包含妥布霉素和倍他米松的眼用混悬液

技术领域

本发明涉及一种包含妥布霉素和倍他米松的眼用混悬液。

背景技术

妥布霉素是一种氨基糖苷类药，经主动转运通过细菌细胞膜，与细菌核糖 体30S亚单位的特殊受体蛋白结合，干扰信息核糖核酸与30S亚单位间起始复 合物的形成，抑制蛋白合成；使DNA发生错读，导致无功能蛋白质的合成；使 多聚核糖体分裂而失去合成蛋白的功能。临床用于敏感细菌所致的外眼及附属 器的局部感染。它与其他氨基糖苷类抗生素相比，抗菌谱更广，疗效更高，毒 性反应小。革兰阳性菌中的金黄色葡萄球菌、链球菌等及革兰阴性菌中的某些 沙雷杆菌和志贺菌等均对妥布霉素敏感。临床用于治疗结膜炎、角膜炎、泪囊 炎、眼睑炎、睑板腺炎等。

倍他米松磷酸钠为糖皮质激素类药物，糖皮质激素类药物具有抗免疫和抗 炎症的作用，应用临床已经多年。倍他米松磷酸钠为一个长效的激素类药物， 在临床中多用于抗炎治疗、免疫性疾病治疗、抗病毒和休克治疗。倍他米松磷 酸钠的作用比较广泛，同其它糖皮质激素类药物相比具有剂量小、半衰期长(长 效)、作用明显等特点。倍他米松主要用于抗炎治疗，也有将其用于眼科疾病治 疗的报道。CN100353947C公开了一种视网膜和脉络膜疾病治疗剂，其中使用倍 他米松作为活性成分，用于治疗增龄性黄斑变性、糖尿病性视网膜症以及增生 性玻璃体视网膜症。

门冬氨酸又称天冬氨酸，分子中含两个羧基和一个氨基，属酸性氨基酸， 广泛存在于所有蛋白质中。它对细胞亲和力很强，可作为载体使钾离子、镁离 子易于进入胞浆和线粒体内。

现有技术中，多是将妥布霉素与地塞米松制备成复方滴眼液使用，公开过 妥布霉素、倍他米松和门冬氨酸三者组合用作眼用混悬液。

发明概述

本发明申请人意外地发现将妥布霉素、倍他米松和门冬氨酸以特定比例组 合作为眼用混悬液使用，对于抗菌和治疗眼部炎症疾病具有协同作用。

本发明提供了一种眼用混悬液，其中包含妥布霉素。

本发明提供了一种眼用混悬液，其中包含妥布霉素和倍他米松。

本发明提供了一种眼用混悬液，其中包含妥布霉素、倍他米松和门冬氨酸。

本发明提供了一种眼用混悬液，其中包含妥布霉素、倍他米松和门冬氨酸， 三者的重量比例为12:1.5:4。

除非特别指明，本发明所述剂量单位均为重量。

本发明经实验证实，只有特定比例的妥布霉素、倍他米松和门冬氨酸的组 合物才具有协同抗菌和治疗眼部炎症疾病的作用。活性成分不同或者活性成分 相同但用量不同均会降低治疗效果。

具体实施方式

实施例1

眼用混悬液处方：

妥布霉素 6g

倍他米松 0.75g

门冬氨酸 2g

氯化钠 3.5g

羧甲基纤维素钠 4g

EDTA-2Na 1g

注射用水 加至1000ml。

制备方法：

(1)使用流化床式气流粉碎机将倍他米松粉碎为5-10μm的粉末。

(2)将氯化钠、羧甲基纤维素钠、EDTA-2Na、妥布霉素、门冬氨酸和步骤 (1)制得的倍他米松粉末用注射用水溶解。

(3)使用硫酸或氢氧化钠调节pH值为6.5-7.0，得到均匀乳白色等渗混悬 液。

对实施例1制得的眼用混悬液进行检查：

1.沉降度试验

取充分摇匀的混悬液20ml，置直径相同的25ml刻度离心管中，以2500r/min 离心5min，观察，无澄清液与沉降物的界限。

2.再分散性试验

取5份充分摇匀的自制混悬液5ml，置直径相同的10ml刻度离心管中，50 ℃分别放置1,2,7,15,30,60,90天，室温下120,360,720天观察。随着时间的 增加，底部缓慢出现微量沉淀，轻摇，沉淀容易再分散，镜下无颗粒凝集现象。

3.粒径检查

取实施例1样品均匀涂于载玻片上，放大400倍观察，无大于25μm的粒 子。放置360天后再观察，无大于25μm的粒子，小于10μm可达96％。

抗菌效果试验

1.体外实验

以大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、化脓性链球菌、白色念珠菌、 肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌为试验菌，采用浊度法，考察抑菌剂的抑菌效果。

菌悬液的制备：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、化脓性链球菌、 肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌分别在无菌条件下接种至10ml营养肉汤培养基 中，35℃，培养24h。菌悬液用无菌生理盐水稀释，使菌液浓度达10⁶cfu/ml。 白色念珠菌在无菌条件下接种至10ml改良马丁液体培养基中，25℃，培养48h。 菌悬液用无菌生理盐水稀释，使菌液浓度达10⁶cfu/ml。

供试液的配制：分别称取对羟基苯甲酸酯0.2g和称(量)取对羟基苯甲酸酯 0.2g、苯乙醇5ml，溶于100ml营养肉汤培养基中，供大肠埃希菌、金黄色葡萄 球菌、绿脓杆菌、化脓性链球菌、肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌测试用。分别 称取对羟基苯甲酸酯0.2g和称(量)取对羟基苯甲酸酯0.2g、苯乙醇5ml，溶于 100ml改良马丁液体培养基中，供白色念珠菌试用。取10ml供试液至试管中， 高压灭菌。每个测试菌设8管供试液，并设一组对照管。无菌条件下，每支试 管添加菌悬液0.2ml。大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、化脓性链球菌、 肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌35℃，培养24h，白色念珠菌25℃，培养48h。 观察试管中溶液是否澄清。

供试液组别：表1

说明：对比实施例1-3仅含有妥布霉素、倍他米松和门冬氨酸其中一种单 一组分，对比实施例4-7含有两种组分，对比实施例8含有妥布霉素、倍他米 松和门冬氨酸三种组分但用量有所变化。

按照《中国药典2010年版二部》附录规定的抑菌剂效力检查法指导原则， 对本发明供试液进行抑菌效力验证试验。

实验结果如下：

表2实施例1抑菌效力试验菌数下降lg值

表3对比实施例1抑菌效力试验菌数下降lg值

表4对比实施例2抑菌效力试验菌数下降lg值

表5对比实施例3抑菌效力试验菌数下降lg值

表6对比实施例4抑菌效力试验菌数下降lg值

表7对比实施例5抑菌效力试验菌数下降lg值

表8实施例6抑菌效力试验菌数下降lg值

表9对比实施例7抑菌效力试验菌数下降lg值

表10实施例8抑菌效力试验菌数下降lg值

从表2-表9的数据可知，本发明实施例1包含妥布霉素、倍他米松和门冬 氨酸的眼用混悬液抑菌效果最强，相对于单一组分、两种组分的组合以及不同 用量的三种组分的组合(对比实施例1-8)均明显具有协同抑菌效果。

2.体内试验

将接种于普通琼脂培养基平板上的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆 菌和血琼脂培养板的化脓性链球菌用接种环刮下，生理盐水分别配成2× 10¹²CFU/L(光电比浊仪测定浓度)。按方法(肖毅，李晨，梅其炳，张峰，陈水 英，马吉献.家兔眼损伤型细菌性角膜炎动物模型的建立.陕西医学杂志，2003； 32(2):187-188)用角膜环钻致家兔角膜损伤(双眼)，家兔每眼感染细菌0.1mL， 2d用无菌盐水棉签取眼睛分泌物，放入4mL无菌生理盐水瓶中，用琼脂平板培 养法对其液体做细菌培养。同时进行炎症评分，0级:眼明亮无分泌物；0.5级: 无分泌物覆盖，眼稍有红肿；1级:分泌物覆盖小于6mm；2级:分泌物覆盖充满 6mm；3级:分泌物覆盖大于6mm。根据评分标准随机分组。治疗组(感染细菌+本 发明眼用混悬液)，未治疗对照组(感染细菌+滴生理盐水)，各组6只家兔。正 常对照组(不造模、不感染细菌、滴生理盐水)2只。治疗组滴本发明眼用混悬液 0.8mL/d(双眼)，未治疗对照组和正常对照组滴生理盐水0.8mL/d(双眼)，每眼 0.1mL，4次/d，连续点药7d。每隔24h双眼进行一次评分，连续观察7d，评分 结果作统计学t检验处理。并于给药前1d，给药后1，3，5，7d用无菌盐水棉 签取眼分泌物作细菌培养，判断阴阳性结果。d8处死家兔，取角膜放入40g/L 甲醛中固定作病理切片，HE染色检查。

四种菌感染兔眼24h后出现炎性症状，轻者结膜红肿眼充血。重者全身状 态欠佳伴结膜红肿充血，角膜水肿增厚，大量分泌物呈黄白色，将上下眼睑粘 住，双眼紧闭。绿脓杆菌感染的兔眼分泌物微显黄绿色。化脓性链球菌感染炎 症反应较重，持续7d以上。评分标准在1.5～3级。细菌培养结果:给药前角膜 分泌物4种细菌培养均为阳性，本发明实施例1眼用混悬液治疗5d的角膜分泌 物细菌培养转阴率大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌均为100％，化脓性 链球菌94％。家兔眼评分结果，与未治疗对照组比较，本发明实施例1眼用混悬 液对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、化脓性链球菌感染组给药后4， 5d都有明显差异(P<0.01，表11)。病理切片，本发明实施例1眼用混悬液治疗 前3种菌感染的角膜各层结构基本完整，伤口表面被复层鳞状上皮覆盖，伤口 处有纤维组织增生，伤口斑痕性愈合，未见炎细胞浸润；化脓性链球菌治疗组 部分片子可见角膜水肿，伤口未愈合并有少量炎细胞浸润；未治疗对照组感染4 种菌后兔眼均显示角膜水肿，血管扩张充血，伤口未愈合并有溃疡，有大量炎 细胞浸润及坏死组织。正常对照组角膜完好无损。

表11给药5d后对四种细菌感染家兔眼疗效比较(评分值x±s,n＝12)

由表11数据可知，本发明实施例1包含妥布霉素、倍他米松和门冬氨酸的 眼用混悬液治疗细菌感染的眼部炎症效果最强，相对于单一组分、两种组分的 组合以及不同用量的三种组分的组合(对比实施例1-8)均明显具有协同治疗效 果。