(S,S,S)-N-(1-2-羧基-3-(N2-甲磺酰赖氨酰氨基)丙基-1-环戊基羰基)酪氨酸结晶多型体

本发明涉及(S，S，S)-N-(1-[2-羧基-3-N²-甲磺酰赖氨酰氨基)丙基]-1-环戊基羰基)酪氨酸的一种结晶多型体，该化合物具有如下分子式：其在下文中被称作式(I)化合物的“α-型”。

更具体地说，本发明涉及式(I)化合物的α-型及其制备方法，α-型制备中使用的中间体，含有α-型的组合物和α-型的应用。

式(I)化合物的无定形(下文中称作“β-型”)已在欧洲专利公开说明书EP-A-0358398中的实例181中披露。这种化合物是一种有效的锌依赖中性肽链内切酶E.C.3.4.24.11的抑制剂并因此可以增加心房促尿钠排泄因子的生物效应。因此它是一种促尿钠排泄的、抗高血压的和利尿的试剂，对于各种心血管疾病的治疗很有用。这种化合物也是血管紧张肽转化酶-参与血压控制的另一种酶-的有效抑制剂。由于能够抑制两种参与血压控制的关键的酶，这种化合物具有双重的药理作用。因此它有可能在治疗各种形式的高血压及相关的心血管疾病例如充血性心力衰竭及青光眼中有用。

β-型可由多种方法得到，例如，通过将式(I)化合物溶液的冷冻干燥，从这种溶液中快速蒸发溶剂或向这种溶液中添加不良溶剂而使β-型沉淀出来。β-型没有清晰的熔点，而通常在约160℃“软化”。

但是，β-型已被发现具有某些性质使其并不特别适合药物制剂。特别是它具有吸湿性，体密度低和流动性差。用β-型进行的加工实验也显示出由含有这种形式的组合物生产药片时的麻烦。

本发明所论述的问题是提供某种形式的式(I)化合物，使之可以有效地配制以给出稳定而有效的药物制剂。

这一难题由于令人惊奇的发现而得以解决，即可以制得α型的式(I)化合物，它不吸水，为结晶态，与β-型比较有较高的体密度及较好的流动性质。α-型特别适合用于药品的药物制剂中。

因此，本发明提供了式(I)化合物的一种结晶多型体α-型，其分散在液体石蜡中的红外光谱吸收带为：ν＝3407、3386、3223、3153、1699、1652、1626、1594、1516、1457(液体石蜡)，1377、(液体石蜡)，1344、1334、1317、1267、1241、1228、1210、1164、1151、1137、1118、1109、1093、1074、1045、1019、1003、981、965、911、897、862、818、800、778、762、721和655cm^-1。

α-型进一步由采用经石墨单色器滤波的铜射线(λ＝0.15405nm)得到的粉末X-射线衍射图表征，其主要峰的2θ值为7.5、8.9、9.9、11.6、15.6、17.2、17.5、18.0、20.2、22.1和23.3度

α-型再进一步由其差示扫描热分析表征，其中当α-型以每分钟20℃的扫描速度被处理时，在248-259℃范围有一尖锐的吸热峰，在约260℃以上分解。

α-型一般在242-252℃迅速熔化，尽管也记录到较低的熔点范围。

式(I)化合物的其它形式(下文中称作“γ-”和“δ-”型)也已得到并且由于它们可作为α-型制备的中间体而构成本发明的一部分。

因此，本发明还给出分子式(I)化合物的一种多型体γ-型，其分散在液体石蜡中的红外光谱吸收带为：ν＝3377、3240、1665、1639、1594、1527、1518、1494、1457(液体石蜡)，1443、1377(液体石蜡)，1344、1321、1304、1254、1195、1178、1162、1143、1111、1098、1046、1031、1012、972、962、945、932、907、879、849、8 15、806、780、753、729和658cm^-1。

γ-型进一步由其采用经石墨单色器滤波的铜射线(λ＝0.15405nm)得到的粉末X-射线衍射图表征，其主要峰的2θ值为9.0、9.6、10.6、11.6、12.7、13.3、14.6、16.2、17.9、18.8、20.2和21.8度。

γ-型还进一步由其差示扫描热分析表征，其中当其以每分钟20℃的扫描速度被处理时，在176-186℃范围有一尖锐的吸热峰，约207℃有一放热峰，约213℃有一弱吸热峰，在温度高于250℃时分解。

γ-型一般在170-185℃范围迅速熔化。

本发明因此也提供了式(I)化合物的水合的δ-型，其水含量为1至7％，优选2至4％(重量比)，该水含量通过Karl Fisher分析测定，其在液体石蜡中分散后红外光谱吸收带为：ν＝3667、3425、3380、3287、3137、3098、1709、1673、1637、1619、1596、1568、1556、1516、1458(液体石蜡)，1448、1419、1390、1378(液体石蜡)，1356、1338、1300、1270、1249、1229、1198、1174、1141、1108、1091、1075、1064、1045、1033、1019、1001、985、962、941、909、889、877、841、822、807、763、744、732、721和655cm^-1。

δ-型进一步由其粉末X-射线衍射图表征，该衍射图用经石墨单色器滤波的铜射线(λ＝0.15405nm)得到，其主要峰的2θ值为10.5、10.8、12.3、14.5、17.2、17.6、17.9、18.9、20.4、21.5、22.4、23.0、23.1、24.7、27.1、27.8和28.9度。

δ-型还进一步通过差示扫描热分析表征，其中当其以每分钟20℃的扫描速度处理时，在约162℃和166-168℃有尖锐的吸热峰，在200℃以上分解。

δ-型通常在165-175℃范围迅速熔化。

尽管式(I)化合物的γ-型和δ-型表现出与α-型和β-型同样的药理活性，但是它们不象α-型那样适合药物制剂之用。

式(I)化合物的α-型可通过下述方法制备：1)α-型可通过化学式如下的化合物的钠盐、钾盐、铵盐或(C₁-C₄烷基)铵盐水溶液的催化氢化而制备：使用合适的催化剂，例如负载钯的碳，除去苄氧羰基保护基，随后将所得式(I)化合物的碱式盐酸化到pH3至5，优选约pH4，并优选35至45℃给出α-型。优选使用式(II)化合物的二钠盐。适合除去苄氧羰基保护基的其它催化剂已为专业人员所熟知，例如参见T.W.Greene和P.G.Wuts，“Protective Groups inOrganic Synthesis”，Second Edition，1991，其所述内容在本文中引为参考。在一个有代表性的方法中，将溶解于合适有机溶剂，例如乙酸乙酯中的式(II)化合物的溶液与氢氧化钠水溶液一起摇荡从而得到其二钠盐，将含钠盐的水溶液分离出来并在负载5％钯的碳催化剂存在下于约414kPa(60psi)及室温下氢化以除去苄氧羰基保护基。之后过滤除去催化剂，滤液用合适的酸，例如盐酸调节至约pH4。从溶液中沉淀出来的α-型通过过滤而收集到。式(II)化合物可以由方案1所给出的路线制备：

               方案1在有代表性的方法中，丙烯酸叔丁酯(III)与多聚甲醛在3-奎宁环醇存在下发生反应给出羟甲基丙烯酸叔丁酯(IV)，该化合物在三乙胺和吡啶存在下先用亚硫酰氯处理给出相应的氯甲基丙烯酸酯，该氯甲基丙烯酸酯与(S，S)-α-α’-二甲基二苄胺作用给出式(V)的丙烯酸酯。根据Tet.Lett.1993，34(8)，1323-6中所给出的方法将该化合物转化为式(IX)化合物。然后将式(IX)化合物与式(X)赖氨酸衍生物通过类似于在EP-A-0358398中描述的制备式(XI)化合物的方法缩合。然后将式(XI)化合物用三氟乙酸和苯甲醚的二氯甲烷溶液处理转化为式(II)化合物。2)α-型可以由δ-型通过搅拌δ-型在水中的溶液或在合适的有机溶剂，例如，C₁-C₄链烷醇如甲醇或异丙醇，或C₃-C₆酮如丙酮的含水溶液中的溶液制备。

在有代表性的方法中，δ-型溶于1∶5水/甲醇或1∶10水/丙酮的混合物中，溶液在室温下搅拌数日，α-型从溶液中沉淀，可以通过过滤收集。3)α-型可以由γ-型通过搅拌γ-型在水中的溶液或在合适的有机溶剂，例如C₁-C₄链烷醇如甲醇或异丙醇，或C₃-C₆酮如丙酮的含水溶液中的溶液制备。

在有代表性的方法中，γ-型溶于1∶1水/甲醇混合液中，溶液在室温下搅拌约17小时，α-型从溶液中沉淀出来，可以通过过滤收集。4)α-型可以通过与上述方法3)类似的方法由β-型制备。5)α-型可通过式如下的化合物去保护制备，优选在酸性条件下进行：

其中P¹、P²、P³和P⁴均为合适的可以除去的保护基，优选在酸性条件下进行，在后处理中随着调节pH为3至5，优选约为4，得到α-型。

能满足这一目的及除去条件的合适的保护基已为专业人员熟知，例如，参见T.W.Greene，和P.G.Wuts，“Protective Groups in Organic Synthesis”，Second Edition，Wiley-Interscience。P¹优选甲酰基或苄氧羰基，P²、P³和P⁴均优选叔丁基。在有代表性的方法中，P¹为甲酰基或苄氧羰基，P²、P³和P⁴均为叔丁基。式(XII)化合物在合适溶剂，例如1，4-二氧杂环己烷或乙酸乙酯中的溶液用合适的酸，例如盐酸处理以除去保护基并且在后处理中调节pH约为4得到α-型。

分子式(XII)的中间体可由常规方法制备。P¹为苄氧羰基而且R²、P³和P⁴均为叔丁基的式(XII)化合物与方案1中式(XI)化合物相对应，其合成在方法1中进一步描述。P¹为甲酰基且P²、P³和P⁴均为叔丁基的式(XII)化合物的制备方法包括，将式(XI)化合物用合适的催化剂，例如负载钯的碳先进行氢解而除去苄氧羰基保护基，随后将所得胺进行甲酰化，例如使用甲乙混合酸酐。6)α-型可以通过分子式如下的化合物的去保护而制备，优选在酸性条件下进行。

其中P⁵为可除去的合适的保护基，优选在酸性条件下进行，在后处理中调节pH为3至5，优选约为4之后，得到α-型。

满足这一目的及除去条件的保护基已为专业人员所熟知，例如参见T.W.Greene和P.G.Wuts，“Protective Groups in Organic Synthesis”，SencondEdition，Weily-Interscience，P⁵优选甲酰基，P⁵的其它实例是苄氧羰基及叔丁氧羰基。

在有代表性的方法中，P⁵为甲酰基，将式(XII)化合物在合适的溶剂，例如1，4-二氧杂环己烷中的溶液用合适的酸例如盐酸的水溶液处理以除去保护基并且在后处理中调节pH约为4，得到α-型。

式(XIII)的中间体可由常规方法制备。例如通过式(XII)化合物的选择性去保护以便单独除去P²、P³和P⁴保护基。例如，当P¹为甲酰基且P²、P³和P⁴均为叔丁基时，叔丁基保护基可通过用三氟乙酸在合适溶剂例如二氯甲烷中处理式(XII)化合物而选择性地除去。

用作α-型制备中间体的β-、γ-、δ-型制备方法如下：(i)β-型可通过在合适溶剂中的式(II)化合物溶液在合适的去保护基催化剂，例如负载钯的碳存在下经催化氢化来制备。

在有代表性的方法中，式(II)化合物的含水乙醇溶液在负载钯的碳催化剂存在下，于约414kPa(60psi)和室温下进行氢化。催化剂经过滤除去，滤液或是经减压浓缩得到泡沫体并将其与C₃-C₆酮，例如丙酮一起搅拌，或是进行冷冻干燥，从而给出可由过滤收集的β-型。

这一制备中，如果用C₃-C₆酮处理，偶或也给出α-型。(ii)δ-型的制备方法包括，将式(II)化合物在合适的与水不相溶的有机溶剂(例如乙酸乙酯)和水的混合物中及合适的去保护基催化剂，例如负载钯的碳存在下进行催化氢化，随后除去催化剂。用C₁-C₄醇，例如甲醇使水层与沉淀的产品分离。

在有代表性的方法中，将水加入式(II)化合物的乙酸乙酯溶液中，该混合物在约414KPa(60psi)和室温及负载钯的碳催化剂存在下进行氢化。之后催化剂经过滤除去，水相从滤液中分离出，在减压下浓缩至小体积后倾入甲醇中，δ-型缓缓从溶液中沉淀出并可经过滤收集。

这种制法偶或也给出α-型。(iii)β-型可通过先冷却δ-型的水溶液而后冷冻干燥所产生的固态物而制备。(iv)γ-型可通过搅拌δ-型与正丙醇或乙腈的混合物而制备。

在有代表性的方法中，该混合物在室温下搅拌约24小时，γ-型经过滤收集。(v)γ-型可通过搅拌β-型在乙腈或正丙醇中的浆液而制备，一般在室温下

需约5天。γ-型经过滤收集。(vi)γ-型可通过用C₃-C₆酮，例如丙酮处理δ-型的水溶液而制备。

在有代表性的方法中，将δ-型的水溶液在室温下倾入剧烈搅拌的大量丙酮中。γ-型从溶液中沉淀出并可由过滤收集。

这种制法偶或也给出α-型。(vii)β-型可通过冷冻干燥浓的α-型水溶液而制备。

在有代表性的方法中，在热水中的α-型浓溶液制得后，过滤溶液以除去任何不溶物，随后冷却，冰冻，最后冷冻干燥给出β-型。

如上所述，α-型是一种有效的中性肽链内切酶(E.C.3..4.24.11)的抑制剂。这种酶参与多种肽激素和肽分泌物的切断，特别是心房促尿钠排泄因子(ANF)的切断。所以，α-型通过阻止ANF被中性肽链内切酶E.C.3.4.24.11降解，可以增强ANF的生物活性，因而它是一种有效的利尿、促尿钠排泄的和抗高血压的药剂，用于治疗多种疾病，包括高血压、心力衰竭、心绞痛、肾机能不全、慢性肾衰竭、经前综合症、经期浮肿、美尼尔综合症、醛甾酮过高症(一期和二期)及高钙尿。此外，由于其可以增强ANF作用的能力，α-型在治疗青光眼中亦有用。而且，由于其抑制中性肽链内切酶(E.C.3.4.24.11)的能力，α-型可以用于治疗哮喘、炎症、疼痛、癫痫、情感性精神病、痴呆、老年性精神错乱、肥胖症、胃肠疾病(特别是腹泻和过敏性肠道综合症〕和高肾素血症及调节胃酸分泌。

抑制中性肽链内切酶E.C.3.4.24.11的活性，可以采用以Barclay，P.L.，等人在Biochem.Biophy.Res.Comm.，1989，164，58-65中给出的实验为基础的方法来评价。该方法涉及测定为使同位素标记的马尿酸释放速率降低50％所需的化合物浓度，马尿酸来源于在由老鼠肾中得到的中性肽链内切酶制剂作用下的马尿酰-L-苯丙氨酰-L-精氨酸。

如上所述，α-型也是一种血管紧张肽转化酶(ACE)的抑制剂。因此它在治疗各种已知ACE抑制剂有效的症状时很有用，这些症状包括低血压，充血性心力衰竭，局部缺血损伤限制而导致的心肌缺血，抑制超滤损伤的肾脏保护，左心房肥大的阻止或逆转，记忆功能增强，识别功能控制，痴呆和阻止冠状成血管成形术或冠状动脉旁路手术后的再闭锁症。它对这种酶的活性可采用依据Rohrbach，M.S.，在Anal.Biochem.，1978，84，272中描述的实验的改进方法来评价。该方法涉及测定使同位素标记的马尿酸释放速率降低50％的所需化合物的浓度，马尿酸来源于在由老鼠肾中析出的血管紧张肽转化酶作用下的马尿酰-L-组氨酸-L-亮氨酸。

抑制活性也可以通过对麻醉的老鼠进行静脉注射后在体内进行测量，采用由I.L.Natoff等人在Journal of Pharmacological Methods，1985，5，305和D.M.Gross等人在J.Pharmacol，Exp.Ther.，1981，216，552中描述的方法，确定要将静脉注射血管紧张肽I(50ng，快速浓注)产生的升压响应减小50％所需的抑制剂剂量。

作为利尿剂α-型的活性可通过采用Alabaster，C.T.，等人在Brit.J.Pharmacol.，1989，98，823P中描述的方法，在不麻醉的动静脉阻塞的狗身上测量其增加尿量和钠离子排出量的能力来确定。

α-型的抗高血压活性可以通过对事先提供利尿剂排尽盐份的自发性高血压鼠，盐份排尽的肾发性高血压狗，或醋酸去氧皮甾酮(DOCA)/盐高血压鼠口服或静脉注射给药后测量其血压降低来评价。

在治疗高血压、充血性心力衰竭或肾机能不全而对动物用药时，α-型口服剂量一般为每天1-500mg，用于人类的治疗时，对于普通的成年患者，优选每天5-200mg。因此对于一个典型的成年患者，含有1-200mg该化合物和合适的可药用稀释剂或载体的每个药片或每粒胶囊可以以单一剂量给药或以多重剂量给药，每天服用一次或数次。静脉用药剂量如所要求的那样每单一剂量一般含有该化合物0.01至50mg，优选0.1至10mg。实际上，医生将决定最适合每个患者的实际用药量，它随不同患者的年龄、体重、对药物的反应而变化。上述剂量为一般情况的示例，当然对某些情况，较高或较低的剂量范围更好，这些也在本发明的范围之内。

就人类使用来说，α-型可以单独使用，但一般是与可药用的稀释剂或载体混合给药，稀释剂和载体则根据所计划的用药途径和标准的药剂制法选择。例如，它可以以含有这些赋形剂如淀粉或磷酸二氢钙的药片形式。或者采用单独或与赋形剂混合的胶囊或粒状形式，或者采取含有调味剂或增色剂的酏剂或悬浊液形式口服给药。它也可以不经肠道而注射，例如，静脉注射。肌肉内注射或皮下注射。对于非肠道用药，它最好以灭菌水溶液形式使用，其中可以含有其它物质，例如，足量的盐或葡萄糖以使溶液与血液等渗透。

α-型可以与其它用于控制血压，治疗心脏病和肾机能不全的药剂共同使用。因此，例如，它可以与强心剂(例如毛地黄)、α-阻断剂(例如喹噁哌嗪)、β-阻断剂、钙通道阻断剂(例如氨氯地平)、外源ANF、钾通道活化剂或其它利尿剂一起使用，这将由医生根据具体的病人或病情而定。

此处披露的使用α-型的治疗处理可以是对特定疾病的治疗或预防处理。

因此本发明还提供：(a)一种药物组合物，其含有式(I)化合物的α-型、γ-型或水合的δ-型   及可药用的稀释剂或载体。(b)式(I)化合物的α-型、γ-型或水合δ-型，或其药物组合物，作为药   物使用。(c)式(I)化合物的α-型、γ-型或水合的δ-型，或其药物组合物的应用，

以生产用于治疗与血管紧张肽转化酶和/或锌依赖中性肽链内切酶E.C.3.4.

24.11抑制有关的疾病的药物。(d)如(c)中所陈述的应用，其中疾病为心血管疾病，例如高血压，充血性心

力衰竭，肾机能不全或青光眼。(e)治疗动物，包括人类的方法，用于治疗与心血管紧张肽转化酶和/或锌依赖   中性肽链内切酶E.C.3.4.24.11.抑制有关的疾病，其包括给所说的动物   服用对所述酶和/或肽链内切酶为抑制数量的α型、γ型或水合δ型的式   (I)化合物或其药物组合物。(f)如(e)所陈述的方法，其疾病如(d)所述。(g)式(II)化合物的钠、钾、铵或(C₁-C₄烷基)铵盐。(h)式(I)化合物的γ-型。(i)式(I)化合物的水合的δ-型。(j)式(XII)化合物，其前提是当P²、P³和P⁴均为叔丁基时P¹不是苄氧羰基。(k)式(XIII)化合物，其前提是P⁵不是苄氧羰基。

α-型制备由下列实例说明：

                     实施例1

(S，S，S)-N-(1-[2-羧基-3-(N²-甲磺酰赖氨酰氨基)丙基]-1-环戊基羰基)酪氨酸，α-型

将(S，S，S)-N-(1-[3-(N⁶-苄氧羰基-N²-甲磺酰赖氨酰氨基)-2-羧丙基]-1-环戊基羰基)酪氨酸的乙酸乙酯(1190ml)溶液(根据制备方法9得到溶液的一部分，其含有起始物料219g)与氢氧化钠(23.1g)在水(503ml)中的溶液一起摇荡。分离出水相，于414Kpa(60psi)和室温下在负载5％钯的碳催化剂(20g)上氢化5小时，然后过滤除去催化剂，滤液用5N盐酸调节至pH4，白色固体沉淀出来。室温下经18小时陈化，固体产品经过滤、水洗、干燥后得到标题化合物，其为白色固体(124.4g)，熔点248-250℃。

             测定值：C，53.47；H，7.25；N，9.50。C₂₆H₄₀N₄O₉S计算值：C，53.41；H，6.90；N，9.58％。

                   实施例2

(S，S，S)-N-(1-[2-羧基-3-(N²-甲磺酰赖氨酰氨基)丙基]-1-环戊基羰基)酪氨酸，α-型

将(S，S，S)-N-(1-[2-羧基-3-(N²-甲磺酰赖氨酰氨基)丙基]-1-环戊羰基)酪氨酸水合物(δ-型，参见制备例2)(3.0g)在1∶5水/甲醇混合物(18ml)或1∶10水/丙酮混合物(33ml)中的溶液室温下搅拌三天。所得固体经过滤、干燥得到标题化合物，其为白色固体，熔点246-8℃(来源于水-甲醇方法)，熔点242-3℃(来源于水-丙酮方法)。

                       实施例3

(S，S，S)-N-(1-[2-羧基-3-(N²-甲磺酰赖氨酰氨基)丙基]-1-环戊基羰基)酪氨酸，α-型

(S，S，S)-N-(1-[2-羧基-3-(N²-甲磺酰赖氨酰氨基)丙基]-1-环戊羰基)酪氨酸，γ-型(参见制备例4、5、7和8)(0.5g)溶于水中(4ml)，加入甲醇(4ml)。所得溶液在室温下搅拌17小时。白色固体产生出来，其经过滤收集，干燥后得到标题化合物(0.43g)，熔点250-252℃。

                       实施例4

(S，S，S)-N-(1-[2-羧基-3-(N²-甲磺酰赖氨酰氨基)丙基]-1-环戊基羰基)酪氨酸，α-型

(S，S，S)-N-(1-[2-羧基-3-(N²-甲磺酰赖氨酰氨基)丙基]-1-环戊羰基)酪氨酸，β-型(参见制备例1、3和6)(0.5g)溶于水(4ml)中，加入甲醇(4ml)。所得溶液在室温下搅拌17小时。过滤收集形成的白色固体，干燥后得到标题化合物(0.43g)，熔点249-251℃。

                   实施例5

(S，S，S)-N-(1-[2-羧基-3-(N²-甲磺酰赖氨酰氨基)丙基]-1-环戊基羰基)酪氨酸，α-型

向制备例12的化合物(2.50g，3.20mmol)的1，4-二氧杂环己烷(20ml)溶液中加入用HCl气体饱和的1，4-二氧杂环己烷溶液(20ml)。30分钟后，开始澄清的溶液中析出油状物，在室温下搅拌24小时。加入水(20ml)后得到一澄清溶液，再在室温下搅拌60小时。所得溶液经减压蒸馏后得到油状物，将其溶于水中并用氢氧化钠水溶液碱化至pH4。减压蒸馏除去溶剂，所得物质在甲醇中形成颗粒给出灰白色固体，该固体经过滤收集，再加入水(4ml)配成浆液放置过夜。固体经过滤，干燥得到标题化合物(0.97g)，熔点225-230℃。红外和粉末X-射线衍射分析证实产品为所要求的α-型。

                      实施例6

(S，S，S)-N-(1-[2-羧基-3-(N²-甲磺酰赖氨酰氨基)丙基]-1-环戊基羰基)酪氨酸，α-型

向制备例13的化合物(1.78g)的1，4-二氧杂环己烷(18ml)溶液中加入4M盐酸(18ml)。得到透明的黄色溶液，在室温下搅拌60小时后，再在35℃下搅拌18小时。减压下除去溶剂得到5.42g物质，将其中4.22g溶于水(10ml)中，溶液用氢氧化钠水溶液碱化至pH4.0，用实施例1的化合物接种并在室温下搅拌18小时。所得透明溶液减压浓缩至体积约10ml，用甲醇(15ml)稀释并陈化48小时。固体经过滤收集，干燥后得到标题化合物(1.25g)，熔点232-235℃。IR及PXRD分析证实产品为所要求的α-型。

                   实施例7

(S，S，S)-N-(1-[2-羧基-3-(N²-甲磺酰赖氨酰氨基)丙基]-1-环戊基羰基)酪氨酸，α-型

向冷却的(10℃)(S，S，S)-N-(1-[3-N⁶-苄氧羰基-N²-甲磺酰赖氨酰氨基)-2-(叔丁氧羰基)丙基]-1-环戊羰基-O⁴-叔丁基酪氨酸叔丁酯(13.3g，15.0mmol)的乙酸乙酯(27ml)溶液中加入5.1M氯化氢的乙酸乙酯溶液(70ml)(357mmol HCl)。30分钟后，原本透明的溶液中有焦油状物析出。该混合物在室温下搅拌18小时。将透明溶液从焦油状物中倒出，焦油状物与乙酸乙酯(75ml)研磨得到一种粘态固体。倾析过程和研磨过程重复5次给出一种含湿存水的固体，将其溶于水(12ml)中，所得溶液经乙酸乙酯洗涤两次后，用氢氧化钠水溶液碱化至pH4.0，引入实施例1的化合物的晶种并在45-50℃下搅拌42小时。灰白色固体经过滤收集，用水和丙酮洗涤，干燥后得到标题化合物(1.95g)，熔点237-238℃。

IR和PXRD分析证实产品为所要求的α-型。

下列制备例说明用于合成α-型的某些中间体化合物的制备：

                     制备例1

(S，S，S)-N-(1-[2-羧基-3-(N²-甲磺酰赖氨酰氨基)丙基]-1-环戊基羰基)酪氨酸，β-型

(S，S，S)-N-(1-[3-(N⁶-苄氧羰基-N²-甲磺酰赖氨酰氨基)-2-羧基丙基]-1-环戊基羰基)酪氨酸(参见制备例9)(371g)的9∶1乙醇/水混合物(2.225L)溶液在414KPa(60psi)和室温下在负载10％钯的碳催化剂(37.0g)上氢化4小时。过滤除去催化剂，滤液蒸发后得到泡沫状粗产物，这种物质与丙酮(3.13L)一起搅拌24小时得到标题化合物，为白色无定形固体(283g)。

            测定值：C，52.97；H，7.02；N，8.97；C₂₆H₄₀N₄O₉S计算值：C，53.41；H，6.90；N，9.58％。

                  制备例2

(S，S，S)-N-(1-[2-羧基-3-(N²-甲磺酰赖氨酰氨基)丙基]-1-环戊基羰基)酪氨酸水合物(δ-型)

向(S，S，S)-N-(1-[3-(N⁶-苄氧羰基-N²-甲磺酰赖氨酰氨基)-2-羧基丙基]-1-环戊基羰基)酪氨酸(参见制备例9)(351g)和乙酸乙酯(1300ml)溶液中加入水(385ml)，两相混合物在414KPa(60psi)和室温下在负载5％钯的碳催化剂(35g)上氢化20小时。过滤除去催化剂，分离出水相并将其减压浓缩至小体积。将这种粘稠的溶液倾入甲醇(2.85L)中并在室温下搅拌18小时。此过程中固体慢慢地沉淀下来。固体在5-10℃陈化2小时，过滤，用甲醇洗涤，干燥后得到标题化合物，其为白色固体(178.1g)，熔点168-171℃。测定值：C，51.37；H，7.47；N，9.26；C₂₆H₄₀N₄O₉S·XH₂O(其中X＝1)计算值：C，51.81；H，7.02；N，9.30％。

用Karl Fisher分析测得水含量＝3.6％(重量比)(X＝1时，水含量计算值为3.0％(重量))。

                    制备例3

(S，S，S)-N-(1-[2-羧基-3-(N²-甲磺酰赖氨酰氨基)丙基]-1-环戊基羰基)酪氨酸，β-型

将(S，S，S)-N-(1-[2-羧基-3-(N²-甲磺酰赖氨酰氨基)丙基]-1-环戊基羰基)酪氨酸水合物(δ-型，参见制备例2)(20.0g)在室温下溶于水中(250ml)，该透明溶液用于冰/丙酮浴冷却。固态物经冷却干燥给出标题化合物，其为白色固体(19.0g)。这种物质在155-170℃温度范围慢慢分解。

                    制备例4

(S，S，S)-N-(1-[2-羧基-3-(N²-甲磺酰赖氨酰氨基)丙基]-1-环戊基羰基)酪氨酸，γ-型

将(S，S，S)-N-(1-[2-羧基-3-(N²-甲磺酰赖氨酰氨基)丙基]-1-环戊基羰基)酪氨酸水合物(δ-型，参见制备例2)(1.0g)与或者正丙醇或者乙腈(10ml)在室温下一起搅拌24小时。在每种情况下所得固体均经过滤收集，干燥后给出标题化合物，熔点172-176℃。

                     制备例5

(S，S，S)-N-(1-[2-羧基-3-(N²-甲磺酰赖氨酰氨基)丙基]-1-环戊基羰基)酪氨酸，γ-型

将(S，S，S)-N-(1-[2-羧基-3-(N²-甲磺酰赖氨酰氨基)丙基]-1-环戊基羰基)酪氨酸水合物(δ-型，参见制备例2)(847.0g)溶于水(762ml)中，该溶液用丙酮(1.0L)稀释后，室温下慢慢加入剧烈搅拌的丙酮(18.05L)中，有白色固体沉淀出来。该混合物在室温下搅拌18小时后，固体经过滤收集，用丙酮洗涤，干燥后给出标题化合物，其为白色固体(775g)熔点179-181℃。测定值：C，53.42；H，6.88；N，9.37；S，5.49。C₂₆H₄₀N₄O₉S计算值：C，53.41；H，6.90；N，9.58；S，5.48％。

                    制备例6

(S，S，S)-N-(1-[2-羧基-3-(N²-甲磺酰赖氨酰氨基)丙基]-1-环戊基羰基)酪氨酸，β-型

将(S，S，S)-N-(1-[2-羧基-3-(N²-甲磺酰赖氨酰氨基)丙基]-1-环戊基羰基)酪氨酸，α-型，(参见实例1至4)(4.0g)加入水(200ml)中，此混合物在90-95℃下搅拌30分钟，不溶物过滤除去，滤液中再加水(50ml)稀释，冷至室温。过滤除去轻微的混浊后，透明滤液用于冰/丙酮浴冷却。所得固体物经冷冻干燥产生标题化合物，其为白色固体(3.0g)。这种物质在155-165℃温度范围慢慢分解。

                   制备例7

(S，S，S)-N-(1-[2-羧基-3-(N²-甲磺酰赖氨酰氨基)丙基]-1-环戊基羰基)酪氨酸，γ-型

将(S，S，S)-N-(1-[2-羧基-3-(N²-甲磺酰赖氨酰氨基)丙基]-1-环戊基羰基)酪氨酸，β-型(参见制备例1、3和6)(0.3g)在乙腈(15ml)中配成浆液并搅拌5天。所得白色固体经过滤收集，减压干燥后给出标题化合物(0.26g)。

                      制备例8

(S，S，S )-N-(1-[2-羧基-3-(N²-甲磺酰赖氨酰氨基)丙基]-1-环戊基羰基)酪氨酸，γ-型

将(S，S，S)-N-(1-[2-羧基-3-(N²-甲磺酰赖氨酰氨基)丙基]-1-环戊基羰基)酪氨酸，β-型(参见制备例1、3和6)(0.3g)在正丙醇(10ml)中配成浆液并搅拌5天。所得白色固体经过滤收集，减压干燥后给出标题化合物，熔点175-180℃。

                      制备例9

(S，S，S)-N-(1-[3-(N⁶-苄氧羰基-N²-甲磺酰赖氨酰氨基)-2-羧基丙基]-1-环戊基羰基)酪氨酸

将(S，S，S)-N-(1-[3-(N⁶-苄氧羰基-N²-甲磺酰赖氨酰氨基)-2-叔丁氧羰基)丙基]-1-环戊基羰基)-O⁴-叔丁基酪氨酸叔丁酯(404g)溶于二氯甲烷(810ml)中。将苯甲醚(769g)一次加入，然后用约10分钟时间滴加三氟乙酸(1.158kg)。滴加完后，反应物在35℃下搅拌6小时，然后在室温下搅拌过夜。加入水(1000ml)后分为三层。将顶层和底层合并后溶于乙酸乙酯(2L)中，所得溶液用盐水洗涤。将有机相与盐水混合，pH调至3，液相分为三层。分出有机相，溶于乙酸乙酯中，用饱和碳酸氢钠(1.6L)水溶液和盐水(0.5L)提取。合并的水相用乙酸乙酯洗涤后，酸化，再用乙酸乙酯萃取给出标题化合物的乙酸乙酯溶液(1.54L)。该溶液或直接使用(例如参见实施例1)或除去溶剂给出标题化合物。

                       制备例10

(S)-N⁶-苄氧羰基-N²-甲磺酰赖氨酸

向(S)-N⁶-苄氧羰基赖氨酸(1.5kg)的二氯甲烷(7.5L)浆液中加入三甲基氯硅烷(1.36L)，滴加时间为10分钟。该混合物加热回流30分钟，所得溶液冷至3℃后，同时加入二异丙基乙胺(1.87L)和甲磺酰氯(435ml)，加入速度应使得温度控制在25℃以下。反应物再经2.5小时搅拌，然后倾入2M盐酸溶液中。溶液分层后，二氯甲烷相用2M盐酸洗涤，之后再用水洗。溶剂经减压蒸馏除去并代之以乙酸正丁酯。冷却溶液，所得结晶物经过滤收集，用乙酸正丁酯洗涤，减压干燥后给出标题化合物(1.63kg)，熔点83.5-84℃。(c＝1，甲醇).测定值：C，50.23；H，6.40；N，7.76.C₁₅H₂₂N₂O₆S计算值：C，50.27；H，6.19；N，7.82％.¹H-NMR(300MHz，d₆-DMSO)：δ＝1.23-1.78(6H，m)，2.85(3H，s)，2.98(2H，q)，3.80(1H，dt)，5.00(2H，s)，7.25(1H，t)，7.30-7.43(5H，m)，7.51(1H，d)ppm.

                       制备例11

(S，S，S)-N-(1-[2-叔丁氧羰基-3-(N²-甲磺酰赖氨酰氨基)丙基]-1-环戊基羰基)-O⁴-叔丁基酪氨酸叔丁酯

向(S，S，S)-N-(1-[3-(N⁶-苄氧羰基-N²-甲磺酰赖氨酰氨基)-2-(叔丁氧羰基)丙基]-1-环戊基羰基)-O⁴-叔丁基酪氨酸叔丁酯(48.64g，54.8mmol)的工业用甲基化酒精(1.0L)溶液中加入负载5％钯的碳催化剂(5g)(水润湿)，该混合物在345-414KPa(50-60psi)及室温下氢化19小时。过滤除去催化剂，所得溶液减压浓缩后给出含乙醇的无色油状的标题化合物(46.56g)。¹H-NMR(300MHz，CDCl₃)：δ＝1.27(9H，s)，1.41(9H，s)，1.44(9H，s)，1.45-1.62(14H，宽m)，1.8-2.05(4H，宽m)，2.21(2H，m)，2.72(2H，t)，2.79(3H，宽)，2.96(3H，s)，3.1(2H，m)，3.59(1H，m)，3.96(1H，t)，4.73(1H，m)，6.43(1H，dt)，6.89(2H，dt)，7.09(2H，dt)，7.51(1H，dt)ppm.          

                       制备例12

(S，S，S)-N-(1-[2-叔丁氧羰基-3-(N⁶-甲酰基-N²-甲磺酰赖氨酰氨基)丙基]-1-环戊基羰基)-O⁴-叔丁基酪氨酸叔丁酯

将冷却的(0℃)甲乙混合酸酐的乙酸溶液(由45.3ml乙酸酐和22.8ml甲酸混合加热至50℃-60℃，保持15分钟，然后冷却至0℃而得)在0℃下和10分钟内加入制备例11的化合物(27.3g，36.3mmol)的甲酸(33.7ml)溶液中。之后将此溶液温热至室温并搅拌45分钟，之后置于冰中骤冷，所得混合物用氢氧化钠水溶液中和，并用二氯甲烷(×2)萃取。合并的有机层用盐水洗二次后，减压蒸馏后给出标题化合物，为黄色泡沫体(28.0g)。¹H-NMR(300MHz，CDCl₃)：δ＝1.26(9H，s)，1.41(18H，s)，1.45-2.03(16H，宽)，2.23(2H，宽 m)，2.97(3H，s)，3.08(2H，m)，3.28(2H，m)，3.51(1H，m)，3.98(1H，宽  m)，4.73(1H，q)，5.57(1H，宽 dt)，5.91(1H，宽)，6.32(1H，dt)，6.90(2H，dt)，7.08(2H，dt)，7.29(1H，宽)，8.17(1H，s)ppm.

                     制备例13

(S，S，S)-N-(1-[2-羧基-3-(N⁶-甲酰基-N²-甲磺酰赖氨酰氨基)丙基]-1-环戊基羰基)酪氨酸

向冷却的(0℃)制备例12的化合物(2.71g，3.46mmol)的二氯甲烷(4.8ml)溶液中加入三氟乙酸(4.8ml)。将反应物温热至室温并搅拌24小时。然后将该混合物减压浓缩后给出标题化合物物固体(2.4g)，熔点56-60℃。¹H-NMR(300MHz，d₆-DMSO)：δ＝1.2-1.6(14H，宽  m)，1.71-1.86(3H，m)，1.86-1.99(1H，m)，2.28-2.41(1H，m)，2.78(3H，s)，2.8-3.09(4H，m)，3.12-3.25(2H，m)，3.7(1H，m)，4.35(1H，m)，6.6(2H，dt)，6.98(2H，dt)，7.25(1H，dt)，7.50(1H，dt)，7.91(2H，m)，7.97(1H，s)ppm.

          通过红外(IR)，粉末X-射线衍射(PXRD)和

           差示扫描热分析(DSC)及通过熔点测定对

               α-、β-、γ-和δ-型的表征a)红外光谱(IR)

不同形式的红外光谱以石蜡糊测定，使用Nicolet 800 FT-IR红外光谱仪。

各种形式的红外吸收带波数(ν[cm^-1])列于表1中。

                                表1

                      表1(续)

各种形式的有代表性的红外光谱图示于图1A、1B、2A、2B、3A、3B、

4A和4B中。b)粉末片射线衍射(PXRD)

各种形式的粉末X-射线衍射图由Siemens D 500衍射仪得到，该衍射仪在

40KV/30mA下工作，使用经石墨单色器滤波的铜射线(λ＝0.15405nm)和

闪烁计数管探测器。对每种形式，记录在2°至45°范围的衍射强度随2θ

的变化，采用阶梯扫描方式计数，2θ步长为0.03°，每步停留时间6秒。将

各种形式衍射图上的主要峰(2θ角度)列于表2中。

                               表2

各种形式有代表性的粉末X-射线衍射图示于图5至8。c)差示扫描热分析(DSC)

各种形式的样品(约5mg)使用Pekin-Elmer 7系列热分析仪进行分析，扫

描速度为每分钟20℃。各种形式给出的结果综合在表3中。

                   表3

各种型式有代表性的差示扫描热分析图示于图9至12。d)熔点

不同型式的熔点用带有加热台的显微镜测定，采用Mettler FP5/FP52仪器，加

热速度为每分钟2℃。不同型式样品熔化的典型范围列入表4中。

            表4

 带有指示仪表的制药片机(Manesty Machines Limited，Model F3)经精心

 校正压力及上冲头错位。校正时，将一种安慰剂Avicel(注册商标)/DCP

 (磷酸氢二钙)混合物置于仪器中压制，使用13mm的平面冲头以测试这一技

 术的重现性。采用等份的混合物，将仪器恰当地调节以实现目标压缩重量

 (400mg)和足够的硬度。分别称取20等份混合物置于仪器的滑槽中，仪

 器接通电源工作，直至滑槽中的混合药料全部消耗，不再产生出药片。图13

 画出了对三种Avicel/DCP安慰剂混合料各取20等份时，上冲头压力药片数

 目的关系，表5中给出10个最重药片的平均重量和硬度(假设为先产生出来的10个)。从图13显示的数据可以看出，对这种混合物在整个加工过程中重现性很好。在运行后期上冲头压力的降低与滑槽中混合物数量减少及相应的模具中填料不足有关。

                                表5

  该表显示使用Avicel/DCP安慰剂混合物料压得药片的平均重量和硬度

进行工艺的重现性测定实验之后，含有α-型或β-型的混合物料分别按下

述配方制备：α-或β-型(100mg)，预先凝胶化的淀粉(40mg)，磷

酸氢二钙(无水级)(256mg)和硬脂酸镁(2mg)。采用掺混/过筛/掺

混的方法先准备20g混合物料。然后在机器上冲压装料为100mg，因为先前

的经验表明装料越多，加工面临的困难愈大。机器根据混合物料而进行调

节，在一次连续进料中由所给定混合物料中生产50片药片。

采用β-型的混合药料时，由于β-型的流动性差，仪器的优化更加困难。

尽管仔细控制过程参数，但不可能在两次混合物料之间保持上冲头压力恒

定，因此，β-型混合物料被压至更大的硬度。两种混合物料的上冲头数据

均绘于图14中。β-型的上冲头压力(及片重)的较大的变异性与此配方

在模具中的不均匀填充有关。表6中的数据证实β-型配方与α-型配方相

比，加工要困难得多，而且变异性也大得多

                          表6

    该表显示含有α-型和β-型的混合物料加工过程参数变异性

测得每种混合物料最后10片的推出力示于图15中。由β-型制得的药片需

要更大的力以使其从模具中脱出，这种作用表现为药片在斜槽作用下离开

模具时“翻滚”。所得数据表明与α-型相比β-型的加工性能差。β-型

体积密度低(蓬松密度＝0.09gme^-1，比较α-型：0.36gme^-1)，流动性差，

当用含有β-型的混合物料制药片时，会导致药片重量变异性大且需较高

的推出力。从各个方面来看，α-型显示出更优异的性能，因而使其特别适合

于药物制剂。(b)吸湿性研究

(i)α-型和β-型的吸湿性通过如下重量分析评价。

   将α-型和β-型样品分别置于Kilner(注册商标)瓶中，保持如下

   条件：40℃；40℃和75％RH(相对湿度)；40℃和95％RH。

   每一样品一式三份，在选定的时间间隔通过重量分析测定吸水量。 

   在40℃/75％RH或40℃/95％RH贮存1天的β-型样品发生了

   形态变化。在40℃/95％RH贮存一天的样品有轻微的失重(推测

   先吸水增重，而后形貌变化又失水)，而贮存于40℃/75％RH的样

   品与其起始重量比平均增重6％。

   图16给出由重量分析得到的结果。未发现α-型有吸湿性，而发现β

   -型在40℃/75％RH下有显著的吸湿性。

(ii)对α-和β-型进行微天平湿度试验确认α-型不吸湿而β-型显著

   吸湿。

   将α-和β-型样品分别置于40℃的仪器中，与周围环境达平衡，随

   后将指定的样品暴露在相对湿度增大的环境中，在每次湿度增大之间

   保持一段能达到平衡的时间。

   实验结果示于图17中。这一切表明在整个实验过程中有多至8％重

   量比的水(与起始重量比)被β-型吸收。

   高湿度下β-型经历的形貌变化经进一步研究发现有一个从体密度很

   低的粉末向致密的透明状固体的转化过程。