用于治疗压疮的龙血竭喷雾剂及其检验和制备方法

技术领域

本发明属于中药制剂技术领域，具体涉及一种用于治疗压疮的龙血竭喷雾剂及其检验和制备方法。

背景技术

龙血竭为剑叶龙血树在某些因素影响下产生的树脂类成分，收敛生肌效果确切。在《刘涓子鬼遗方》、《医宗金鉴》等古籍中所收载治疗溃创伤口的生肌类方药中，龙血竭的使用频率最高。在现代的临床实践中，龙血竭也常常用于多种疾病引起的溃疡，龙血竭与其他抗菌药物或者理疗手段合用可以大大提高压疮的治愈率。但是龙血竭在临床治疗和护理中的应用方式却较为原始，一般使用生理盐水、醋、蜂蜜或者酒精调制成糊状或者直接以散剂的形式覆于创面上。这种使用方式在治疗过程中容易沾染衣物、床单等，导致药物的流失；使用医用敷料在包扎引起患者的行动不便，更换药物的时候对创面造成二次伤害。除了上述缺点，龙血竭不溶于水，生物利用度低也是影响其使用的重要限制。

因此，为了解决上述问题，需要研究开发一种剂型简单、使用便利，且生物利用度高的用于治疗压疮的龙血竭药物制剂。

发明内容

本发明的目的之一是针对现有技术存在的问题提供一种用于治疗压疮的龙血竭喷雾剂。本制剂剂型简单、使用便利，且生物利用度高。

本发明的目的之二是提供一种用于治疗压疮的龙血竭喷雾剂的检验方法，利用该方法可以较好的控制治疗压疮的龙血竭喷雾剂的质量。

本发明的目的之三是提供一种用于治疗压疮的龙血竭喷雾剂的制备方法。

为此，本发明提供了第一方面提供了一种用于治疗压疮的龙血竭喷雾剂，其包含龙血竭提取物、成膜剂、乙醇和水。

本发明中，优选所述成膜剂为聚乙烯吡咯烷酮K30。

在本发明的一些实施例中，在所述喷雾剂中，按喷雾剂的总重量计，龙血竭提取物的含量为0.6wt％-3wt％。

在本发明的另一些实施例中，在所述喷雾剂中，按喷雾剂的总重量计，所述 成膜剂的含量为2wt％-8wt％；优选所述成膜剂的含量为4wt％-8wt％。

在本发明的又一些实施例中，在所述喷雾剂中，按喷雾剂的总体积计，所述乙醇的含量为60v％-80v％。

根据本发明，所述喷雾剂中还含有抑菌剂。

在本发明的一些实施例中，在所述喷雾剂中，按喷雾剂的总重量计，抑菌剂的含量为0.5wt％-4.5wt％。

本发明中，所述抑菌剂包括葡萄糖酸氯已定、苯扎溴铵和戊二醛中的一种或几种。

根据本发明，所述喷雾剂中还包括止疼成分。

在本发明的一些实施例中，在所述喷雾剂中，按喷雾剂的总重量计，所述止疼成分的含量为0.1wt％-1.0wt％。

本发明中，所述止疼成分包括冰片、薄荷脑和桉叶油中的一种或几种。

本发明第二方面提供了本发明第一方面所述喷雾剂的检验方法，其采用高效液相色谱法对待测样品进行鉴定，包括采用光电二极管阵列检测器和WatersC18色谱柱，以乙腈：三乙胺-磷酸缓冲液为流动相，在波长为259nm和/或275nm下对待测样品进行梯度洗脱，并以龙血竭喷雾剂的指纹图谱作为对照对待测样品的高效液相色谱图进行检视。

根据本发明方法，当待测样品的高效液相色谱中在与龙血竭喷雾剂的指纹图谱相应的位置上显示相同的特征吸收峰，则说明待测样品为龙血竭喷雾剂。

在本发明的一些实施例中，所述特征吸收峰出现在4.220、5.665、10.500、14.311以及16.033分钟处。

在本发明的另一些实施例中，所述梯度洗脱的条件为：流速为0.6-1.0mL/min，进样量为5-10μL。

本发明中，优选流动相的pH值为3.2-5.0。

本发明第三方面提供了一种本发明第一方面所述的喷雾剂的制备方法，其包括：

步骤C，将龙血竭溶液与成膜剂溶液混合，制成龙血竭喷雾剂前体混合物；

步骤D，向龙血竭喷雾剂前体混合物中加入蒸馏水，混合后制成龙血竭喷雾剂；

其中，所述龙血竭溶液为龙血竭的乙醇溶液；所述成膜剂溶液为成膜剂的乙醇溶液。

根据本发明，在所述龙血竭喷雾剂前体混合物中，所述龙血竭溶液与成膜剂溶液的体积比为(1-3):1。

在本发明的一些实施例中，所述龙血竭溶液中龙血竭提取物的浓度为120-150mg/mL。

在本发明的另一些实施例中，成膜剂溶液中成膜剂的浓度为5％-10％(w/v)。

在本发明的一些实施例中，在所述龙血竭喷雾剂中，按喷雾剂的总重量计，龙血竭提取物的含量为0.6wt％-3wt％。

在本发明的一些实施例中，在所述龙血竭喷雾剂中，按喷雾剂的总重量计，所述成膜剂的含量为2wt％-8wt％；优选所述成膜剂的含量为4wt％-8wt％。

在本发明的一些实施例中，在所述龙血竭喷雾剂中，按喷雾剂的总体积计，所述乙醇的含量为60v％-80v％。

附图说明

下面将结合附图来说明本发明。

图1示出本发明中龙血竭膜喷雾剂的指纹图谱图。

图2示出葡萄糖酸氯已定标准品超高效液相色谱图。

图3示出龙血竭标准品超高效液液相色谱图。

图4示出龙血竭膜喷雾剂治疗压疮模型大鼠实验后各组大鼠压疮创面愈合情况。

具体实施方式

为使本发明容易理解，下面将详细说明本发明。

如前所述，目前龙血竭在临床治疗和护理中的较为原始，使得其在治疗过程中容易沾染衣物、床单等，导致药物的流失；同时，使用医用敷料包扎时引起患者的行动不便，更换药物时则对创面造成二次伤害；尤其是龙血竭的水不溶于性，导致其生物利用度低，成为影响其使用的重要限制。

针对上述问题，本发明人进行了大量的实验研究，发现将龙血竭提取物与聚乙烯吡咯烷酮K30复配与醇类溶剂混合可以制成一种生物利用度高，成膜性、透气性好，且疗效显著的用于治疗外伤创面的龙血竭喷雾剂。本发明正是基于上述发现作出的。

因此，本发明提供了所提供的用于治疗压疮的龙血竭喷雾剂，亦称为龙血竭膜喷雾剂，其包含龙血竭提取物、成膜剂、乙醇和水，其中，所述成膜剂为聚乙烯吡咯烷酮K30，而乙醇和水用作载剂。

本制剂属于溶液型非定量喷雾剂，同时兼具涂膜剂的性质，喷于患处后，随着溶剂蒸发，可以形成薄膜保护患处，并缓慢释放药物起治疗作用。本发明的益 处还在于在成膜的同时，龙血竭和聚乙烯吡咯烷酮K30可以形成固体分散体，增加了龙血竭的溶出速率。

本发明所述用语“聚乙烯吡咯烷酮K30”(PVP-K30)是指K值为30的聚乙烯吡咯烷酮。PVP按其平均分子量大小分为四级，习惯上常以K值表示，不同的K值分别代表相应的PVP平均分子量范围。K值实际上是与PVP水溶液的相对粘度有关的特征值，而粘度又是与高聚物分子量有关的物理量，因此可以用K值来表征PVP的平均分子量。通常K值越大，其粘度越大，粘接性越强。

在本发明的一些实施例中，在所述喷雾剂中，按喷雾剂的总重量计，龙血竭提取物的含量为0.6wt％-3wt％，优选龙血竭提取物的含量为0.6wt％；成膜剂的含量为2wt％-8wt％，优选成膜剂的含量为4wt％-8wt％，进一步优选成膜剂的含量为4wt％；乙醇的含量为60v％-80v％，优选乙醇的含量为80v％。

根据本发明的一些优选实施方式，所述喷雾剂中还含有抑菌剂。在本发明的一些实施例中，在所述喷雾剂中，例如，按喷雾剂的总重量计，抑菌剂的含量为0.5wt％-4.5wt％，优选抑菌剂的含量为2wt％-4.5wt％，进一步优选抑菌剂的含量为2wt％。

本发明中，所述抑菌剂包括葡萄糖酸氯已定、苯扎溴铵和戊二醛中的一种或几种；优选所述抑菌剂为葡萄糖酸氯已定。

根据本发明的一些实施方式，所述喷雾剂中还包括止疼成分，该成分也可以理解为减少乙醇刺激性组分。该成为主要为可以产生清凉感具有止疼作用的一些天然药物成分，其包括冰片、薄荷脑和桉叶油中的一种或几种。

在本发明的一些实施例中，在所述喷雾剂中，按喷雾剂的总重量计，所述止疼成分的含量为0.1wt％-1.0wt％，优选所述止疼成分的含量为0.1wt％。

本发明中，优选所述乙醇为无水乙醇。

本发明中所述“水”一词在没有特别说明和指定的情况下是指蒸馏水和超纯水。

为了控制龙血竭喷雾剂的质量，发明人通过对10个批次龙血竭喷雾剂在波长分别为259nm或275nm下的图谱相似性共有峰进行比对，制作了两幅龙血竭喷雾剂的指纹图谱，两幅图谱中龙血竭喷雾剂的特征吸收峰出现位置相同，只是吸收峰强度有差异，例如，在波长为259nm下的获得的指纹图谱中抑菌剂(葡萄糖酸氯已定)的吸收峰较强，而龙血竭提取物的吸收峰相对较弱；而在波长为275nm下的获得的指纹图谱中龙血竭提取物的吸收峰较强，抑菌剂(葡萄糖酸氯已定)的吸收峰相对较弱。在这两幅指纹图谱都可以用于表征龙血竭喷雾剂中全部具有紫外吸收的成分及其相对含量，尤其是重要目标成分，基于此，可以对龙 血竭喷雾剂样品进行检测鉴定，并对龙血竭喷雾剂的质量进行监控。

特别优选的是，在波长为275nm下的获得的指纹图谱能够更好的用于表征龙血竭喷雾剂中全部具有紫外吸收的成分及其相对含量，尤其是重要目标成分。基于此，可以更好地对龙血竭喷雾剂样品进行检测鉴定，并对龙血竭喷雾剂的质量进行监控，该指纹图谱如图1所示。

因此，本发明第二方面所涉及的龙血竭喷雾剂的检验方法，其采用高效液相色谱法对待测样品进行鉴定，包括采用光电二极管阵列检测器和WatersC18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，以pH值为3.2-5.0，优选pH值为3.2的乙腈：三乙胺-磷酸缓冲液为流动相，在波长为259nm和/或275nm下，优选在波长为275nm下对待测样品进行梯度洗脱，并以龙血竭喷雾剂的指纹图谱作为对照对待测样品的高效液相色谱图进行检视。

在本发明的一些实施例中，例如，所述梯度洗脱的条件为：流速为0.6-1.0mL/min，优选流速为0.6mL/min；进样量为5-10μL，优选进样量为10μL。

根据本发明方法，当待测样品的高效液相色谱中在与龙血竭喷雾剂的指纹图谱相应的位置上显示相同的特征吸收峰，则说明待测样品为龙血竭喷雾剂。本发明中，优选所述龙血竭喷雾剂的指纹图谱如图1所示，从图1可以看出，在本发明所述龙血竭喷雾剂的特征吸收峰出现在4.220、5.665、10.500、14.311以及16.033分钟处，并且在16.033分钟处的特征吸收峰显示出极强的吸收强度。

本发明第三方面所涉及的龙血竭喷雾剂的制备方法包括：

步骤B，以乙醇为溶剂分别配制龙血竭溶液和成膜剂溶液；

步骤C，按照一定的体积比将龙血竭溶液缓慢加入到与成膜剂溶液中，振荡，混合均匀后制成龙血竭喷雾剂前体混合物；

步骤D，边搅拌边向龙血竭喷雾剂前体混合物中滴入蒸馏水，混合后制成龙血竭喷雾剂。

根据本发明，在所述龙血竭喷雾剂前体混合物中，所述龙血竭溶液与成膜剂溶液的体积比为(1-3):1，优选所述龙血竭溶液与成膜剂溶液的体积比为1:1。

在本发明的一些实施例中，所述龙血竭溶液中龙血竭提取物的浓度为120-150mg/mL，优选所述龙血竭溶液中龙血竭提取物的浓度为150mg/mL。

在本发明的另一些实施例中，成膜剂溶液中成膜剂的浓度为5％-10％(w/v)，优选成膜剂溶液中成膜剂的浓度为10％(w/v)。

本发明所述用语“龙血竭溶液”是指龙血竭的乙醇溶液，其由龙血竭提取物溶于乙醇中获得。

本发明所述用语“成膜剂溶液”是指成膜剂的乙醇溶液，其由成膜剂溶于乙醇 中获得。

在本发明的一些实施例中，在所述喷雾剂中，按喷雾剂的总重量计，龙血竭提取物的含量为0.6wt％-3wt％，龙血竭提取物的含量为0.6wt％；按喷雾剂的总重量计，所述成膜剂的含量为2wt％-8wt％，优选所述成膜剂的含量为4wt％-8wt％，进一步优选所述成膜剂的含量为4wt％；按喷雾剂的总体积计，所述乙醇的含量为60v％-80v％，优选所述乙醇的含量为80v％。

本发明所提供的用于治疗压疮的龙血竭喷雾剂包含龙血竭提取物、作为成膜剂的聚乙烯吡咯烷酮K30、乙醇和水等。该制剂剂型简单、使用便利，且生物利用度高，对于压疮具有显著的治疗效果。本发明所提供的用于治疗压疮的龙血竭喷雾剂的检验方法，简单，方便，具有较好的可操作性，可以较好的检测并控制治疗压疮的龙血竭喷雾剂的质量。

实施例

为使本发明更加容易理解，下面将结合附图和实施例来来进一步详细说明本发明，这些实施例仅起说明性作用，并不局限于本发明的应用范围，下列实施例中未提及的具体实验方法，通常按照常规实验方法进行。

实施例1：龙血竭喷雾剂制备工艺优化。

为了确认龙血竭喷雾剂的最优配比，发明人设计了正交实验优化龙血竭喷雾剂的制备工艺，正交试验的因素水平表见表1，正交试验结果见表2，方差分析结果见表3。

表1因素水平表

表2膜喷雾剂制备工艺正交表

由表2可知，影响龙血竭膜喷雾剂成膜时间以及粘度的因素作用顺序依次为：C>A>B，D项为空白项。

表3制备工艺的方差分析表

注：F_0.05(2，2)＝19.00；F_0.01(2，2)＝99.00

由表3方差分析可知，A项与C项对龙血竭膜喷雾剂的影响具有显著性差异，同时根据GB27951—2011《皮肤消毒剂卫生要求》并结合杀菌的药效需求将葡萄糖酸氯已定用量定为2wt％，最终确定龙血竭膜喷雾剂的制备最优组成为：A₃B₃C₁，PVPk30(成膜剂)浓度为4wt％，乙醇浓度为80v％，葡萄糖酸氯已定浓度为2wt％。

由以上实验结果确定龙血竭膜喷雾剂的最终制备方法为：

(1)以乙醇为溶剂配制10％(w/v)PVPk30溶液和150mg·mL^-1龙血竭溶液。

(2)将40mL龙血竭溶液缓慢加入到同体积PVPk30溶液中，振荡、使之混合均匀，龙血竭喷雾剂前体混合物。

(3)一边搅拌一边向龙血竭喷雾剂前体混合物中滴入20mL蒸馏水，混合后制成龙血竭喷雾剂。

所制得的龙血竭喷雾剂中龙血竭的浓度为60mg·mL^-1(即0.6wt％)，乙醇的体积浓度为80v％，PVPk30的浓度为4w％。

实施例2：

为了控制龙血竭膜喷雾剂的质量，发明人通过对10个批次龙血竭膜喷雾剂图谱相似性共有峰的比对，绘制了龙血竭膜喷雾剂指纹图谱，见图1。实验条件如下：

仪器及试剂

高效液相色谱仪型号为：UPLC(Waters Aquity H-Class，PDA检测器)；电子天平(METTLER TOLEDO，型号：AB265-S)；Chlorhexidine digfluconate(sigma公司，批号：LRAA1627，规格：1g/mL)；龙血素B(中国食品药品检定研究院，批号：111558-201407)；乙醇(北京化工厂，批号：20150504)；乙腈(Fisher Scientific，批号：134145)；三乙胺(国药集团化学试剂有限公司，批号：20131104)；磷酸(天津市光复科技发展有限公司，批号：20120403)。

色谱条件：UPLC(Waters Aquity H-Class，PDA检测器)，色谱柱：WatersC18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相：乙腈：三乙胺-磷酸缓冲液(pH3.2)梯度洗脱(洗脱条件见表4)，检测波长：259nm，275nm双波长，流速：0.6mL/min，进样量：10uL。

表4梯度洗脱条件

葡萄糖酸氯已定标准品超高效液相色谱图如图2所示。

龙血素B标准品超高效液液相色谱图如图3所示。

实施例3：考察成膜剂(聚乙烯吡咯烷酮K30)对龙血竭药物的增溶作用。

取1mL含有成膜剂(聚乙烯吡咯烷酮K30)的龙血竭喷雾剂(其中，龙血竭 溶液与成膜剂溶液的体积比为1:1)于2.0mL离心管中，50℃真空干燥；同时配制不含成膜剂(聚乙烯吡咯烷酮K30)的龙血竭喷雾剂样品做相同处理。在离心管中加入1mL生理盐水，超声15min后，用TU1900紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)，在510nm处，以芦丁作为对照品制作标准曲线，测定了龙血竭膜喷雾剂中黄酮类成分溶出释放效果，每个样品重复3次。

结果表明，1mL龙血竭膜喷雾剂其中总黄酮溶出量为7.516mg，而同体积不含有聚乙烯吡咯烷酮K30的样品总黄酮溶出量为3.914mg，证明龙血竭膜喷雾剂中，龙血竭黄酮类活性成分更易溶出，生物利用度提高。

实施例4：龙血竭膜喷雾剂治疗压疮模型大鼠实验。

使用缺血再灌注的方法复制大鼠II期压疮模型，分为赋形剂组、阳对药组、龙血竭膜喷雾剂组和模型组，分别使用成膜剂(聚乙烯吡咯烷酮K30)乙醇溶液、百多邦、龙血竭膜喷雾剂和生理盐水进行给药干预。每天给药两次，连续给药10天。给药结束后，使用称量纸覆盖在压疮创面上，描绘出创面面积，称定称量纸重量，与原模型创面面积称量纸重量相比较，计算愈合率。

龙血竭膜喷雾剂治疗压疮模型大鼠实验后各组大鼠压疮创面愈合情况如图4所示。

龙血竭膜喷雾剂组的平均康复率为84.02％大于阳对药组(百多邦)57.99％，模型组和成膜剂组的康复率均在20％左右，表明龙血竭膜喷雾剂对于大鼠II期压疮具有较好的治疗效果。

应当注意的是，以上所述的实施例仅用于解释本发明，并不构成对本发明的任何限制。通过参照典型实施例对本发明进行了描述，但应当理解为其中所用的词语为描述性和解释性词汇，而不是限定性词汇。可以按规定在本发明权利要求的范围内对本发明作出修改，以及在不背离本发明的范围和精神内对本发明进行修订。尽管其中描述的本发明涉及特定的方法、材料和实施例，但是并不意味着本发明限于其中公开的特定例，相反，本发明可扩展至其他所有具有相同功能的方法和应用。