凹陷疤痕的填满的程度以体积增加比进行比较，结果作为对照组的 肉毒杆菌毒素单独给药组与空气单独给药组的体积增加比分别为1.0、1.1，几乎没 有凹陷疤痕的改善效果，相反地，混合了肉毒杆菌毒素与空气的制剂的情况下，体 积增加比显示出1.5倍至3.5倍，凹陷疤痕在短期内非常迅速地填满，从而可以确认 具有非常有效的疤痕改善效果。

下面例示用于本发明的组合物的制剂例。

制剂例1.药物组合物

1.1注射剂的制备

本发明的肉毒杆菌毒素与空气的混合物10mg

甘露醇180mg

注射用灭菌蒸馏水2974mg

Na₂HPO₄.2H₂O26mg

按照通常的注射剂的制备方法以每瓶安瓿（2ml）为上述成分含量进行制备。

1.2液剂的制备

本发明的肉毒杆菌毒素与空气的混合物10mg

异构糖10g

甘露醇5g

纯净水适量

根据通常的液剂的制备方法，在纯净水中加入各成分使其溶解并加入适量柠檬香后， 混合上述成分，然后加入纯净水，将总体调节成在加入纯净水后总体为100ml，然 后填充在棕瓶中，进行灭菌，制备液剂。