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一种基于“睡美人”转座子系统制作高效转染各类细胞的方法

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本发明公开一种基于“睡美人”转座子系统制作高效转染各类细胞的方法，采用BglⅡ和NotⅠ酶切位点以及NotⅠ和EcoRⅠ酶切位点在pT/HB转座子载体上加入长度为589bp的CMV启动子和长度为720bp的EGFP（增强型绿色荧光蛋白）基因，构建为全长4849bp的pT-CMV-EGFP重组载体；利用脂质体转染pT-CMV-EGFP转座子及辅助转座酶SB11，脂质体的用量为总DNA质量的3-4倍，转座酶SB11与转座子pT-CMV-EGFP质量比1:4体系转染贴壁细胞3T3，悬浮细胞H22和原代培养DC细胞。本发明方法经36-48小时培养后，利用倒置荧光显微镜和流式细胞仪检测，筛选得到一个较通用的转染体系，可高效稳定的转染各种细胞系，并具有较好的适用性和可操作性。

著录项

公开/公告号CN104195112A

专利类型发明专利
公开/公告日2014-12-10

原文格式PDF
申请/专利权人昆明市第一人民医院;
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申请/专利号CN201410436949.6
发明设计人杨柳;苏晓三;王翼寅;陈睿;张蕾;
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申请日2014-09-01
分类号C12N5/10;C12N15/63;
代理机构
代理人
地址 650000 云南省昆明市青年路504号昆明市第一人民医院实验中心
入库时间 2023-12-17 02:34:24

法律信息

法律状态公告日

法律状态信息

法律状态
2017-11-07

发明专利申请公布后的驳回 IPC(主分类):C12N5/10 申请公布日:20141210 申请日:20140901

发明专利申请公布后的驳回
2015-01-07

实质审查的生效 IPC(主分类):C12N5/10 申请日:20140901

实质审查的生效
2014-12-10

公开

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