一种基于嗅觉反应的抗云南切梢小蠹混交林树种及筛选方法

具体实施方式

实施例1：

(一)不同混交树种对云南切梢小蠹的嗅觉行为的影响

测试采用图1“Y”型嗅觉仪进行，其适应臂长20cm、内径4cm，测试臂长20cm、内径3cm，两臂之间夹角75°。测试臂依次连接装有气味源瓶、玻璃转子流量计、空气加湿器、活性炭空气过滤装置、空气压缩机，各部件之间用硅胶管连接。

将云南省玉溪市北山林场云南松林内受害的云南松树干锯成80cm长的小段带回实验室，室温下置于500目纱网内，网内放置健康的云南松树干，两端蜡封保湿，进行饲养，待成虫羽化后备用。试验用松针和23种叶片(23种叶片如表1所示)采自西南林业大学树木园，测试分两次进行：

测试1：将云南松针与表1中桃树、杜仲、红豆杉等23个树种叶片配成1g∶4g分别置于反应臂，另一臂为空白对照。两臂的空气流量均为500ml/min。选择羽化后强壮的云南切梢小蠹个体，从引虫孔单头引入，以10头为一组，30min待云南切梢小蠹产生选择行为后观察2min，重复10次。每测一组，调换一次“Y”型管两侧臂的方向。测完一个比例后，用乙醇清洗“Y”型管和气味源瓶，100℃烘干30min消除残留气味。试验时用黑布将“Y”型管和气味源瓶遮盖，排除光线对云南切梢小蠹的嗅觉行为的干扰。

计算趋向于反应臂的云南切梢小蠹头数的平均植和标准误，进行单因素方差分析，并用LSD多重比较分析不同混交树种之间的差异。数据采用SPSS 13.0软件进行统计分析。

结果如表1。其中，北美红杉、缅桂花、鸡爪槭、南洋杉、黄连木、藏柏、滇青冈、山茶等8个混交树种叶片与云南松针混合时，对云南切梢小蠹抗性较强，反应臂中的云南切梢小蠹较少。

表1 不同混交树种对云南切梢小蠹的嗅觉行为的影响

表中数据为平均植±标准误，同列数据后不同小写字母表示在0.05水平上差异显著.

测试2：将云南松针与北美红杉、缅桂花、鸡爪槭、南洋杉、黄连木、藏柏、滇青冈、山茶等8个树种叶片配成1g∶4g分别置于反应臂，另一臂置5g云南松针作为对照。其余步骤同测试1。结果如表2，其中缅桂花、黄连木、南洋杉、藏柏、滇青冈、北美红杉、山茶7个混交树种叶片与云南松针混合，对云南切梢小蠹抗性较强，在0.05水平上差异显著。

表2 不同混交树种对云南切梢小蠹的嗅觉行为的影响

(二)不同混交树种挥发性成分对云南切梢小蠹的嗅觉行为的影响

植物的挥发性成分采用水蒸气蒸馏萃取法提取。取新鲜健康云南松针及以上(一)两次筛选后获得的缅桂花、黄连木、南洋杉、藏柏、滇青冈、北美红杉、山茶7种非寄主叶片各100g，剪碎后放入1000ml的蒸馏瓶中，加400ml蒸馏水，水蒸气蒸馏4h，。馏分用乙醚萃取，无水硫酸钠干燥24h。

将10μL云南松挥发性成分与10μL缅桂花、黄连木、南洋杉、藏柏、滇青冈、北美红杉、山茶等7个混交树种挥发性成分滴于1cm×1cm的滤纸上，分别置于反应臂气味源瓶。将20μL云南松挥发性成分滴于同样大小的滤纸上，置于另一臂气味源瓶作为对照。

测试时，两臂的空气流量均为500ml/min。选择羽化后强壮的云南切梢小蠹个体，从引虫孔单头引入，以10头为一组，30min待云南切梢小蠹产生选择行为后观察2min，重复10次。每测一组，调换一次“Y”型管两侧臂的方向。测完一个比例后，用乙醇清洗“Y”型管和气味源瓶，100℃烘干30min消除残留气味。试验时用黑布将“Y”型管和气味源瓶遮盖，排除光线对云南切梢小蠹的嗅觉行为的干扰。

结果如表3，其中，藏柏、山茶、北美红杉、滇青冈等4个混交树种与云南松挥发性成分混合时，对云南切梢小蠹抗性较强，反应臂中的云南切梢小蠹较少，平均分别为2.7头、1.9头、1.8头和1.5头，与其它混交树种挥发性成分相比，在0.05水平上差异显著。

表3 不同混交树种挥发性成分对云南切梢小蠹的嗅觉行为的影响

表中数据为平均植±标准误，同列数据后不同小写字母表示在0.05水平上差异显著。

(三)混交树种叶片水浸液对云南松种子发芽和幼苗生长的影响

将以上(二)挥发性成分试验筛选的抗性较突出的藏柏、山茶、北美红杉、滇青冈等4个树种叶片分别洗净、风干及粉碎，各称取100g放入4个三角瓶，加1000ml蒸馏水，瓶口密封扎紧放入振荡器中浸提2d，温度25℃，速度100r/min，取浓度为0.1g/mL的水浸液过滤，上清为水浸提母液，4℃储藏备用。

发芽试验：选择均匀饱满的云南松种子，用1％甲醛溶液消毒15min后蒸馏水冲洗3次，始温45℃蒸馏水浸种48h。如表3，水浸提液设3个浓度梯度，以蒸馏水作为对照，每处理均重复3次。在洗净、烘干、消毒的直径为10cm培养皿中铺两层定性滤纸，分别将4种水浸提液10ml注入培养皿床，每皿播种50粒种子。放入25℃的光照培养箱中发芽，光照均为8h/d。逐日统计种子发芽情况，同时在培养皿中适量添加相应浓度的水浸液或蒸馏水，统计25d，且种子萌发均以出现真叶为标准。

发芽率(GR)＝(发芽终期全部正常发芽的种子数/供试种子数)×100％

结果由表4所示，对照中云南松种子发芽率为96％，其它各处理云南松种子发芽率在86％～96％之间，差异较小。说明各树种、各浓度水浸液对云南松种子发芽率的影响不大。

表4 4种叶片水浸液对云南松种子发芽率的影响

经不同水浸液的云南松发芽种子移栽后对幼苗生长的影响：将上述各处理已发芽种子分别选择30株移栽于塑料大棚，每处理均重复3次。大棚日最高温度35℃，日最低温度15℃，相对湿度65％。每2d在苗床中适量添加如表5浓度的水浸液或蒸馏水。移栽后14d、28d分别测定幼苗的高度。

结果见表5，移栽14d后对照云南松幼苗高度为5.5cm，其它各处理云南松幼苗高度在5.0cm～5.6cm之间，差异较小。移栽28d后对照云南松幼苗高度为11.2cm，其它各处理云南松幼苗高度在10.2cm～11.0cm之间，差异较小。说明各树种、各浓度水浸液对云南松幼苗生长的影响不大。

表5 4种叶片水浸液对云南松幼苗生长的影响

实施例2：

除步骤(一)测试2增加桃树、滇润楠、华山松等6个树种叶片与云南松针组成对应组，配成1g∶4g分别置于反应臂，另一臂置5g云南松针作为对照以外，其余步骤同实施例1。结果如表2，其中缅桂花、黄连木、南洋杉、藏柏、滇青冈、北美红杉、山茶等7个混交树种叶片与云南松针混合时，对云南切梢小蠹抗性较强，与其它混交树种相比，在0.05水平上差异显著。

表2 不同混交树种对云南切梢小蠹的嗅觉行为的影响

表中数据为平均植±标准误，同列数据后不同小写字母表示在0.05水平上差异显著。