(1R,2S,5S)－N－(1S)－3－氨基－1－(环丁基甲基)－2,3－二氧代丙基－3－(2S)－2－(1,1－二甲基乙基)氨基－羰基氨基－3,3－二甲基－1－氧代丁基－6,6－二甲基－3－氮杂双环3.1.0己烷－2－碳酰胺的制备方法

发明领域

本发明涉及一种制备已显示具有作为HCV蛋白酶抑制剂的活性的式I化合物的方法。本发明还涉及一种制备用于制备式(I)化合物的中间体化合物的方法。

式I

发明背景

本章节或本申请任何章节中引用的任何出版物不应认可这些出版物是本发明的先前技术。

式I化合物，(1R，2S，5S)-N-[(1S)-3-氨基-1-(环丁基甲基)-2，3-二氧代丙基]-3-[(2S)-2-[[[(1，1-二甲基乙基)氨基]羰基]氨基]-3，3-二甲基-1-氧代丁基]-6，6-二甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-碳酰胺的制备方法在美国专利号7,012,066(即’066专利)，实施例XXIV中有描述，从其中第448列开始。制备式I化合物的其它方法在2005年11月10日公布的美国专利申请号2005/0249702和2005年3月17日公布的美国专利申请号2005/0059800中有描述。

一般来说，式I化合物的制备方法在流程I中说明：

流程I

根据流程I，式I化合物一直是通过使式Ia化合物与式Ib化合物偶合制备，优选按照公布的美国申请号2005/0059800中所示，通过将2，6-二甲基吡啶和式Ia化合物的乙腈溶液用包含式Ib化合物，乙基[(3-二甲氨基)丙基]碳化二亚胺盐酸盐(EDCI-HCI)和1-羟基苯并三唑水合物(HOBt)的乙腈溶液处理进行。偶合反应结束后，通过加入甲基-叔丁基醚(MTBE)，用HCl调节pH，用碳酸氢钠提取以及浓缩该有机溶液，将步骤1得到的反应混合物进行后处理。然后将浓缩液用乙腈稀释并再浓缩，随后用氢氧化锂水溶液和HCl/乙酸异丙酯溶液顺次处理，释放出游离酸，最后用L-α-甲基苄胺处理，沉淀出偶合产物的1c盐形式，其中“盐”是式1f(L-α-甲基苄胺)的抗衡离子。

式1f

如流程I中所示，采用两种方法的其中一种方法，由式Ic化合物提供式I化合物。在一种方法中，如步骤2’a和2’b中所示，采用一个三步骤程序，由式Ic化合物产生游离酸(通过用酸处理，接着除去L-α-甲基苄胺抗衡离子)。将Ic的游离酸形式与胺Id’偶合，接着氧化偶合的产物。

在一备选方法中，如流程I中步骤2所示，使游离酸形式的式Ic化合物与胺Id偶合，直接得到式I化合物。因此，参考’066专利，通过在EDCI、HOBt和N-甲基吗啉存在下，将游离酸形式的式Ic化合物的DMF/CH₂Cl₂溶液用胺Id’处理，可进行步骤2的偶合方法，得到偶合产物。偶合反应完成后，将反应混合物浓缩，用HCl水溶液处理，将水层用二氯甲烷提取。将二氯甲烷提取物顺次用NaHCO₃水溶液、HCl水溶液和盐水洗涤，经MgSO₄干燥，真空干燥得到固体。然后将偶合产物的醇官能团氧化，得到式I化合物。氧化反应可在二氯乙酸存在下，在混合的甲苯/DMSO中，通过用EDCI处理进行。

根据上述，使用流程I制备式I化合物的先前步骤需要在第一步酰胺化反应中，即将式Ia和Ib化合物偶合形成中间体式Ic化合物中，使用1-羟基苯并三唑。由于HOBt被分类为活性固体，因此该物质的贮藏和运输被严格控制，其商业规模生产中的用途必须承担处理和储存上的困难，因此希望将使用的步骤的数目降低到最小。另外，当产生游离酸形式的式Ic化合物时，需要蒸馏溶剂步骤和/或交换溶剂步骤以改善反应效率，两者均增加游离酸的降解。另外，流程I的方法利用形成α-甲基苄胺盐提供充分纯形式的中间体Ic，其可用于后来的方法步骤中，但是，已发现L-α-甲基苄胺抗衡离子与分离的溶剂反应，例如乙酸异丙基酯，形成N-乙酰基-α-甲基苄胺杂质。另外，已发现L-α-甲基苄胺抗衡离子在后来的偶合反应中与式Id和Id’的胺竞争，并在有关的反应条件下形成不希望的副产物。因此，当将盐中间体转化为游离酸时，当使用这种操作流程时，必须在进行第二个偶合反应之前，从游离酸中分离出胺。

现在需要的是一种提供式I化合物的方法，其最小化使用HOBT，并避免需要再生(regenerate)游离酸形式的中间体化合物Ic进行流程I中所示的第二个偶合步骤(步骤2)。

发明概述

在一方面中，本发明是一种制备式I化合物的方法

式I

该方法包括：(i)在至少一种偶合剂和至少一种具有碱性氮原子的附加部分(选自叔胺、叔酰胺、吗啉化合物及其两种或更多种的混合物)存在下，使式Ic化合物的叔胺盐

式Ic

与式Id或Id’的盐化合物偶合；和

        式Id                         式Id’

(ii)当步骤(i)中所选的式Id化合物是式Id’化合物时，氧化偶合步骤(i)中所产生的化合物，得到式I化合物。

在某些实施方案中，在进行偶合反应中优选使用非质子性、极性有机溶剂。在本发明的某些实施方案中，优选在选自下列的介质中用偶合剂进行偶合反应：乙酸乙酯、N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)、二甲基甲酰胺(DMF)及其两种或更多种的混合物，更优选偶合反应溶剂为与选自二甲基甲酰胺(DMF)和N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)的溶剂组合的乙酸乙酯。在某些实施方案中，优选使用二甲基环己基胺作为式Ic化合物的叔胺盐中的抗衡离子，由此得到式Ic’化合物。

式Ic’

在本发明的某些实施方案中，优选使用包含选自下列的至少一个部分的肽偶合剂进行反应：乙基(3-二甲氨基丙基)-碳化二亚胺-HCl(EDCI-HCI)、羰基二咪唑(CDI)和1-氯-3，5-二甲氧基-三嗪(DMT-CI)、任选与一或多种选自1-羟基苯并三唑(HOBt)、二甲氨基吡啶(DMAP)和2-羟基吡啶的试剂组合。

在本发明的某些实施方案中，优选在附加的叔胺存在下进行偶合反应，更优选选自下列的叔胺：二异丙基乙胺(DIPEA)、三乙胺(TEA)、2，6-二甲基吡啶、N-甲基吗啉(NMM)和四亚乙基二胺。

在本发明的某些实施方案中，优选使用选自下列的偶合剂：(i)与EDCI-HCl组合的HOBt-单水合物；(ii)与EDCI-HCl组合的在N-甲基吡咯烷酮中的水湿润的HOBt；(iii)与EDCI-HCI组合的DMAP；(iv)DMF中的羰基二咪唑(CDI)；(v)1-氯-3，5-二甲氧基-三嗪；(vi)三嗪，例如但不限于1，3，5-三甲氧基-2，4，6-三嗪和与EDCI-HCl组合的2-羟基吡啶。在某些实施方案中，优选加入选自N-甲基吗啉和二异丙基乙胺的叔胺。

在本发明的某些实施方案中，本发明的方法还包括一种形成式Ic化合物的方法，该方法包括：

(a)在EDCI-HCl和2，6-二甲基吡啶存在下，并在适合于提供形成式Ica的偶合酰胺-酯产物的条件的非极性、非质子性溶剂(但不限于二甲基甲酰胺(DMF)、N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)、乙腈(ACN)或包含乙腈和MTBE或EtOAC的混合溶剂)存在下，

式Ica

将式Ia化合物

式Ia

用式Ib化合物处理；

式Ib

(b)通过用LiOH水溶液，接着用HCl和乙酸异丙酯顺序处理对反应产物进行后处理，从产物的羧酸锂形式中释放出游离酸；和

(c)在选自乙酸异丙酯、庚烷、庚烷及其两种或更多种的混合物的溶剂中，用叔胺处理所述游离酸，沉淀出式Ic的叔胺盐。

在某些实施方案中，优选使用乙腈作为步骤“a”的溶剂。在某些实施方案中，优选使用N，N-二甲基-N-环己胺作为步骤“c”中的叔胺。

在某些实施方案中，优选使用一种式Ib化合物的形式，其包含至少约90％ee的(1R，2S，5S)对映体，更优选包含至少约95％ee的(1R，2S，5S)对映体，更优选包含至少约98％ee的(1R，2S，5S)对映体，该ee保持在偶合反应中，以提供反映相同非对映异构体过量的式Ic化合物。在某些实施方案中，优选使用一种形式的式Ib化合物，其中至少约90％的量的式Ib化合物包含两种对映体混合物，即(1R，2S，5S)对映体和(1S，2R，5R)对映体，该异构体的组成在制备式Ic化合物的过程中保持。在某些实施方案中，优选使用一种混合物，其中在形成式Ic化合物的过程中所提供的至少约95％的量的式Ib化合物包含(1S，2R，5R)对映体和(1R，2S，5S)对映体的混合物，在形成式Ic化合物的过程中更优选所提供的至少约99％的量的式Ib化合物包含一种(1R，2S，5S)对映体和(1S，2R，5R)对映体的混合物。

本发明另一方面是提供式Ic’化合物。

式Ic’

发明详述

以上和本说明书全文中所用的下列术语，除另外指明，应理解具备下列意义：

“烷基”指可为直链或支链并在链中包含约1-20个碳原子的脂肪烃基。优选烷基在链中包含约1-12个碳原子。更优选烷基在链中包含约1-6个碳原子。支链指一个或多个低级烷基，如甲基、乙基或丙基，连接于一直链烷基上。“低级烷基”指可为直链或支链的，在链中包含约1-6个碳原子的基团。术语“取代的烷基”指烷基可被一或多个可以相同或不同的取代基取代，各取代基独立选自：卤代、烷基、芳基、环烷基、氰基、羟基、环氧基、烷硫基、氨基、-NH(烷基)、-NH(环烷基)、-N(烷基)₂、羧基和-C(O)O-烷基。适合的烷基的非限定实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、正戊基、庚基、壬基、癸基、氟甲基、三氟甲基和环丙基甲基。

“环烷基”指非芳族单-或多环环系，其包含约3-10个碳原子，优选约5-10个碳原子。优选的环烷基环包含约5-7个环原子。环烷基可任选被一或多个“环系取代基”取代，所述取代基可以相同或不同，且定义同上。适合的单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环戊基、环己基、环庚基等。适合的多环环烷基的非限制性实例包括1-萘烷、降冰片基、金刚烷基等。

“杂环”指含有一或多个作为环结构成员的N、S或O原子以及至多10个碳原子的环状环系。

在本说明书和以下实施例中使用下列缩写：RT(室温)；TEA(三乙胺)；CDI(羰基二咪唑)；DIPEA(二异丙基乙胺)；DMAP(N，N-二甲氨基吡啶)；DMF(二甲基甲酰胺)；DMT-Cl(1-氯-3，5-二甲氧基三嗪)、EDCI(乙基[(3-二甲氨基)丙基]碳化二亚胺)；EtOAc(乙酸乙酯)；HOBt(1-羟基-苯并三唑)；IPA(异丙醇)；NMM(N-甲基吗啉)；NMP(N-甲基-2-吡咯烷酮)；Ac(乙酰基)；Et(乙基)；THF(四氢呋喃)；eq(当量)；MTBE(叔丁基甲醚)；Boc(叔丁氧基羰基)。

如以上所提及的，式I化合物具有作为HCV蛋白酶抑制剂的有用的活性。本发明人惊奇地发现式I化合物可根据以下流程II制备，其中步骤Ic中使用的胺的“R”基团选自烷基、取代的烷基、环烷基和烷基环烷基，以及1-20个碳原子的取代的环烷基部分。

流程II

步骤1

步骤2

参照流程II，令人惊讶的是，与以前的方法相比较，容易的、高收率酰胺化偶合出现在本发明方法的步骤1中，其在进行的酰胺化中将2-叔丁基-脲基-3，3-二甲基-丁酸(式(Ia)化合物)偶合至式(Ib)的氮杂双环化合物，而不使用1-羟基苯并三唑(HOBt)介导该偶合反应。另外，步骤1在乙腈(ACN)或在包含乙腈和MTBE或EtOAC的混合溶剂中进行。优选使用相对于起始原料约3X-8X V/w量的ACN。流程II的步骤1利用叔胺沉淀式(Ic)化合物的盐形式，其可直接用于后来的偶合步骤中，而不必如以前方法所必需的那样，例如使用L-α-甲基苄胺的方法，首先再生游离酸，然后除去用于制备盐的抗衡离子部分。这产生了一种更为有效的方法，并在式I化合物的多步制备法中更好地利用后一阶段的中间体试剂。

如我们了解的那样，式Ib化合物可具有四个立体异构体，即(1S，2R，5R)立体异构体(流程III中所示的化合物Ib-L)、(1R，2R，5S)立体异构体(未显示)、(1S，2S，5R)立体异构体(未显示)和(1R，2S，5S)立体异构体(流程III中所示的化合物Ib-D)。在某些实施方案中，优选在步骤I中使用一种形式的式Ib化合物，其中存在的90％以上(例如98％以上)的量的异构体包含(1S，2R，5R)立体异构体和(1R，2S，5S)立体异构体的混合物，其中两种对映体等量存在。在某些实施方案中，优选在步骤I中使用一种形式的式Ib化合物，其中一种对映体，(1R，2S，5S)异构体(式Ib-D)，以高对映体过量存在，例如大于约90％ee，优选至少约95％ee，更优选至少约98％ee。对映体过量(“e.e.”)是表示所呈现的一种对映体(如R-对映体)超过其它对映体(如S-对映体)程度的百分比，其通过减去所存在的各对映体的量的差值，再除以所存在的各对映体量的总和来计算。使用按所要求的对映体混合物所选择的一种形式的式Ib化合物，能控制出现在该反应偶合产物中的异构体的相对量。

以上提到的美国专利号7,012,066和2005年11月10日公布的美国专利申请号2005/0249702、2005年3月17日公布的2005/0059800、2005年3月17日公布的2005/0059648连同基于2005年12月22日提交的美国临时专利申请系列号60/753,215并要求其优先权的同时待审的申请，其各自全文结合到本发明中作为参考，均描述了如何提供包含所要求的异构体混合物或富含一种特定异构体的形式的式Ib化合物。

本发明方法步骤II，第二个偶合步骤，进行本发明方法步骤I中产生的中间体季铵盐产物，如式Ic化合物，与例如式Id和Id’，优选式Id’化合物的偶合反应。本发明已发现使用混合的乙酸乙酯和DMF或者乙酸乙酯和NMP作为进行偶合反应的溶剂系统，并选择叔胺作为这个第二步骤中试剂盐形式中的抗衡离子，可使得本发明方法直接在反应中利用盐化合物，而不需要先再生产物(Ic)的游离酸形式，如在以上所提到的先有方法中所需要的那样。本发明方法的步骤2在至少一个具有碱性氮原子的另外部分以及至少一种肽偶合剂存在下进行。本发明方法所选择的条件在式I产物中生成的杂质降低。

虽然一起使用本发明方法的步骤I和II具有优点，但应该理解，当将两个步骤单独进行以及整合为公开的方法时，也可实现各步骤各自的某些优点。以下将详细讨论这些方法的各个步骤。

步骤1-第一个酰胺化偶合反应

第一个步骤涉及用式(Ia)的酸化合物偶合式(Ib)的氮杂双环化合物。该偶合反应在一或多种2，6-取代的吡啶化合物，如2，6-二甲基吡啶，和偶合剂，如(乙基[(3-二甲氨基)丙基]碳化二亚胺)的盐酸盐(式Ia1)存在下进行。

式Ia1

进行该反应所用的适合溶剂是极性的、质子惰性的有机溶剂，例如乙腈和乙酸乙酯(EtOAC)。反应优选在约5℃-30℃的温度下进行。一般地，使用一当量的式Ia化合物以及与所用的式Ia化合物的量相比约0.9当量-1.1当量的量的式Ib化合物进行该反应。该反应一般使用相对于所用式Ia化合物的量约0.5eq.-2.5eq的量的一或多种吡啶碱，以及相对于所用式Ia化合物的量相比至少1.05当量的一或多种偶合剂。该反应一般进行4小时以确保原料完全偶合。反应一般通过LC监测，当反应混合物中原料式Ia化合物残余的量少于0.75％时，认为反应完成。

虽然在反应中优选使用EDCI作为偶合剂，但可使用其它偶合剂代替EDCI或除EDCI之外另加入，例如特戊酰氯、丙烷膦酸酐和混合的(EDCI/DMAP)。优选使用2，6-二甲基吡啶作为取代的吡啶碱，但应清楚的是也可用其它吡啶碱，例如其它2，6烷基取代的吡啶、三乙胺和NMM代替2，6-二甲基吡啶或者除2，6-二甲基吡啶之外另外加入。

偶合反应完成后，将反应混合物通过以下步骤后处理：向反应混合物中加入甲基叔丁基醚，将得到的混合液顺次用HCl水溶液和碳酸氢钠溶液洗涤，然后将有机层浓缩至3X(即约为其初始体积的1/3)，浓缩后，浓缩液主要包含乙腈。将反应混合物随后用金属氢氧化物碱的水溶液、接着HCl或其它适合的酸，如H₂SO₄，之后用选自乙酸异丙酯和2-甲基四氢呋喃(Me-THF)的溶剂处理，由此释放出游离酸形式的式Ic产物。

释放出游离酸形式的式Ic化合物后，将反应混合物用叔胺处理，沉淀出铵盐形式的式Ic化合物。如流程II中所示，叔胺与化合物的游离酸官能团相互作用，形成盐中的抗衡离子。在某些实施方案中，优选使用单一组分的溶剂，优选醋酸异丙醇。在某些实施方案中，优选包括与溶解所述叔胺的溶剂混合的抗溶剂(antisolvent)，例如乙酸异丙酯/庚烷。在某些实施方案中，带有叔胺溶液的反应混合物的混合液导致盐形式的式Ic化合物的沉淀，其可通过过滤收集并干燥，用于步骤2中。在某些实施方案中，优选使用N，N-二甲基-N-环己基胺作为沉淀偶合产物的叔胺。

步骤II-第二个酰胺化偶合反应

制备式I化合物的本发明方法的第二个步骤是在步骤I提供的铵盐化合物Ic和选自式Id化合物和式Id’化合物的盐化合物之间，进行第二个偶合反应。在本发明的某些实施方案中，优选使用式Id’化合物。因此，第二个酰胺化偶合反应通过在至少一种肽偶合剂和一或多种包含碱性氮原子的试剂(其选自叔胺、酰胺和吗啉化合物及其两或更多个的混合物)的存在下，所述包含碱性氮原子的试剂，通过使式Ic化合物与选择的式Id的的盐化合物反应进行。反应通常在约-10℃至约+30℃，优选小于约30℃的温度下进行。

在某些实施方案中，优选使用乙酸乙酯作为溶剂。可使用的其它溶剂包括二甲基甲酰胺(DMF)，N-甲基吡咯烷酮(NMP)、二甲基乙酰胺和乙腈(ACN)及其两或更多种的组合。本发明方法步骤II中使用的适合的肽偶合剂包括但不限于，例如1-羟基-苯并三唑(HOBt，包括水润湿和水合物两种)、乙基[(3-二甲氨基)丙基]碳化二亚胺-盐酸盐(EDCI-HCl)、羰基二咪唑(CDI)、1-氯-3，5-二甲氧基三嗪(DMT-Cl)、2-羟基吡啶及其两或更多种的混合物。在本发明的某些实施方案中，优选在选自下列的溶剂中使用所选择的偶合剂：乙酸乙酯、二甲基甲酰胺(DMF)、N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)及其两或更多种的混合物。在本发明的某些实施方案中，优选使用一或多种包含碱性氮原子的部分，其选自三乙胺、二异丙基乙胺、2，6-二甲基吡啶、N-甲基吗啉和四甲基乙二胺。

在本发明的某些实施方案中，优选使用偶合剂，其包含一或多种偶合剂和溶剂，其选自下列组合：(i)乙酸乙酯和DMF或NMP中的HOBt-单水合物与EDCI-HCl的组合；(ii)在乙酸乙酯和N-甲基吡咯烷酮中的水湿润的HOBt与EDCI-HCl的组合；(iii)乙酸乙酯和DMF或N-甲基吡咯烷酮(NMP)中的DMAP与EDCI-HCl的组合；(iv)乙酸乙酯和DMF中的羰基二咪唑(CDI)；(v)乙酸乙酯和DMF中的1-氯-3，5-二甲氧基-三嗪；(vi)1，3，5-三甲氧基-2，4，6-三嗪；和(vii)乙酸乙酯和DMF中的2-羟基吡啶与EDCI-HCl的组合。在某些实施方案中，优选加入叔胺二异丙基乙胺或N-甲基吗啉作为具有碱性氮原子的部分。

一般地，所用的式Ic铵盐的量与式Id盐化合物的量的比率约为0.76当量的铵盐Ic∶1.0当量的式Id盐化合物至约为1.0当量的铵盐Ic∶1.1当量的式Id盐化合物，优选使用1∶1.1的比率。一般地，以使用的式Ic铵盐的量为基础，所用的偶合剂的量应至少约为1.05当量。一般地，以基于存在的式Ic化合物的量计，所加入的叔胺的量约为0.5当量-2.5当量，优选约为0.75当量-2.0当量。

在其中使用式Id’盐化合物的那些实施方案中，参照以上流程I，进行第二步骤(2’b)，其中将加成物的-OH官能团氧化得到对应的酮，因此得到式I化合物。该氧化反应可根据以上提及的专利和公布的申请中的方法进行，例如美国专利申请号7,012,066第451专栏，第20-29行中描述的方法以及2006年11月13日提交的美国专利代理人案号(attorney docket no.)CD06366L01的同时待审的美国专利申请中描述的方法。

本发明步骤I中使用的起始原料和本发明步骤II中使用的式Id的盐化合物可根据任何以上提及的专利和公布的申请中描述的方法制备。

实施例

实施例1-根据流程II步骤1制备Ic’(N，N-二甲基环己基胺盐)

向反应器(R-1)中加入351kg式Ia化合物、314kg式Ib化合物和807L乙腈。将反应温度调节至0-10℃。向R-1中顺次加入323kg2，6-二甲基吡啶和123L乙腈，同时保持温度在0-15℃。在5-25℃之间，顺次加入351kg EDCI-HCl和123L乙腈。将混合物在20-30℃搅拌4h。通过HPLC检查反应完成，表明未反应的化合物Ia少于0.75％。在15-25℃之间，向R-1中顺次加入1755L MTBE和807kg9.9％HCl。将该批次搅拌15分钟，并静置至少30分钟，然后将水层分离到HOLDTANK中。在15-25℃，向R-1中加入807kg9.9％HCl。将该批次搅拌15分钟，并静置30分钟，然后将水层分离到HOLD TANK中。向R-2中顺次加入211kg碳酸氢钠和4001L水，一起搅拌直至所有固体溶解。将R-2中的1404L的NaHCO₃溶液转移至15-25℃下的R-1中。将混合物搅拌15分钟，并静置至少30分钟。将水层分离到HOLDTANK中。将140kg氯化钠加入到R-2中的NaHCO₃溶液中。将R-2中一半的NaHCO₃/NaCl溶液转移至R-1中。将R-1中的所有反应物搅拌15分钟，并静置至少30分钟。将水层分离到HOLD TANK中。将R-2中剩余的NaHCO₃/NaCl溶液转移至R-1中。将R-1中的所有反应物搅拌15分钟，并静置至少30分钟。将水层分离到HOLD TANK中。将R-1中的混合物真空浓缩至约1053L。向R-2中顺次加入97kg氢氧化锂单水合物和1404L水，将混合物在20-30℃下搅拌直至所有固体溶解。将R-2中的氢氧化锂溶液转移至R-1中。将所有反应物在20-30℃下搅拌3h。通过HPLC检查水解完成，表明100％转化。向R-1中顺次加入1053L的MTBE和1404L水。将混合物搅拌20分钟，并静置至少30分钟。将水层分离到R-2中。将有机层转移至HOLDTANK中。将1053L MTBE加入到R-2中。将混合物搅拌约10分钟，并静置至少30分钟。将水层分离到R-1中。将有机层转移至HOLDTANK中。在20-30℃下，向R-1中顺次加入293kg 9.9％HCl、1530kg乙酸异丙酯和660kg 9.9％HCl。将R-1中的混合物搅拌30分钟，并静置至少30分钟。将水层分离到HOLD TANK中。向R-2中顺次加入35kg氯化钠和702L水。将R-2中的NaCl溶液转移至R-1中。在15-25℃下，将混合物搅拌15分钟，并静置至少30分钟。将水层分离到HOLD TANK中。通过1μm内联过滤器，将R-1中的批料和306kg乙酸异丙酯漂洗液转移至R-2中。在35-60℃下，将R-2中的混合物真空浓缩至约1404L。向R-2中加入918kg乙酸异丙酯，在35-60℃下，将该批料真空浓缩至约1404L。该批中含水量＜0.5％w/w。向R-2中加入1530kg乙酸异丙酯。将混合物温度调节至43-48℃，将109kg的N，N-二甲基环己基胺(DMCA)加入到R-2中。将于11L乙酸异丙酯中的4kg化合物Ic’晶种加入到R-2中。在43-48℃下，将批料搅拌5h，放置1小时。在43-48℃下，用2h将130kgDMCA加入到R-2中。向R-2中加入153kg乙酸异丙酯。在3小时期间，将批料冷却至5-10℃。将该批产物用离心机分次过滤。将湿饼用冷乙酸异丙酯洗涤，在25℃下真空干燥4小时，然后在45℃下真空干燥至少8h。得到706kg化合物Ic’(90％收率)。¹H NMR(DMSO-d6)，δ0.80(s，3H)，0.91(s，9H)，0.99(s，3H)，1.02-1.25(m，5H)，1.17(s，9H)，1.35(d，J＝8Hz，1H)，1.43(dd，J＝5和8Hz，1H)，1.54-1.58(m，1H)，1.68-1.78(m，3H)，2.23(s，6H)，2.28(m，1H)，3.73(dd，J＝5和10Hz，1H)，3.96(d，J＝10Hz，1H)，4.08(s，1H)，4.15(d，J＝10Hz，1H)，5.87(d，J＝10Hz，1H)，5.95(brs，1H)。

实施例2-根据流程II步骤2，使用NMP中的湿润的HOBT并在EDCI-HCl存在下，制备式Ix化合物

向一反应器中加入80mL乙酸乙酯，接着向反应器中加入20.01g(40.4mmol)的Ic’和9.20g(44.1mmol，1.09当量)的Id’。再向反应器中加入20mL乙酸乙酯和20.5gN-甲基吡咯烷酮。将反应器的内容物冷却至15℃。再顺次加入3.67g(27.16mmol，0.59当量)的1-羟基苯并三唑单水合物和2.96g水。顺次向该反应混合物中加入N-甲基吗啉(2.83g，28.0mmol，0.63当量)和乙基[(3-二甲氨基)丙基]碳化二亚胺-盐酸盐(EDCI-HCI)，(9.98g，52.1mmol，1.30当量)。将反应混合物在15℃下搅拌直至完成(LC分析剩余的Ic’＜0.5面积％)，在该种情况下，时间为3h。

将反应器温度升高至20℃，顺次加入80mL的DI水和40mL的9.9％盐酸水溶液。将反应物在20℃下搅拌13分钟，然后使之分层90分钟。除去水层，用60mL乙酸乙酯处理。将混合物在20℃下搅拌20min，然后使之分层25分钟。将有机层与前面的有机层合并。将合并的有机层用80mL DI水和40mL 9.9％盐酸水溶液处理。将混合物在20℃下搅拌15min，然后使之分层28分钟。弃去水层废弃物。将有机层用120mL 0.45M碳酸钾溶液处理，并在20℃下搅拌21min，然后使之分层30分钟。弃去水层废弃物。将有机层用120mL 0.45M碳酸钾溶液处理，并在20℃下搅拌31min，然后使之分层28分钟，随后弃去水层废弃物。将有机层用120mL DI水处理，并在20℃下搅拌15min，然后使之分层59分钟。弃去水层废弃物。LC检测有机层中式Ix化合物的拆分收率为92％。

实施例2a

在一类似批次中，以100g Ic’为原料，将得到的含有式Ix化合物的有机层浓缩至486.45g。将162.17g的该物质(KF＝5.6％)用92mL乙酸乙酯处理，并经旋转蒸发浓缩至98mL，然后用7mL乙酸乙酯处理(KF＝3.0％)。加入0.75mL的DI水，使得KF至3.8％。用2小时，通过注射器泵将该乙酸乙酯溶液慢慢加入到一圆底烧瓶中-10℃下的庚烷中。加入后，将该浆状液在-10℃下搅拌15分钟，然后过滤，用66mL和55mL的冷庚烷顺次洗涤。将白色固体在滤器上干燥30分钟，然后在室温的真空箱中干燥3日。将真空箱中的温度升至70℃下1日。该结构式化合物的最终固体量为31.51g，收率89.6％。

实施例3-根据流程II步骤2，使用HOBT单水合物并在EDCI-HCl存在下，制备式Ix化合物

将EDCI-HCl(244.00kg，1272mol，1.27equiv)、1-羟基苯并三唑水合物(80.00kg，592mol，0.59equiv)和236.00kg(1131mol，1.13equiv)式Id’化合物(流程II，步骤2)加入到一反应器中，并溶解于DMF(1407kg)和乙酸乙酯(1492L)中。将反应物冷却至6.2℃，顺次加入二异丙基乙胺(80.00kg，619mol，0.62equiv)和525.00kg固体的式Id’化合物(94.68％w/w，1004mol，1.00equiv)。将反应混合物保持在0℃-10℃的温度下，并搅拌30min，然后用1.5小时温热至20℃-25℃，并在继续搅拌下，在20℃-25℃的温度下保持3.5h。将反应温度调节至15℃-25℃，顺次加入水(2486.5L)和乙酸乙酯(3486.8L)，接着加入36％HCl(224.00kg)。将混合物搅拌15分钟，然后移去水层。将水层用乙酸乙酯(5438L)反萃取。将合并的有机物用水(1988.5L)和36％HCl(70.00kg)处理。将混合物搅拌15分钟，然后移去水层。然后将有机层用0.45M K₂CO₃(aq)(1991.2L水和124.00kgK₂CO₃)处理。将混合物搅拌15分钟，然后移去水层。将有机层用0.75M KHCO₃(aq)(2010L)处理。将混合物搅拌15分钟，然后移去水层。将有机层用0.75MKHCO₃(aq)(1935L)处理。将混合物搅拌15分钟，然后移去水层。将有机层用水(1989.6L)处理。将混合物搅拌15分钟，然后移去水层。将有机层真空浓缩至1590L，加入水(19.1L)，用2.5h将混合物加入到-10℃的庚烷(7457.3L)中。将得到的固体产物通过离心过滤分离，用冷的庚烷洗涤，在30℃下真空干燥6h，然后在70℃下真空干燥15h，得到白色固体的式Ix化合物(473.55kg，90.4％)。

实施例4-根据流程II步骤2，使用在EDCI-HCl存在下的HOBT以及所选择的式Id’化含物的对映体，制备式Ix化合物

将包含2.5g(12mMol.)混合(S，S和R，R)对映体和0.25g(1.2mMol.)混合(R，S和S，R)对映体(对映体对比例87/13，[(RR+SS)/(RS+SR)])的式Id’化合物(流程II，步骤2)与1.0g 1-羟基苯并三唑水合物(HOBT，7.4mmol)在21ml乙酸乙酯中混合。将混合物冷却至0℃-5℃之间的温度下。向反应混合物中加入2.1g N，N-二异丙基乙胺(16.2mmol)、5ml 1-甲基-2-吡咯烷酮和4.7g式Ic’化合物(9.5mmol)，接着加入2.85g 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(EDCI HCl，14.9mmol)。将反应混合物的温度保持在0℃-10℃之间，并搅拌15min，然后慢慢温热至20℃-25℃之间的温度，并在该温度下保持并搅拌过夜。搅拌器结束后，向反应混合物中加入40mL乙酸乙酯和25mL 3N HCl，同时保持温度在15℃-25℃之间。分离各层。将有机层用一等份15ml 3NHCl、一等份15ml水和三等份20mL 10％碳酸钾水溶液以及一份20mL水连续洗涤。将有机层浓缩，再加入乙酸乙酯，然后浓缩至干。得到为白色粉末的式Ix产物(3.3g，(RR+SS)/(RS+SR)的比率为87/13)。

实施例5-根据流程II步骤2，使用在EDCI-HCl存在下的HOBT以及所选择的式Id’化合物的对映体，制备式Ix化合物

将包含2.5g(12mMol.)混合(S，R和R，S)对映体和0.25g(1.2mMol.)混合(S，S和R，R)对映体(对映体对比例10/90，[(RR+SS)/(RS+SR)])的式Id’化合物(流程II，步骤2)与1.0g 1-羟基苯并三唑水合物(HOBT，7.4mmol)在21ml乙酸乙酯中混合。将混合物冷却至0℃-5℃之间的温度下。向反应混合物中加入1.8g N，N-二异丙基乙胺(13.9mmol)、5ml 1-甲基-2-吡咯烷酮和4.7g式Ic’化合物(9.5mmol)，接着加入2.35g 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(EDCI HCl，12.2mmol)。将反应混合物的温度保持在0℃-10℃之间，并搅拌15min，然后慢慢温热至20℃-25℃之间的温度，并维持在该温度范围并搅拌过夜。搅拌期结束后，向反应混合物中加入40mL乙酸乙酯和25mL 3N HCl，同时保持温度在15℃-25℃之间。分离各层。将有机层用一等份15ml3N HCl、一等份15ml水和一等份20mL 10％碳酸钾水溶液以及一份20mL水连续洗涤。将有机层浓缩，再加入乙酸乙酯，然后浓缩至干。得到为白色粉末的式Ix化合物(3.8g，(RR+SS)/(RS+SR)的比率为10/90)。

实施例6-通过由CDI处理式Ic’化合物制备的中间体制备式Ix化合物

根据以下流程，使用CDI，在偶合反应中制备式Ix化合物：

1.加入53.2g 1C’盐(94.3wt/wt％，50g活性)

2.加入150ml(3X)DMF(KF：0.1％)；

3.加入11-16ml DIPEA(0.8-1.2eq.，KF：0.04％)，然后加入19.2g(1.15eq.)CDI；

4.在室温下将批料搅拌2-3hr

注意：如果需要，加入更多的CDI以促进反应完成；

5.室温下加入23.75g(1.12eq.)1d’，室温下搅拌至反应完成；

6.将批料冷却至10℃，顺次加入350ml(7X)EtOAc和250ml(5X)水；

7.用浓HCl将水层pH调节至～0.5，保持反应混合物在15℃-20℃，然后分层；

8.将有机层用1N HCl洗涤2-3次；

9.将有机层用两等份8-10％K₂CO₃和/或KHCO₃水溶液洗涤；

10.将有机层用4X水洗涤；

11.测定和/或从有机层中分离，一般式Ix化合物80.3％溶液收率，纯度为98.95面积％。

实施例7a-根据流程II，在EDCI-HCl存在下使用2-羟基吡啶作为偶合剂，制备式Ix化合物

在室温下，使11.70g EDCI-HCl(61.0mmol，1.62equiv)、11.31g式Id’化合物(54.2mmol，1.44equiv)和2.64g 2-羟基吡啶(27.8mmol，0.74equiv)悬浮于包含100mL 1∶1甲基叔丁基醚和DMF混合物的一反应容器中。向反应混合物中加入二异丙基乙胺(12.8mL，73.5mmol，1.95equiv)，接着加入固体形式的20.00g式Ic’化合物((93.1％w/w)，37.6mmol，1.00equiv)。将反应混合物在室温(19℃-22℃)下搅拌过夜，并通过HPLC检测反应完成。搅拌结束后，向反应混合物中加入50mL甲基叔丁基醚和50mL 2.5％HCl水溶液。将水层用4等份50mL甲基叔丁基醚反萃取。将合并的有机层用100mL 2.5％HCl(aq)、100mL1％HCI(aq)、100mL水、100mL 0.45M K₂CO₃(aq)、100mL 0.75MKHCO₃(aq)和100mL水连续洗涤。将有机层浓缩至136mL，然后冷却至10℃。用50分钟，向该冷的、浓缩的有机层中加入200mL 0℃下的庚烷。将得到的浆状液搅拌50分钟，过滤分离固体，用35mL庚烷洗涤。将由此得到的固体在75℃下真空干燥过夜，得到～1g白色固体(滤液和烧瓶壁损失4.59g)的所要求产物(总收率26.6％)。

实施例7b-根据流程II，在EDCI-HCl存在下使用DMAP作为偶合剂，制备式Ix化合物

在室温下，使9.75g EDCI-HCI(50.9mmol，1.35equiv)、9.79g式Id’化合物(46.9mmol，1.24equiv)和2.76g DMAP(22.6mmol，0.60equiv)悬浮于包含120mL 1∶1乙酸乙酯和DMF混合物的一反应容器中。向反应混合物中加入二异丙基乙胺(10.2mL，58.6mmol，1.51equiv)，接着加入固体形式的20.03g式Ic’化合物((93.1％w/w)，37.7mmol，1.00equiv).将反应混合物在室温(19℃-22℃)下搅拌17小时，并通过HPLC检测反应完成。反应完成后，向反应混合物中加入50mL乙酸乙酯和100mL 2.5％HCl水溶液。将水层用60mL乙酸乙酯反萃取。将合并的有机层用80mL 1％HCI(aq)、80mL水、80mL 0.45MK₂CO₃(aq)、80mL 0.75M KHCO₃(aq)、80mL 0.75M KHCO₃(aq)和80mL水连续洗涤，然后通过旋转蒸发浓缩至47.45g。将SS异构体从浓缩液中结晶出来，向该浆状液中加入2.75mL水。将SS异构体溶解4-5小时。用47.5分钟，将该有机浓缩液加入到0℃下的171mL庚烷中，然后在0℃下搅拌30分钟。从混合液中沉淀出固体，真空过滤分离固体产物。将由此得到的固体在75℃下真空干燥18小时，得到11.2g(56.9％收率，91.0％wt/wt纯度)的式Ix化合物。

实施例7c-根据流程II，在EDCI-HCl存在下使用1，3，5-三甲氧基-2，4.6-三嗪作为偶合剂，制备式Ix化合物

在室温下，使7.56g 1，3，5-三甲氧基-2，4，6-三嗪(43.1mmol，1.13equiv)和9.79g式Id’化合物(46.9mmol，1.23equiv)悬浮于包含100mL1∶1乙酸乙酯和DMF混合物的一反应容器中。向反应混合物中加入N-甲基吗啉(4.7mL，42.7mmol，1.12equiv)，接着加入固体形式的20.01g式Ic’化合物((93.9％w/w)，38.0mmol，1.00equiv)。将反应物在室温(19℃-22℃)下搅拌25.5小时，并通过HPLC检测反应完成。反应完成时，向反应混合物中加入50mL乙酸乙酯和100mL 1M枸橼酸水溶液。将水层用60mL乙酸乙酯反萃取。将合并的有机层用100mL 1M枸橼酸(aq)、80mL 1M枸橼酸(aq)、85mL水、80mL 0.45M K₂CO₃(aq)、80mL 0.75M KHCO₃(aq)、80mL水和80mL 1M枸橼酸(aq)连续洗涤。HPLC分析表明溶液中含84.7％收率的式Ix化合物。

虽然结合以上给出的特定实施方案已对本发明进行了描述，但这些实施例只是供说明之用且并不作为限定。很多选择、变更及其其它变化对于本领域一般技术人员来讲都是显而易见的。所有这些选择、变更和变化都在本发明的精神和范围之内。