一种用于米曲霉菌发酵产曲酸的培养基及其发酵方法

技术领域

本发明涉及微生物培养技术领域，更具体涉及一种用米曲霉菌发酵产生曲酸的培养基与发酵方法。

背景技术

曲酸（5-羟基-2-羟甲基-1，4-吡喃酮，英文名Kojic acid），是一种黑色素专属性抑制剂，它进入皮肤细胞后能够与细胞中的铜离子络合，改变酪氨酸酶的立体结构，阻止酪氨酸酶的活化，从而抑制黑色素的形成。曲酸类美白活性剂较其它美白活性剂具有更好的酪氨酸酶抑制效果。它不作用于细胞中的其它生物酶，对细胞没有毒害作用，同时它还能进入细胞间质中，组成胞间胶质，起到保水和增加皮肤弹性的作用。目前已被配入各种化妆品中，制成针对雀斑、老人斑、色素沉着和粉刺的美白化妆品。

曲酸是利用发酵法生产的有机酸，我国自80年代开始研究曲酸生产工艺，但在97年以前却一直以进口为主。2001年陕西省微生物研究所采用微生物复合诱变育种技术，选育出黄曲霉突变株UCN7-17，为我国曲酸生产奠定了基础。目前，我国的曲酸生产技术还较落后，生产设备多，操作复杂，能耗大，生产工艺还有待提高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种原料易得的用于米曲霉菌发酵产曲酸的培养基及其发酵方法，该方法能耗低、培养方法简单。

   本发明的技术方案如下：

本发明提供了一种用于米曲霉菌发酵产曲酸的培养基，每1.5升培养基中含有：甘露醇10～30g，酵母膏1～5g，麦芽糖10～30g，味精1～5g，葡萄糖3～15g，蛋白胨1～10g，土豆泥50～200g，其余为水。

更优选地，每1.5升培养基中含有：甘露醇15g，酵母膏2.75g，麦芽糖15g，味精3.75g，葡萄糖7.5g，蛋白胨3.75g，土豆泥150g，其余为水。  

所述水为一次蒸馏水。

本发明还提供了一种利用上述的培养基培养米曲霉菌产生曲酸的发酵方法，包括以下步骤：

（1）母种扩大培养；

（2）接种培养基静置发酵；

（3）所述静置发酵的条件为：厌氧发酵，发酵温度为26-28℃，静置发酵的时间为32-36天。

所述静置发酵的条件优选为：厌氧发酵，发酵温度为28℃，静置发酵的时间为34天。

本发明的显著优点：

本发明的培养基原料易得，用于产曲酸的生产工艺简便、能耗低、产量大。

具体实施方式

曲酸产量的测定

取50ml容量瓶１个，加入1ml显色剂（1%FeCl₃—HCL），加入发酵后的澄清发酵液9.8ml，用一次蒸馏水定容至50ml，用紫外分光光度计测定其OD₅₀₀值，与标准曲线比对，得培养基曲酸产量。

为更好的理解本发明的内容，下面结合具体实施例做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。

实施例1

1.1培养基的配置：

    试验组：称取甘露醇15g，酵母膏2.75g，麦芽糖15g，味精3.75g，葡萄糖7.5g，蛋白胨3.75g，土豆泥150g，先用适量温水将酵母膏溶解，后逐步加入其它成分，待全部溶解后用一次蒸馏水定容至1500ml。 

对照组1：称取酵母膏2.25g，甘露醇15g，味精7.5g，葡萄糖7.5g，麦芽糖15g，硫酸镁（MgSO₄·7H₂O）0.225g，磷酸氢钾0.375g，氯化钠11.25g，先用适量温水将酵母膏溶解，后逐步加入其它成分，待全部溶解后用一次蒸馏水定容至1500ml。

对照组2：称取硝酸钠4.5g，磷酸氢钾1.5g，硫酸镁（MgSO₄·7H₂O）0.75g，氯化钾0.75g，硫酸铁0.015g，蔗糖45g，用一次蒸馏水定容至1500ml。

对照组3：称取蛋白胨7.5g，酵母膏3.75g，葡萄糖15g，先用适量温水将酵母膏溶解，后逐步加入其它成分，待全部溶解后用一次蒸馏水定容至1500ml。

对照组4：称取葡萄糖30g，蛋白胨7.5g，氯化钠3.75g，加先用适量温水将酵母膏溶解，后逐步加入其它成分，待全部溶解后用一次蒸馏水定容至1500ml。

1.2发酵米曲霉菌生产曲酸

将冰冻保存的米曲霉菌（米曲霉菌为米曲霉（Aspergillus oryzae）IBPT-1，于2011年12月1日保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），地址: 武汉 武汉大学，保藏编号CCTCC NO：M2011437）斜面解冻，扩培至平板培养基3-5天，再扩培至试管，2-3天后扩培至上述培养基(具塞锥形瓶)，在28℃温度下，静置培养34天，停止培养。

1.3曲酸产量的测定

取50ml容量瓶１个，加入1ml显色剂（1%FeCl₃—HCL），加入1.2发酵后澄清发酵液9.8ml，用一次蒸馏水定容至50ml，用紫外分光光度计测定其OD₅₀₀值与标准曲线比对，得培养基曲酸产量。

试验组与对照组1-4得到的培养基曲酸产量分别为968mg/L 、173.4mg/L、55.8mg/L、167.6mg/L、133.8mg/L。

通过以上5种不同培养基的比较，发现本发明培养基的产量最大。