一种以金福菇为原料提取分离金福菇多糖TLH-3的方法

一、技术领域

本发明涉及一种食用菌的加工方法，具体地说是一种以金福菇为原料提取分离金福菇多糖TLH-3的方法。

二、背景技术

金福菇(Tricholoma lobayense Heim)又称为巨大口蘑、大白口蘑、洛巴伊口蘑，日本称白色松茸，是一种珍贵的天然保健食品和高品位的食用菌，其多糖和蛋白聚糖具有免疫调节和抗肿瘤的活性。

闪式提取技术是通过破碎组织来提取所需成分的一种新型高效的提取技术，与常规提取方法相比，该方法具有低温、快速、高效的优点。季铵盐沉淀法是多糖纯化的方法之一，季铵盐可与酸性糖形成不溶性沉淀，常用于酸性多糖的分离。该方法操作简便，处理量大，无需其它有机试剂。膜技术是一项新兴的用于澄清、分离、除菌和浓缩等方面的绿色和节能技术，具有操作简单、节能、无污染、可在常温下连续操作等优点，广泛用于化工、食品、生物、制药等领域。

金福菇主要含有三个多糖组分，中性糖TLH-1、酸性糖TLH-2和TLH-3，其中TLH-3的分子量为4.22×10³Da，其抗氧化活性和抗坏血酸相当，可作为天然无毒抗氧化剂，应用于食品、医药和化妆品等领域。

多糖的分离纯化大多采用传统的水提醇沉法，需要二次提取，提取时间长，除蛋白的过程繁琐且时间较长，能耗大。CN102603908A公开了一种天然抗氧化剂金福菇多糖的制备方法，该方法利用水提醇沉法提取金福菇多糖，将金福菇多糖加热浸提2-4小时，醇沉过夜，该工艺提取时间长，高温提取对多糖结构造成破坏；柱层析法分离纯化得到TLH-3，该方法首先采用经过DEAE-Sephorase F.F凝胶柱纯化，然后用Superdex200层析柱分离得到TLH-3，整个过程需要2-3天，该工艺耗时长，效率差，步骤繁琐，金福菇多糖TLH-3的得率低，成本高，不能进行工业化生产。

三、发明内容

本发明旨在提供一种以金福菇为原料提取分离金福菇多糖TLH-3的方法，所要解决的技术问题是降低提取温度并提高提取效率，提高金福菇多糖TLH-3的得率和纯度。

本发明采用闪式提取技术提取金福菇多糖TLH-3，并将季铵盐沉淀法与超滤技术联用，制备工艺简单易行，效率高，整个操作过程温度不超过40℃，金福菇多糖TLH-3的得率和纯度较高，适宜于工业化生产。

本发明以金福菇为原料提取分离金福菇多糖TLH-3的方法，操作步骤如下：

(1)将金福菇放入闪式提取器中，加入20-40质量倍的水，常温下提取30-45s，提取电压为100-130V；

(2)将步骤(1)得到的提取液用离心分离或减压抽滤的方式去除颗粒性杂质，收集上清液；

(3)将步骤(2)得到的上清液加入质量浓度1-10％的十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)溶液中，静置1.0-1.5h，离心并收集沉淀物，将所得沉淀物用质量浓度10％的NaCl溶液溶解，得到酸性亚组分溶液；

(4)将步骤(3)得到的酸性亚组分溶液在25-35℃下通过1000-1500道尔顿的超滤膜脱盐，超滤驱动压力为0.10-0.18MPa；然后在25-35℃下用1-10万道尔顿的超滤膜进行超滤，超滤驱动压力0.10-0.18MPa，滤出液于-50℃冷冻干燥后得到金福菇多糖TLH-3。

本发明使用的金福菇可以是金福菇干粉也可以是新鲜的金福菇。本发明所用试剂和原料均市售可得。

纯品鉴定：将本发明得到的金福菇多糖TLH-3样品用高压液相色谱仪检测纯度，色谱条件：分析柱TSK-GEL G4000PWX(Tosoh Corporation，Tokyo，Japan)；柱温35℃；流动相：蒸馏水；流速：1mL/min；检测器为蒸发光散射检测器；上样量为10μL。色谱图见图1。

本发明得到的金福菇多糖TLH-3与CN102603908A公开的一种天然抗氧化剂金福菇多糖的制备方法中的TL-3从理化性质和活性上分析为同一个多糖。

本发明以金福菇为原料，利用闪式提取技术，快速、高效的提取金福菇多糖TLH-3，然后利用季铵盐沉淀法和超滤技术进行多糖纯化。本发明方法步骤简便、易于操作，金福菇多糖TLH-3的提取率为5％以上，产品纯度高达90％以上，整个工艺完成时间小于5小时，大大提高了生产效率，降低了能耗，属于典型的绿色环保工艺。本发明整个工艺过程不超过40℃，金福菇多糖TLH-3的得率高，药理效果强，适宜于工业化生产，所得产品市场前景十分看好，经济效益广阔。

四、附图说明

图1为本发明提取得到的金福菇多糖TLH-3的高压液相色谱图。

五、具体实施方式

实施例1：

本实施例中以金福菇为原料提取分离金福菇多糖TLH-3的方法如下：

(1)将金福菇放入闪式提取器中，加入20质量倍的水，常温下提取30s，提取电压为100V；

(2)将步骤(1)得到的提取液离心分离，收集上清液；离心分离的参数为：离心转速为3800r/min，离心时间为22min；

(3)将步骤(2)得到的上清液加入质量浓度3％的CTAB溶液中，静置1.0h，离心并收集沉淀物，将所得沉淀物用质量浓度10％的NaCl溶液溶解，得到酸性亚组分溶液；

(4)将步骤(3)得到的酸性亚组分溶液在25℃下用1000道尔顿的超滤膜进行超滤脱盐，超滤驱动压力0.10MPa；然后在25℃下用1万道尔顿的超滤膜进行超滤，超滤驱动压力0.10MPa，滤出液于-50℃冷冻干燥后得到金福菇多糖TLH-3。

本实施例得到的金福菇多糖TLH-3的提取率为5.3％，纯度达到92％。

实施例2：

本实施例中以金福菇为原料提取分离金福菇多糖TLH-3的方法如下：

(1)将金福菇放入闪式提取器中，加入30质量倍的水，常温下提取35s，提取电压为110V；

(2)将步骤(1)得到的提取液离心分离，收集上清液；离心分离的参数为：离心转速为4000r/min，离心时间为20min；

(3)将步骤(2)得到的上清液加入质量浓度5％的CTAB溶液中，静置1.2h，离心并收集沉淀物，将所得沉淀物用质量浓度10％的NaCl溶液溶解，得到酸性亚组分溶液；

(4)将步骤(3)得到的酸性亚组分溶液在30℃下用1200道尔顿的超滤膜进行超滤脱盐，超滤驱动压力0.13MPa；然后在30℃下用3万道尔顿的超滤膜进行超滤，超滤驱动压力0.13MPa，滤出液于-50℃冷冻干燥后得到金福菇多糖TLH-3。

本实施例得到的金福菇多糖TLH-3的提取率为5.5％，纯度达到91％。

实施例3：

本实施例中以金福菇为原料提取分离金福菇多糖TLH-3的方法如下：

(1)将金福菇放入闪式提取器中，加入35质量倍的水，常温下提取40s，提取电压为120V；

(2)将步骤(1)得到的提取液离心分离，收集上清液；离心分离的参数为：离心转速为4200r/min，离心时间为18min；

(3)将步骤(2)得到的上清液加入质量浓度7％的CTAB溶液中，静置1.3h，离心并收集沉淀物，将所得沉淀物用质量浓度10％的NaCl溶液溶解，得到酸性亚组分溶液；

(4)将步骤(3)得到的酸性亚组分溶液在23℃下用1300道尔顿的超滤膜进行超滤脱盐，超滤驱动压力0.15MPa；然后在33℃下用5万道尔顿的超滤膜进行超滤，超滤驱动压力0.15MPa，滤出液于-50℃冷冻干燥后得到金福菇多糖TLH-3。

本实施例得到的金福菇多糖TLH-3的提取率为5.7％，纯度达到94％。

实施例4：

本实施例中以金福菇为原料提取分离金福菇多糖TLH-3的方法如下：

(1)将金福菇放入闪式提取器中，加入40质量倍的水，常温下提取45s，提取电压为130V；

(2)将步骤(1)得到的提取液用三层滤纸进行减压抽滤，收集上清液；

(3)将步骤(2)得到的滤液加入质量浓度10％的CTAB溶液中，静置1.5h，离心并收集沉淀物，将所得沉淀物用质量浓度10％的NaCl溶液溶解，得到酸性亚组分溶液；

(4)将步骤(3)得到的酸性亚组分溶液在35℃下用1500道尔顿的超滤膜进行超滤脱盐，超滤驱动压力0.18MPa；然后在35℃下用10万道尔顿的超滤膜进行超滤，超滤驱动压力0.18MPa，滤出液于-50℃冷冻干燥后得到金福菇多糖TLH-3。

本实施例得到的金福菇多糖TLH-3的提取率为5.2％，纯度达到96％。