一种抗促性腺激素释放激素受体的单克隆抗体与应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是一种抗促性腺激素释放激素受体的单克隆抗体片段及其单克隆抗体与应用。

背景技术

促性腺激素释放激素(GnRH)起初定义为十肽激素。它的功能是刺激促性腺激素的释放。通过与特定细胞膜外有GnRH受体的垂体前叶细胞特异性地结合，释放出如LH和FSH等促性腺激素。后续研究表明，GnRH与其受体还在垂体以外许多正常以及恶性细胞或组织中担当角色，可是在垂体以外细胞或组织的角色尚未被完全了解。然而，GnRH或其类似物对不同人体组织器官的癌细胞的抗增殖功效已经被报道。许多GnRH类似物连接细胞毒药物作为抗癌药的临床研究已经报道。事实上一部分抗癌药物就是制成GnRH或其类似物与抗癌细胞毒素成分，如：AN-152或AN-207的共价连接。另一部分则是用GnRH类似物及其拮抗性类似物作为抑制肿瘤生长的药物。与一般化疗药物相比，这些方法已经显现其治疗癌症的有效和低毒性。

与GnRH相类似，特异性针对细胞表面GnRH受体的单克隆抗体具有屏蔽受体功能，阻止体内外癌细胞的增殖活动或改变生殖功能。近年来以抗体为基础的抗癌药物的发展已经成为一种选择性的人体癌症治疗方法(Pawson，A.J.，Maudsley，S.，Morgan，K.，Davidson，L.，Naor，Z.，and Millar，R.P.Inhibition of human Type I Gonadotropin-releasing hormonereceptor(GnRHR)function by expression of a human Type II GnRHRgene fragment.Endocrinol.2005；146(6)：2639-2649)。

然而癌细胞表面的药物靶点应当明确且非常丰富，作用机理应当说明清晰。这种方法的优点是：减少副作用，并保持治疗用抗体药物在循环中的相对长半衰期(5-20天)。综合这些因素，抗GnRH受体单克隆抗体具有靶向的特异性和抑制癌症细胞生长的确实功效，将成为中和或杀死癌症细胞的理想选择。

抗GnRH受体单克隆抗体细胞株的制备

一般而言Kohler and Milstein的方法就足以完成制备所需适用的抗体；当然也有其他方法，如(J.L.，and Herzenberg.L.A.(1982)J.Immunlo.Meth.52：1.)

经过骨髓瘤细胞与血蓝蛋白结合GnRH受体肽(N1-29)免疫的哺乳动物脾细胞或外周血淋巴细胞融合，制造出能够分泌理想单克隆抗体的杂交瘤传代细胞株。特别需要指出的是骨髓瘤细胞株的来源必须与抗体分泌细胞同种。已经有成熟的骨髓瘤细胞株来源于小白鼠和大白鼠，这些哺乳动物可以产生高质量的多克隆抗血清和免疫球蛋白分泌细胞。任何成功的传代细胞株都可以用作同种来源的分泌细胞。另外某些被感染的抗体分泌细胞也可以传代，如EB病毒。这些技术都可以用做发明分泌免疫球蛋白传代细胞株。

在聚乙二醇等活化剂存在条件下，骨髓瘤细胞与抗体分泌细胞融合成为杂交瘤细胞。现在已经有公开发表的具体标准和方法，在此不做陈述。决定成败的关键更主要的是传代细胞株的选择与传代方法，以及选择抗体分泌细胞的种群。后续则依赖于应用正确的致敏源促使哺乳动物产生这些细胞。

首选的杂交瘤制备方法，分离免疫小鼠的脾细胞并与同种骨髓瘤细胞株进行融合，如：NS-1骨髓瘤细胞加入50％PEG，细胞融合后使其在特定的培养基中生长。其他一些成熟的骨髓瘤细胞株有：HAT或AT敏感细胞株，他们不能够在含有次黄嘌呤、氨喋呤和胸苷的HAT培养基生长，或者不能在含有重氮丝氨酸和次黄嘌呤的AH培养基生长。

因此，只有与正常细胞融合的传代细胞才能够在选定的培养基中生存；未融合的HAT或AH敏感细胞将凋亡，(不能传代的正常细胞即便融合最终还是会凋亡)。只有培养融合的传代细胞才能够经过筛选而得到理想的抗体。

培养在选定培养基中的融合细胞或其他方法的细胞传代需经过筛选。而筛选细胞的理想特征就是可以分泌抗体。有许多针对GnRH受体识别抗体的筛选方法可以采用，如基于免疫反应的试验检测培养基，包括免疫蛋白印迹试验，酶联免疫吸附试验和放射免疫试验等等。

确定了一个可以分泌正确抗体的细胞株，此抗体便可以通过标准的纯化技术分离出来。另外抗体的标记也有另外的标准技术。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种抗促性腺激素释放激素受体的单克隆抗体或其片段。

本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述抗促性腺激素释放激素受体的单克隆抗体或其片段的应用。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：

一种鼠源杂交瘤细胞系，其保藏号为ATCC GHR-106PTA-10252(保藏单位：美国弗吉尼亚洲马纳萨斯镇大学大道10801号美国标准生物品收藏中心(American Type Culture Collection地址美国弗吉尼亚洲马纳萨斯镇大学大道10801号，Virginia 20110-2209USA)、保藏日期2009年8月5日、保藏编号GHR-106PTA-10252)。

一种抗促性腺激素释放激素受体的单克隆抗体，被命名为GHR-106，是由上述鼠源杂交瘤细胞系分泌的单克隆抗体。

优选的，上述抗促性腺激素释放激素受体的单克隆抗体，所述单克隆抗体的轻链可变区、重链可变区基因及其编码的氨基酸序列为序列表中<400>1、<400>2、<400>3和<400>4所示的序列，即所述单克隆抗体的轻链可变区的蛋白质序列为：

M  D  S  Q  A  Q  V  L  I  L  L  L  L  W  V  S  G  T  C  G

D  I  V  M  S  Q  S  P  S  S  L  A  V  S  A  G  E  K  V  T

M  S  C  K  S  S  Q  S  L  L  N  S  R  T  R  K  N  Y  L  A

W  Y  Q  Q  K  P  G  Q  S  P  K  L  L  I  Y  W  A  S  T  R

E  S  G  V  P  D  R  F  T  G  S  G  S  G  T  D  F  T  L  T

I  S  S  V  Q  A  E  D  L  A  V  Y  Y  C  K  Q  S  Y  N  L

Y  T  F  G  G  G  T  K  L  E  I  K

其重链可变区的蛋白质序列为：

Q  V  Q  L  K  E  S  G  P  G  L  V  A  P  S  Q  S  L  S  I

T  C  T  V  S  G  F  S  L  S  R  Y  S  V  H  W  V  R  Q  P

P  G  K  G  L  E  W  L  G  M  I  W  G  G  G  S  T  D  Y  N

S  A  L  K  S  R  L  S  I  S  K  D  N  S  K  S  Q  V  F  L

K  M  N  S  L  Q  T  D  D  T  A  M  Y  Y  C  A  R  G  N  D

G  Y  Y  S  F  A  Y  W  G  Q  G  T  L  V  T  V  S  S

其中轻链三个CDR区的氨基酸序列为：CDR1为K S S Q S L L N S R T RK N Y L A，CDR2为W A S T R E S，CDR3为K Q S Y N L Y T；重链三个CDR区的氨基酸序列为：CDR1为R Y S V H，CDR2为M I W G G G S T D Y N S AL K S，CDR3为G N D G Y Y S F A Y。

优选的，上述抗促性腺激素释放激素受体的单克隆抗体，对其氨基酸序列进行改变、缺失或添加一个或几个氨基酸，仍保留相同的功能。

优选的，上述抗促性腺激素释放激素受体的单克隆抗体，与细胞表面GnRH受体的N1-29氨基酸片段发生特异性反应，与GnRH受体反应的分离常数介于10^-7M和10^-9M之间。

优选的，上述抗促性腺激素释放激素受体的单克隆抗体，与GnRH受体的结合被GnRH竞争，使培养的肿瘤细胞因调低选择性核糖体蛋白而凋亡。

优选的，上述抗促性腺激素释放激素受体的单克隆抗体，其人源化形式能够与细胞表面表达GnRH受体的任何癌细胞或人体组织反应，抑制肿瘤生长。

上述抗促性腺激素释放激素受体的单克隆抗体作为制备抗肿瘤药物的应用。

上述抗促性腺激素释放激素受体的单克隆抗体，可视为一种GnRH的衍生物，具有调节生殖生理机能的作用。

上述抗促性腺激素释放激素受体的单克隆抗体的制备方法：

根据背景技术中记述的抗促性腺激素释放激素受体单克隆抗体的制备方法，将纯化分离的细胞株进行传代与选择：

在人体细胞，GnRH受体是一种G蛋白样的膜转移蛋白，单克隆抗体只会与GnRH受体在细胞外区域的功能区氨基酸连接，在这种情况下，在人体细胞外区域GnRH受体的棕榈酰寡肽所对应的N基端氨基酸残基(1-29，182-193，195-206和293-306)被分别与血蓝蛋白结合。

这些与血蓝蛋白结合的合成肽分别作为抗原物质免疫小鼠，制成分泌特异性单克隆抗体杂交瘤，经过多次细胞融合并筛选许多单克隆抗体，最终产生一株单克隆抗体，GHR-106，即通过血蓝蛋白结合肽(N1-29)免疫并选择其对人体GnRH受体具有高度特异性和亲和性的特性。

本发明的有益效果是：

本发明提供了鼠源杂交瘤细胞系(保藏号为ATCC GHR-106PTA-10252)及其分泌的抗促性腺激素释放激素受体的单克隆抗体GHR-106，所述抗体能够通过与肿瘤细胞表面受体结合从而对肿瘤细胞起到有效的抑制作用，继而有望用于肿瘤的诊断和治疗过程以及制备抗肿瘤药物的应用。

附图说明

图1(A)为：酶标免疫法证实GHR106单克隆抗体与人工合成的含GnRH受体N端1-29氨基酸序列的多肽的结合，随GHR106单克隆抗体量的增加而增加；

图1(B)为：酶标免疫法证实GHR106单克隆抗体与OC-3-VGH肿瘤细胞的结合随GHR106量的增加而增加；

图2(A)为：GnRH I对GHR106单克隆抗体与OC-3-VGH肿瘤细胞结合的抑制作用；

图2(B)为：人工合成的含GnRH受体N-端1-29氨基酸序列的多肽对GHR106单克隆抗体与OC-3-VGH肿瘤细胞结合的抑制作用；

图3为：所培养的OC-3-VGH肿瘤细胞经GHR-106处理后所发生的细胞程序性凋亡；

图4为：所培养的OC-3-VGH肿瘤细胞经GHR-106单克隆抗体处理，能够调低四种所选的核糖体蛋白的信使RNA的表达；

图5为：经免疫组织化学染色检测出在不同病程分期卵巢癌所表达的GnRH受体；

图6为：GHR106单克隆抗体的核苷酸序列及氨基酸序列。

保藏信息

分类名词：鼠源杂交瘤细胞系(Murine hybridoma)

保藏单位名称：美国标准生物品收藏中心(ATCC)

保藏单位地址：美国弗吉尼亚洲马纳萨斯镇大学大道10801号(Licensingand Services 10801 University Boulevard Manassas，Virginia 20110-2209USA)

保藏日期：2009年8月5日

保藏号：GHR-106PTA-10252

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明所述技术方案作进一步的说明。

实施例1

如图6所示，一种抗促性腺激素释放激素受体的单克隆抗体，其轻链可变区的蛋白质序列为：

M  D  S  Q  A  Q  V  L  I  L  L  L  L  W  V  S  G  T  C  G

D  I  V  M  S  Q  S  P  S  S  L  A  V  S  A  G  E  K  V  T

M  S  C  K  S  S  Q  S  L  L  N  S  R  T  R  K  N  Y  L  A

W  Y  Q  Q  K  P  G  Q  S  P  K  L  L  I  Y  W  A  S  T  R

E  S  G  V  P  D  R  F  T  G  S  G  S  G  T  D  F  T  L  T

I  S  S  V  Q  A  E  D  L  A  V  Y  Y  C  K  Q  S  Y  N  L

Y  T  F  G  G  G  T  K  L  E  I  K

其重链可变区的蛋白质序列为：

Q  V  Q  L  K  E  S  G  P  G  L  V  A  P  S  Q  S  L  S  I

T  C  T  V  S  G  F  S  L  S  R  Y  S  V  H  W  V  R  Q  P

P  G  K  G  L  E  W  L  G  M  I  W  G  G  G  S  T  D  Y  N

S  A  L  K  S  R  L  S  I  S  K  D  N  S  K  S  Q  V  F  L

K  M  N  S  L  Q  T  D  D  T  A  M  Y  Y  C  A  R  G  N  D

G  Y  Y  S  F  A  Y  W  G  Q  G  T  L  V  T  V  S  S

所述杂交瘤细胞系及其分泌的抗促性腺激素释放激素受体的单克隆抗体的具体制备方法如下：

对应于人类GnRH受体N-端氨基酸序列1-29，182-193，195-206或293-306的人工合成的多肽按常规方法分别与KLH(血蓝蛋白)结合制成免疫原物质(四种新抗原)，200微升含100微克合成肽-KLH抗原的磷酸缓冲液、与等体积弗氏完全佐剂混合乳化，混合物皮下注射到三只BALB/C小鼠体内.2星期及4星期后，分别再次注射同样计量的合成肽-KLH抗原，不过换用弗氏不完全佐剂.免疫小鼠的抗体活性由ELISA方法测定，微孔板分别包被以上四种合成肽.碱性磷酸酶标记的山羊抗小鼠IgG作为第二抗体，用p-NPP显色，在405nm读取数据.免疫活性较高的小鼠脾细胞与SP-2脊髓瘤细胞融合以制备杂交瘤，用ELISA方法筛选和鉴定所制备的单克隆抗体，共筛选并建立了15株杂交瘤，其产生的抗体能分别与GnRH受体结合.其中免疫活性最高的抗体是用GnRH受体N-端氨基酸序列1-29的合成肽为免疫原产生的，命名为GHR106单克隆抗体，GHR-106的亚型为IgG1。

实施例2

GHR-106单克隆抗体的特性

用GnRH受体N端1-29氨基酸片段包被微孔板进行ELISA试验，GnRH受体与抗促性腺激素释放激素受体的单克隆抗体GHR-106之间的分离常数介于10^-7M和10^-9M之间。将100微升不同浓度的抗促性腺激素释放激素受体的单克隆抗体GHR-106加入反应微孔，在37℃反应1小时后倒掉未反应的抗体，反应微孔清洗一次后再加入100微升碱性磷酸酶标记的山羊抗小鼠IgG作为第二抗体，37℃反应1小时.反应微孔清洗五次后再用p-NPP显色，在405nm读取数据。如图1(A)所示，ELISA实验显示抗促性腺激素释放激素受体的单克隆抗体GHR-106与包被的合成肽(对应人GnRH受体N端1-29氨基酸片断)呈剂量依赖性结合。

用OC-3-VGH卵巢癌细胞包被微孔板进行ELISA试验，其余步骤同上，如图1(B)所示，ELISA实验显示抗促性腺激素释放激素受体的单克隆抗体GHR-106与包被的OC-3-VGH癌细胞呈剂量依赖性结合。

可见，GHR-106单克隆抗体既可以与GnRH受体结合，也可以与肿瘤细胞结合。

实施例3

GnRH I或GnRH受体N端1-29氨基酸片段对GHR106单克隆抗体与OC-3-VGH肿瘤细胞结合的抑制作用.

将100微升2μg/ml抗促性腺激素释放激素受体的单克隆抗体GHR-106加入包被OC-3-VGH卵巢癌细胞的微孔，实验条件同实施例2。如图2(A)所示，其结合能力受不同浓度的GnRH I的抑制，相对百分比信号与GnRH浓度成反比。

将100微升2μg/ml抗促性腺激素释放激素受体的单克隆抗体GHR-106加入包被合成肽(符合人GnRH受体N端1-29氨基酸片段)的微孔，实验条件同实施例2。如图2(B)所示，其结合能力受不同浓度的合成肽(人GnRH受体N基端1-29氨基酸片段)的抑制，相对百分比信号与合成肽的浓度成反比。通过用OC-3-VGH卵巢癌细胞提取物进行免疫印迹实验，显示与抗促性腺激素释放激素受体的单克隆抗体GHR-106结合形成的蛋白带分子量为60KDa，与人GnRH受体相符合。试验显示，包被在微孔板的癌细胞，抗促性腺激素释放激素受体的单克隆抗体GHR-106与GnRH受体结合，并依不同含量抑制了GnRH I与GnRH受体的结合。这个结果证实了抗促性腺激素释放激素受体的单克隆抗体GHR-106对人体GnRH受体具有高度特异性，即GHR-106单克隆抗体通过竞争性和GnRH受体结合从而抑制了GnRH与其受体的结合。

实施例4

GHR-106单克隆抗体抑制肿瘤细胞生长的治疗效果

GHR-106单克隆抗体在体外对癌细胞的抗增殖效果

用1μg/ml GHR-106(■)和0.1μg/ml GnRH(□)处理OC-3-VGH卵巢癌细胞，凋亡的百分比增加，其中癌细胞培养条件：RPMI-1640培养液，37℃，5％CO2。所谓癌细胞凋亡百分比增加的判断，在同时加入正常小鼠IgG，通过TUNEL试验予以证实。如图3所示，当抗促性腺激素释放激素受体的单克隆抗体GHR-106浓度达到10μg/ml时，经过24-72小时培养，癌细胞出现凋亡。

用抗促性腺激素释放激素受体的单克隆抗体GHR-106(1ug/ml)(灰色)及GnRH(0.1μg/ml)(黑色)一起培养24小时的OC-3-VGH卵巢癌细胞，如图4所示，选择性核糖体蛋白(P0、P1、P2和L37)的mRNA的表达下降，GAPDH的mRNA的表达被100％用作内部控制。PCR产物用1.5％琼酯胶电泳检测，观察到与抗促性腺激素释放激素受体的单克隆抗体GHR-106及GnRH一起培养24小时的癌细胞，表达mRNA的选择性核糖体蛋白包括：P0、P1、P2和L37出现下降。

其中用于PCR的引物分别为：

P0：5’-TTGTGTTCACCAAGGAGG-3’和5’-GTAGCCAATCTGCAGACAG-3’

P1：5’-CAAGGTGCTCGGTCCTTC-3’和5’-GAACATGTTATAAAAGAGG-3’

P2：5’-TCCGCCGCAGACGCCGC-3’和5’-TGCAGGGGAGCAGGAATT-3’

L37：5’-CAGAAGCGAGATGACGAAGG-3’和5’-CCAGAACATTTATTGCATGAC-3’

GAPDH：5’-GAAATCCCATCACCATCTTCC-3’和5’-CCAGGGGTCTTACTCCTTGG-3’

PCR：94℃40s，50℃40s，72℃      1min(20-35循环)

从所得到的结果看，抗促性腺激素释放激素受体的单克隆抗体GHR-106与GnRH受体在癌细胞表面发生特异性结合会引发癌细胞的凋亡。

此外，对于生殖组织或器官，被特异性人源化抗体封闭的GnRH受体也会出现影响生殖功能的结果，包括人体排卵，精子生成等生育调节功能；另一方面，人源化抗体药物能够表现为长效GnRH类比物，可以改变人体的生殖功能。

实施例5

免疫组织化学染色发现

用抗促性腺激素释放激素受体的单克隆抗体GHR-106针对GnRH受体，对39例确诊为不同分期卵巢癌病人的卵巢组织实施的特异性免疫组织化学染色，该实验由英属哥伦比亚大学医院进行。如图5所示，阳性染色率明显与卵巢癌的病程分期相关，I期病例约40％为阳性，晚期(III期和IV期)病例的阳性率则高达73％至100％；而正常卵巢组织(13例)均未见阳性染色。通过实验证实了癌组织所表达的GnRH受体伴随癌症病程的延续和发展，会不断增加。

上述结果显示在确诊卵巢癌不同分期病人(39例)的卵巢组织呈高比例阳性，且随病程阳性率明显增高，以相同的方式检测无卵巢癌病人的卵巢组织全部呈染色阴性。故GHR-106单克隆抗体有望用于与抗体结合的标识物的识别以及病理切片的肿瘤诊断。

实施例6

GnRH受体在人体癌细胞的表达

如下表所示，通过RT-PCR试验证明GnRH受体的mRNA在超过90％的人体癌细胞株中都有表达。这个结论清楚地说明在所有癌细胞，不论是发生于哪种组织器官，实际上都会表达GnRH受体。

其中用于PCR的引物为：

GnRHR1：5’-CAGAAGAAAGAGAAAGGGAAAAAGC-3’和

        5’-GATGAAAAGAGGGATGATGAAGAGG-3’；

用RT-PCR检测表达GnRHR1的癌细胞株

*：信号的强弱显示为，+(强)，±(弱)，-(看不见)。

**：正常增生和增殖的纤维母细胞来源与胚胎肺组织。

通过上述实施例可以清楚知道，GHR-106单克隆抗体能够有效的竞争性结合GnRH受体，从而进一步证实了GHR-106单克隆抗体对于肿瘤细胞的抑制作用。

上述参照实施例对该一种抗促性腺激素释放激素受体的单克隆抗体片段及其单克隆抗体与应用进行的详细描述，是说明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例，因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。

序列表SEQUENCE LISTING

<110>李，吉祐

<120>一种抗促性腺激素释放激素受体的单克隆抗体与应用

<130>

<150>US 61/239,704

<151>2009-09-03

<160>4

<170>PatentIn version 3.3

<210>1

<211>396

<212>DNA

<213>murine

<220>

<221>mRNA

<222>(1)..(396)

<223>单克隆抗体的轻链可变区的核苷酸序列

<400>1

atggattcac aggcccaggt tcttatattg ctgctgctat gggtatctgg tacctgtggg  60

gacattgtga tgtcacagtc tccatcctcc ctggctgtgt cagcaggaga gaaggtcact  120

atgagctgca aatccagtca gagtctgctc aacagtagaa cccgaaagaa ctacttggct  180

tggtaccagc agaaaccagg gcagtctcct aaactgctga tctactgggc atccactagg  240

gaatctgggg tccctgatcg cttcacaggc agtggatctg ggacagattt cactctcacc  300

atcagcagtg tgcaggctga agacctggca gtttattact gcaagcaatc ttataatctt  360

tacacgttcg gaggggggac caagctggaa ataaaa                            396

<210>2

<211>354

<212>DNA

<213>murine

<220>

<221>mRNA

<222>(1)..(354)

<223>单克隆抗体的重链可变区的核苷酸序列

<400>2

caggtgcagc tgaaggagtc aggacctggc ctggtggcac cctcacagag cctgtccatc  60

acatgcactg tctctgggtt ctcattatcc agatatagtg tacactgggt tcgccagcct  120

ccaggaaagg gcctggagtg gctgggaatg atatggggtg gtggaagcac agactataat    180

tcagctctca aatccagact gagcatcagc aaggacaact ccaagagcca agttttctta    240

aaaatgaaca gtctgcaaac tgatgacaca gccatgtact actgtgccag aggcaatgat    300

ggttactact cgtttgctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc ttca          354

<210>3

<211>132

<212>PRT

<213>murine

<220>

<221>ACETYLATION

<222>(1)..(132)

<223>单克隆抗体的轻链可变区的氨基酸序列

<400>3

Met Asp Ser Gln Ala Gln Val Leu Ile Leu Leu Leu Leu Trp Val Ser

1               5                   10                  15

Gly Thr Cys Gly Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala

            20                  25                  30

Val Ser Ala Gly Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser

        35                  40                  45

Leu Leu Asn Ser Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln

    50                  55                  60

Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg

65                  70                  75                  80

Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp

                85                  90                  95

Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr

            100                 105                 110

Tyr Cys Lys Gln Ser Tyr Asn Leu Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys

        115                 120                 125

Leu Glu Ile Lys

    130

<210>4

<211>118

<212>PRT

<213>murine

<220>

<221>ACETYLATION

<222>(1)..(118)

<223>单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列

<400>4

Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln

1               5                   10                  15

Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Arg Tyr

            20                  25                  30

Ser Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu

        35                  40                  45

Gly Met Ile Trp Gly Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys

    50                  55                  60

Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu

65                  70                  75                  80

Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala

                85                  90                  95

Arg Gly Asn Asp Gly Tyr Tyr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

            100                 105                 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

        115