一种制备愈创木基丙三醇-(8-O-4’)-愈创木基丙三醇的方法

技术领域

本发明属于天然产物领域，具体涉及一种从荔枝叶中制备分离得到愈创木基丙三醇-(8-O-4’)-愈创木基丙三醇的方法。 

发明背景 

荔枝属于无患子科，素有“岭南果王”之称，是广东四大名果之一。荔枝香甜可口，营养价值和保健功能较高，是传统的保健食品，深受广大消费者的喜爱。我国是世界上最早栽培荔枝的国家，历史悠久；也是世界上荔枝产量最大的国家，品种繁多。荔枝叶为荔枝树的枝叶，全年可采，资源丰富。研究发现，荔枝核和荔枝壳中富含黄酮类化合物，具有抗氧化、抗癌、降血糖等生物活性，然而目前外关于荔枝叶活性成分的研究极为有限，相关活性物质组成仍有待研究。 

愈创木基丙三醇-(8-O-4’)-愈创木基丙三醇，其结构式如式(Ⅰ)所示： 

发明内容

本发明的目的是提供一种制备愈创木基丙三醇-(8-O-4’)-愈创木基丙三醇的方法。 

本发明的制备愈创木基丙三醇-(8-O-4’)-愈创木基丙三醇的方法，其特征在于，包括以下步骤：用体积分数40～100％甲醇或乙醇水溶液浸提荔枝叶，将浸提液浓缩去除甲醇或乙醇 后用水溶解，再先后分别用石油醚、乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯相浓缩得浸膏，浸膏经硅胶柱层析，以氯仿/甲醇为洗脱剂，从体积比100/0～60/40梯度洗脱，收集氯仿/甲醇体积比为85/15洗脱的馏分，该馏分再经过SephadexLH-20柱层析，甲醇作为洗脱溶剂，收集组分利用高效液相色谱纯化，用甲醇-水从体积比5/95～15/85梯度洗脱，收集甲醇/水体积比为15/85洗脱的组分，即可得到愈创木基丙三醇-(8-O-4’)-愈创木基丙三醇。 

所述的荔枝叶优选为荔枝叶粉末，进一步优选是将新鲜的荔枝叶晒干或烘干后，粉碎过20～120目筛的荔枝叶粉末。 

所述的用体积分数40～100％甲醇或乙醇水溶液浸提荔枝叶，甲醇或乙醇水溶液的用量是5～20mL/g荔枝叶，浸提的温度优选为25～80℃，浸提时间为4～35小时。 

所述的将浸提液浓缩去除甲醇或乙醇后用水溶解，优选是将浸提液在40～80℃下浓缩除去甲醇或乙醇，再加入1～3倍体积的水溶解。 

所述的先后分别用石油醚、乙酸乙酯萃取，优选是先用石油醚萃取3～12次，再用乙酸乙酯萃取3～12次。 

本发明还提供了荔枝叶在制备愈创木基丙三醇-(8-O-4’)-愈创木基丙三醇中的应用。 

本发明从荔枝叶中制备分离得到愈创木基丙三醇-(8-O-4’)-愈创木基丙三醇，其产率为10～56mg/kg(纯度为85～95％)。本发明对于推动荔枝的深加工利用，提升荔枝产品附加值，促进该行业的可持续发展具有重要的意义。同时也为愈创木基丙三醇-(8-O-4’)-愈创木基丙三醇的制备提供了一种新的方法。 

具体实施方式：

以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。 

实施例1：愈创木基丙三醇-(8-O-4’)-愈创木基丙三醇制备分离和结构鉴定。 

一、愈创木基丙三醇-(8-O-4’)-愈创木基丙三醇的制备分离 

1)选料：选择新鲜荔枝叶，清水洗涤； 

2)干燥粉碎：将荔枝叶晒干或烘干，采用粉碎机粉碎成粉末，过20目筛，获得荔枝叶粉末； 

3)浸提：将荔枝叶粉末加入5倍体积(即5mL/g荔枝叶粉末)的体积分数40％的甲醇水溶液中，在80℃浸提4小时，过滤，收集过滤液； 

4)有机溶剂分级：将上述过滤液在40℃下浓缩除去甲醇，加入其1倍体积的水，先后用等体积的石油醚、乙酸乙酯分别萃取3次；选择乙酸乙酯相萃取液浓缩得浸膏用于后续纯化。 

5)取乙酸乙酯相萃取液的浸膏(200g)，采用硅胶柱(100～200目)层析，以氯仿/甲醇为洗脱溶剂，从体积比100/0～60/40梯度洗脱，收集氯仿/甲醇体积比为85/15洗脱的馏分，该馏分再经过SephadexLH-20柱层析，甲醇作为洗脱溶剂，收集主要组分利用高效液相色谱经过C18柱纯化，甲醇-水(5:95～15:85)梯度洗脱，收集甲醇/水体积比为15/85洗脱的组分，在60℃蒸发浓缩干燥，即可得到化合物1(愈创木基丙三醇-(8-O-4’)-愈创木基丙三醇)。 

采用该方法获得的愈创木基丙三醇-(8-O-4’)-愈创木基丙三醇产率为10～29mg/kg，纯度为85～95％。 

二、化合物1(愈创木基丙三醇-(8-O-4’)-愈创木基丙三醇)的结构鉴定 

化合物1(愈创木基丙三醇-(8-O-4’)-愈创木基丙三醇)可溶于甲醇，质谱结果表明该化合物分子量为410。该化合物的¹H NMR(500MHz,CD³OD)和¹³C NMR(125MHz,CD₃OD)见表1： 

表1.愈创木基丙三醇-(8-O-4’)-愈创木基丙三醇的¹³C与¹H谱化学位移 

综上所述，鉴定该化合物的结构式如式(Ⅰ)所示，名称为：愈创木基丙三醇-(8-O-4’)-愈创木基丙三醇，该化合物易溶于甲醇。 

实施例2： 

1)选料：选择新鲜荔枝叶，清水洗涤； 

2)干燥粉碎：将荔枝叶晒干或烘干，采用粉碎机粉碎成粉末，过120目筛，获得荔枝叶粉末； 

3)浸提：将荔枝叶粉末加入20倍体积(即20mL/g荔枝叶粉末)的体积分数为90％甲醇溶液，在室温浸提35小时，过滤，收集滤过液； 

4)有机溶剂分级：将上述滤过液在60℃浓缩除去甲醇，加入其3倍体积的水，先后用等体积的石油醚、乙酸乙酯分别萃取12次；选择乙酸乙酯相萃取液浓缩后得浸膏用于后续纯化。 

后续纯化步骤与实施例1相同，由此得到化合物并鉴定为愈创木基丙三醇-(8-O-4’)-愈创木基丙三醇。 

采用该方法获得的愈创木基丙三醇-(8-O-4’)-愈创木基丙三醇产率为32～56mg/kg，纯度均为85～95％。 

实施例3： 

1)选料：选择新鲜荔枝叶，清水洗涤； 

2)干燥粉碎：将荔枝叶晒干或烘干，采用粉碎机粉碎成粉末，过60目筛，获得荔枝叶粉末； 

3)浸提：将荔枝叶粉末加入10倍体积(即10mL/g荔枝叶粉末)的体积分数为40％乙醇水溶液，在50℃浸提20小时，过滤，收集滤过液； 

4)有机溶剂分级：将上述滤过液在60℃浓缩除去乙醇，加入其2倍体积的水，先后用等体积的石油醚、乙酸乙酯分别萃取6次；选择乙酸乙酯相萃取液浓缩后得浸膏用于后续纯化。 

后续纯化步骤与实施例1相同，得到化合物并鉴定为愈创木基丙三醇-(8-O-4’)-愈创木基丙三醇。 

采用该方法获得的愈创木基丙三醇-(8-O-4’)-愈创木基丙三醇的产率为26～42mg/kg，纯度均为85～95％。 

实施例4： 

1)选料：选择新鲜荔枝叶，清水洗涤； 

2)干燥粉碎：将荔枝叶晒干或烘干，采用粉碎机粉碎成粉末，过60目筛，获得荔枝叶粉末； 

3)浸提：将荔枝叶粉末加入10倍体积(即10mL/g荔枝叶粉末)的体积分数100％乙醇溶液，在25℃浸提15小时，过滤，收集滤过液； 

4)有机溶剂分级：将上述滤过液在70℃浓缩除去乙醇，加入1倍体积的水，先后用与等体积的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取6次；选择乙酸乙酯相萃取液浓缩后得浸膏用于后续纯化。 

后续纯化步骤与实施例1相同，得到化合物并鉴定为愈创木基丙三醇-(8-O-4’)-愈创木基丙三醇。 

采用该方法获得的愈创木基丙三醇-(8-O-4’)-愈创木基丙三醇的产率为22～39mg/kg，纯度均为85～95％。