法律状态公告日
法律状态信息
法律状态
2015-06-10
授权
授权
2012-12-26
实质审查的生效 IPC(主分类):A61K36/282 申请日:20101125
实质审查的生效
2012-11-07
公开
公开
技术领域
本发明涉及含有作为有效成分的艾蒿（Artemisia）提取物的组合物。
背景技术
过氧化物酶体增殖物活化受体(PPARs)是配体激活转录因子，属于被脂肪酸激活的核受体超家族成员。所述PPAR家族由显示不同的配体特性及组织分布的PPAR-α、PPAR-β/δ和PPAR-γ组成。PPAR-α在肝脏中的表达最多，并且能促进过氧化物敏体和线粒体中脂肪酸的氧化。PPAR-γ在脂肪组织内进行表达，并且能调节脂肪的贮存。所述PPAR-α的配体，贝特（fibrate），用作降血脂剂，而且PPAR-γ的配体，噻唑烷二酮（thiazolidinedione），则用于2型糖尿病的治疗。
PPAR-δ在肌肉组织、棕色脂肪组织等内进行表达。由于促进被转录因子过度表达的小鼠体内的脂肪细胞中脂肪酸的氧化，使该转录因子显示抗肥胖效果(Wang YX et al., Cell, 113, pp. 159-170, 2003)。PPAR-δ激活因子将通过增加蛋白质如肉毒碱棕榈酰基转移酶-Iβ(CPT1β)和丙酮酸脱氢酶激酶同工酶-4(PDK4)的表达来促进骨骼肌细胞的代谢，提高胰岛素的敏感性，减少脂肪细胞以及抑制炎症反应(Barish GD et al., J. Clin. Invest., 116, pp. 590-597, 2006, 116:590)。当PPAR-δ的配体，GW501516，与磷酸腺苷（AMP）激活的蛋白激酶(AMPK)激活剂AICAR一同注射于小鼠体内时，即使没有运动该小鼠也展示出健壮的肌肉以及抗肥胖的效果(Vihang AN et al., Cell, 134, pp. 1-11, 2008)。
然而，至今还未发现被证明有稳定性的PPAR-δ配体。本发明的发明人已确认茵陈蒿（Artemisia iwayomogi）提取物含有能激活PPAR-δ的新型配体。
发明内容
技术问题
本发明的一个实施例在于提供含有艾蒿提取物的组合物。
本发明的另一个实施例在于提供含有艾蒿提取物的组合物的食品、保健食品添加剂和药物组合物。
技术方案
在一个总的方面，本发明提供含有作为有效成分的魁蒿（Artemisia princeps）或茵陈蒿（Artemisia iwayomogi）提取物的组合物。
有益效果
本发明的组合物具有提高PPAR-δ活性的效果，而且对促进肌肉代谢和改善记忆力有效。所述组合物可以广泛地应用于食品、保健食品添加剂或药物领域。
附图说明
图1展示了在试管内显示茵陈蒿提取物 的PPAR-δ-LBD亲和力的荧光数据；
图2展示了通过茵陈蒿提取物对PPAR-δ的激活的、所述受体基因荧光素酶的表达程度；
图3展示了用200μg/mL的茵陈蒿提取物处理过的、肌细胞中的PPAR-δ、CPT1β和PDK4的靶基因的表达程度；和
图4展示了经200μg/mL的茵陈蒿提取物处理促进过的、肌细胞中的脂肪酸氧化情况。
具体实施方式
本发明中一个实施例的组合物含有作为有效成分的艾蒿提取物。所述含有艾蒿提取物的组合物能提高过氧化物酶体增殖物活化受体δ(PPAR-δ)的活性，而且对肌肉代谢有促进效果和/或对记忆力有改善效果。
在本发明中，艾蒿（ssuk，魁蒿）通常是指属菊目菊科的双叶多年生草本植物。艾蒿生长于整个韩国地区，而且已被广泛地用作蔬菜、汤、粥、蛋糕等的食品。
在一个实施例中，所述艾蒿提取物可以为茵陈蒿提取物。茵陈蒿是属菊科蒿属的多年生草本植物。它又被叫做万年蒿（saengdang ssuk）、韩茵陈（aedang ssuk）、四季蒿（sacheol ssuk）、茵陈草（injincho）、清热草（heat reliever）、白山蒿（heuinsan ssuk）或毛山蒿（teolsan ssuk）。尤其，将其嫩叶叫做茵陈（injin）或清热草，而且由于它具有特有的香气和药用功效，在传统上被用作食品或民间药物。茵陈是属菊科多年生草本植物的四季蒿的嫩芽，至今由于利肝而闻名。特别地，茵陈因对黄疸的高效而闻名。茵陈能促进胆汁的分泌，而且通过排除胆汁中的肿块、胆酸和胆红素来进行清肝。同时，它能降低血压，缓解发烧，并且能消灭包括结核杆菌的各种病菌。另外，它对降解血脂，扩展冠状动脉以及促进排尿有效。
在一个实施例中，所述组合物对能促进肌细胞中脂肪和糖代谢的酶的表达具有调节效果。具体地，所述含有作为有效成分的魁蒿或茵陈蒿提取物的组合物作为活化PPAR-δ的配体对促进肌细胞中脂肪和糖代谢的蛋白质的表达具有促进效果。在一个实施例中，所述组合物可以为用于强化肌肉和/或提高耐力的组合物。在另一个实施例中，所述组合物可以为用于防止和/或缓解老年痴呆症或帕金森氏症的症状的组合物。这些效果可以通过提高PPAR-δ活性来实现。
在一个实施例中，所述组合物可以含有占所述组合物总重量的1-100wt%的魁蒿或茵陈蒿提取物，优选为1-80wt%。更为具体地，所述魁蒿或茵陈蒿提取物可以含有占所述组合物总重量的10-60wt%。上述魁蒿或茵陈蒿提取物的含量为能够激活PPAR-δ的有效含量。
对根据本发明所制备的魁蒿或茵陈蒿提取物的过程没有特别限制。所述魁蒿或茵陈蒿提取物可以通过使用水或有机溶剂提取。所述有机溶剂可以为选自如乙醇、甲醇、丁醇、乙醚、乙酸乙酯、氯仿以及该有机溶剂与水的混合物。例如，所述魁蒿或茵陈蒿提取物可以通过将70%的乙醇（3L）加入于魁蒿或茵陈蒿（300g）中并在70-80℃下搅拌三次的操作并反复进行上述操作2次而获得。将所获的提取物通过Whatman1号滤纸进行过滤并在-70℃下进行冷冻干燥，从而获得固体的魁蒿或茵陈蒿提取物。
本发明一个实施例的组合物不仅适用于动物，而且也适用于人体。本发明还提供含有上述组合物的食品或保健食品添加剂组合物。所述食品或保健食品添加剂组合物可以被制备成如片剂、颗粒剂、饮剂、焦糖、减肥棒、茶粉、常用的茶包等，但不限于这些剂型。根据具体的制备类型或使用目的，所属领域的技术人员通过使用所述有效成分和常用的其他成分可以容易地制备所述组合物。将所述有效成分与其他成分混合使用时可以产生协同效果。
本发明还提供含有上述组合物的医药组合物。所述医药组合物可以进一步包含如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、用于控制渗透的盐和/或缓冲剂或者其他有用于治疗的物质的医药辅料，而且根据本领域所熟知的方法可以将其制备成各种口服或肠胃外给药的剂型。
用于口服给药的剂型包括，如片剂、丸剂、硬和软胶囊剂、液体、悬浮液、乳化剂、糖浆、粉末剂、粉剂、细颗粒剂、颗粒剂、微丸等。除了所述有效成分之外，所述剂型还包括表面活性剂、稀释剂（如乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨糖醇、纤维素或甘氨酸）和润滑剂（如硅、滑石粉、硬脂酸以及其镁或钙盐，或聚乙二醇）。进一步，所述片剂可以包含粘结剂（镁铝合金硅酸盐、淀粉糊、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠或聚乙烯吡咯烷酮），并且根据需要还可以包含如崩解剂、吸收剂、着色剂、香料、甜味剂等，如淀粉、琼脂、藻酸或其钠盐的药物添加剂。所述片剂是通过通用的混合、制粒或涂层的方法被制成。此外，用于肠胃外给药的剂型包括，如注射剂、滴液、软膏、洗剂、凝胶、乳霜、喷雾、悬浮液、乳液、栓剂或贴剂，但是不限于这些剂型。
本发明公开的药物组合物可以通过口服或肠胃外如直肠、局部、经皮注射、静脉注射、肌肉注射、腹腔注射或皮下注射等途径进行给药。
药学上可接受的剂量，即给药剂量，将根据受试者的年龄、性别和体重、具体疾病或治疗的病理状态、疾病的严重程度或病理状态、给药途径和处方者的评判而不同。根据上述要素，本领域的技术人员可以确定所述给药剂量。一般的给药剂量可以为0.01-2000mg/kg/天，优选为1-100mg/kg/天。然而，所述给药剂量不会以任何方式限制本发明的范围。
本发明公开的组合物可以被制备成用于外部皮肤的各种类型的组合物，更具体为化妆品组合物。例如，它可以被制成柔肤乳液，收敛乳液、保湿乳液、眼霜、保湿霜、按摩霜、洁肤霜、洁肤泡沫、洁肤水、粉、精华液、面膜等，但不限于这些化妆品。
本发明公开的含有作为有效成分的魁蒿或茵陈蒿提取物的组合物具有提高PPAR-δ活性的效果。所属领域的技术人员已知道所述提高PPAR-δ活性的物质具有强化肌肉，增强耐力和记忆力以及防止或缓解老年痴呆症或帕金森症的症状的效果。实验的具体内容请参见韩国专利申请公布号10-2008-0050348和2008-0065234。
实施例
现在将描述实施例和实验。下列实施例和实验仅用作说明用途，并非为了限制本发明的范围。
[实施例1] 茵陈蒿提取物的制备
购买栽培于韩国忠淸北道堤川市清川洞的茵陈蒿。向茵陈蒿（300g）中加入70%的乙醇(3L)后，在70-80℃下将混合物搅拌3小时。该过程将反复地进行2次，并且通过滤纸过滤所获的提取物。通过使用旋转真空蒸发器减压浓缩所述滤液，然后经冷冻干燥获得干粉（29g）。
[测试实施例1] 茵陈蒿提取物的PPAR-δ-LBD亲和力
将配体链接于所述蛋白质的配体结合区(ligand binding domain，LBD)时，PPAR-δ会被激活并能调节其他基因的表达。因此，能够激活这种转录因子的物质需能与所述LBD相连。为了研究茵陈蒿提取物是否能够激活PPAR-δ，将通过使用实施例1中制备的茵陈蒿提取物进行下列实验。
将所述茵陈蒿提取物溶解于二甲基亚砜(DMSO)中，然后通过使用检测试剂盒测量荧光值来量化PPAR-δ-LBD亲和力 (LanthaScreen TR-FRET peroxisome proliferator receptor delta coactivator assay kit; Invitrogen, 加拿大)。
所述结果在图1中展示。如图1所示，荧光强度随着所述茵陈蒿提取物的浓度而增加。所述茵陈蒿提取物的PPAR-δ-LBD配体的EC50值为7μg/mL。
[测试实施例2] 茵陈蒿提取物对PPAR-δ受体的激活效果
为了研究茵陈蒿提取物是否能激活PPAR-δ，使用人的PPAR-δ受体实验设备(NR1C2, PPAR-δ/β) Reporter Assay Kit (Indigo Biosciences, Inc.)进行以下实验。
在CRM-1培养基(Indigo Biosciences, Inc.)内加入PPAR-δ受体细胞，并接种于96孔板中培养4小时，然后分别使用浓度为50、100和200μg/mL的茵陈蒿提取物对其进行处理。用1μM已知的PPAR-δ配体GW501516(Alexis Biochemicals,美国)作阳性对照组，并用相当于培养基体积的1/1000的DMSO作为阴性对照组。在37℃的5%CO2的培养器内培养20小时后，清除所述培养基，然后在其中加入Luc检测试剂并在室温下进行10分钟的反应。而后，使用光度计测量经由PPAR-δ表达的荧光素酶的活性。
所述结果在图2中展示。如图2所示，可以确定所述茵陈蒿提取物将通过激活PPAR-δ比阴性对照组表达更多的受体基因。
[测试实施例3] 茵陈蒿提取物对参与肌细胞中脂肪酸和糖代谢的基因的表达的调节
为了分析茵陈蒿提取物对参与肌细胞中脂肪酸和糖代谢的基因的表达的调节效果，将实施例1中制备的茵陈蒿提取物溶解于DMSO中并进行以下实验。
从美国标准菌种收藏中心(ATCC;美国)取得未成熟的C2C12肌细胞，并且在5% CO2的培养器内，每隔一天更换含有10%胎牛血清(FBS)的达尔伯克氏改良伊格尔培养基(DMEM; Gibco 1210-0038)的方式对其进行培养，直到融合至70%。在含有2％马血清（HS）的培养基内，将所述细胞诱导分化成肌细胞。在含有2％马血清（HS）的培养基内培养4天后，使用200μg/mL的茵陈蒿提取物处理所述肌细胞。使用DMSO(1/1000 体积相当的培养基)处理对照组。在37oC下，将所述经处理的细胞培养24小时，然后待使用冷盐水清洗2次后，使用TRIzol试剂（Invitrogen）提取RNA。而后，通过使用反转录PCR系统(Promega)将被提取的1μg/μL的RNA合成为cDNA。
通过使用合成cDNA以及专为基因而设计的引物和探针对CPT1β、PDK4和GAPDH基因的表达程度进行测量 (Applied Biosystems; CPT1β, Mm00487200_m1, PDK4, Mm00447181_m1, GAPDH, Mm99999915_q1)。通过使用Rotor-Gene3000系统(Corbett Research,澳大利亚悉尼)进行PCR反应和分析。
结果在图3中展示。如图3所示，可以确定所述茵陈蒿提取物相比对照组能增加肌细胞中CPT1β和PDK4的表达。
[测试实施例4] 茵陈蒿提取物对肌细胞中脂肪酸的氧化的促进程度
用所述茵陈蒿提取物将像测试实施例3中那样分化4天的C2C12肌细胞处理24小时。次日，待清除培养基后，使用盐水将所述细胞清洗2次。使用1mM的L-肉碱（L-carnitine）和 3μCi的[9,10]-3H棕榈酸（palmitic acid）将其处理3天后，从培养基中清除过量的[9,10]-3H棕榈酸，并且使用液态闪烁计数仪(Beta-counter)测量已生成的3H2O的量。最终，与仅使用DMSO（对照组）处理过的细胞相比，经所述茵陈蒿提取物处理过的细胞显示出脂肪酸的氧化会减少。
机译： 化合物，药物组合物，调节过氧化物酶体增殖物激活的受体（ppar）功能的方法，化合物，药学上可接受的前药，药学上有活性的代谢产物或药学上可接受的盐，提高个体hdl的方法，化合物的用途，降低ldlc的方法在一个人中，将一个人中的ldl粒径从小致密ldl改变为正常的方法，在一个人中治疗包括血管疾病，冠心病，脑血管病和外周血管疾病的动脉粥样硬化疾病的方法，用于治疗炎性疾病的方法包括个体中的哮喘，牛皮癣，溃疡性结肠炎，皮炎，类风湿性关节炎，骨关节炎和自身免疫性疾病，治疗经ppar-δ测定的状况或疾病的方法，调节增殖物激活的受体功能过氧化物酶体（ppar）的方法和治疗方法疾病
机译： 化合物，药物组合物，化合物用途，提高个体hdl的方法，治疗2型糖尿病的方法，降低个体胰岛素抵抗或降低血压的方法，降低个体ldlc的方法，置换小的致密ldl粒径的方法对于个体的正常ldl而言，用于治疗个体的动脉粥样硬化性疾病，包括血管疾病，冠心病，脑血管疾病和外周血管疾病的方法，用于治疗个体的炎性疾病，包括类风湿性关节炎，哮喘，骨关节炎和自身免疫性疾病的方法，通过hppar-delta测量的疾病或病症的治疗方法，调节过氧化物酶体增殖物激活的受体功能（ppar）的方法以及疾病或病症的治疗方法
机译： 用于促进过氧化物酶体增殖物激活的受体-δ活性的组合物
