用于提升免疫力、抑制过敏反应、及／或抑制自身免疫反应的化合物的用途

技术领域

本发明关于式(I)化合物的应用，

尤其是关于使用式(I)化合物以提升免疫力、抑制过敏反应、及/或抑制自身免疫反应的应用。

背景技术

生物体的免疫系统对于生物体健康的维持具有极高的重要性。免疫系统中含有大量的免疫细胞，在正常情况下，免疫细胞可产生适当的免疫反应，对外，其可在外来致病原(例如：细菌、霉菌、病毒、微生物、及各种抗原)入侵时，帮助身体抵抗致病原；对内，则可分解体内老化无法正常运作的细胞、或是基因突变所产生的不正常癌细胞，因此，免疫力的提升有助于生物体维持在健康状态。其中，免疫细胞的功能会随着细胞老化而逐渐降低，此乃造成免疫力下降的主要原因之一。因此，若能推迟免疫细胞的老化，则可有效地提升免疫力。

免疫细胞的功能异常，又称为免疫功能紊乱，包括免疫功能低下、过敏反应、及自身免疫反应等状况，这些状况会对生物体的健康产生危害。其中，免疫功能低下的个体较易受到外来致病原的感染，且可能因为体内的癌细胞无法及时清除而导致癌症发生。过敏反应是指免疫细胞对外来抗原产生过度的免疫反应。至于自身免疫反应，则是指免疫细胞对于生物体自身的细胞或器官产生不当的免疫反应。因此，若能有效提升免疫力、抑制过敏反应及/或抑制自身免疫反应，则可达到改善免疫系统功能以维持个体健康的目的。

在现今的医学研究领域中，虽然已知适当的运动与饮食以及充足的睡眠可以提升个体的免疫力，但在现代人普遍缺乏运动与睡眠，且经常摄取营养失衡的饮食的情况下，欲通过运动、睡眠及饮食以达到改善免疫系统功能的目的已变得不切实际。已知可使用肾上腺素、抗组织胺剂、类固醇等药物来实现抑制过敏反应及抑制自身免疫反应的效果，然而这些药物的使用经常伴随着心悸、震颤、焦虑等副作用。现阶段虽有其他较新的疗法(例如：脱敏疗法、及生物制剂疗法)可供选择，但价格昂贵且效果有限。

有鉴于上述问题，业界仍亟需可有效提升免疫力、抑制过敏反应、及/或抑制自身免疫反应的方法。经发明人研究发现，对免疫细胞添加式(I)化合物，可有效促进免疫细胞活化、推迟免疫细胞老化、以及抑制免疫细胞表现诱发过敏反应及自身免疫反应的基因。因此，通过式(I)化合物的使用，可实现提升免疫力、抑制过敏反应、及/或抑制自身免疫反应的效果，且可避免肾上腺素、抗组织胺剂、类固醇等药物所造成的副作用。

发明内容

本发明的一个目的，在于提供一种使用上述式(I)化合物于制造一种药剂的用途，其中该药剂用于提升免疫力、抑制过敏反应、及/或抑制自身免疫反应。

本发明的另一个目的，在于提供一种使用上述式(I)化合物于制造一种食品的用途，其中该食品用于提升免疫力、抑制过敏反应、及/或抑制自身免疫反应。其中，该食品是保健食品或营养补充食品。较佳地，该食品是保健食品。

本发明的又一个目的，在于提供一种提升免疫力、抑制过敏反应、及/或抑制自身免疫反应的方法，其包含对一个有需要的个体施用一有效量的上述式(I)化合物。

本发明的详细技术内容及部分具体实施例，将描述于以下内容中，以供本领域技术人员了解本发明的特征。

本发明的有益效果是：

本发明的式(I)化合物具有提升免疫力、抑制过敏反应、及/或抑制自身免疫反应的能力。

附图说明

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。

图1：以RNA微数组(microarray)分析周边血单核球细胞(Peripheral bloodmononuclear cell，PBMC)的IL-1B(interleukin 1beta)及TNF-α(tumor necrosis factoralpha)的表达量的结果，其中显示控制组(即，培养于不含式(I)化合物的培养液中的组别)，以及实验组(即，培养于含有式(I)化合物的培养液中的组别)的结果；

图2：以RNA微数组分析周边血单核球细胞的CTSL(Cathepsin L)、HSPA1B(heatshock protein family A member 1B)及HSPA2(Heat Shock Protein Family A Member2)的表达量的结果，其中显示控制组及实验组的结果；

图3：以RNA微数组分析周边血单核球细胞的FOXO3(forkhead box O3)、SOD2(Superoxide dismutase 2)及TNFRSF14(TNF superfamily,member 14)的表达量的结果，其中显示控制组及实验组的结果；

图4：以RNA微数组分析周边血单核球细胞的CD244(Cluster of Differentiation244)、ITGA4(integrin subunit alpha 4)、及KLRG1(killer cell lectin-like receptorsubfamily G,member 1)的表达量的结果，其中显示控制组及实验组的结果；

图5：以RNA微数组分析周边血单核球细胞的CD4(Cluster of Differentiation4)、CD74(Cluster of Differentiation 74)、CIITA(Class II MajorHistocompatibility Complex Transactivator)、HLA-DMB(human leukocyte antigen-DMB)、HLA-DPA1、HLA-DPB1、HLA-DQB1、HLA-DRA、及LGMN(legumain)的表达量的结果，其中显示控制组及实验组的结果。

具体实施方式

以下将描述本发明的部分具体实施例；但是，在不背离本发明精神下，本发明还可以多种不同形式的实施例来实践，不应将本发明保护范围解释为限于说明书所陈述的。此外，除非文中有另外说明，于本说明书中(尤其是在权利要求书中)所使用的“一”、“该”及类似用语应理解为包含单数及复数形式。

如前述，免疫功能对于生物体健康的维持具有极高的重要性，然而目前业界还缺乏有效的手段，可同时提升免疫力且抑制过敏反应及/或自身免疫反应的发生。本申请发明人研究发现，以如下式(I)化合物处理免疫细胞，可有效促进免疫细胞活化、推迟免疫细胞老化、以及抑制免疫细胞表现会诱发过敏反应及/或自身免疫反应的基因，故可用于提升免疫力、抑制过敏反应、及/或抑制自身免疫反应。

因此，本发明是关于一种使用式(I)化合物制造一种药剂的用途，其中该药剂用于提升免疫力、抑制过敏反应、及/或抑制自身免疫反应。

本发明的药剂可呈任何适宜的形式，并没有特殊限制，根据用途而呈对应的适宜剂型。举例言之，但不以此为限，该药剂可以采用口服或非经口服(例如：皮下、静脉内、肌肉、腹腔、或鼻腔)的方式施用至有需要的个体上。其中，根据使用形式及用途而定，可选用适宜的载体以提供该药剂，其中，该载体包括赋形剂、稀释剂、辅助剂、安定剂、吸收延迟剂、崩散剂、增溶剂、乳化剂、抗氧化剂、黏合剂、结合剂、增黏剂、分散剂、悬浮化剂、润滑剂、吸湿剂等。

以适于口服的剂型为例，本发明所提供的药剂可含有任何不会不利影响式(I)化合物的药效的医药上可接受的载体，例如：水、食盐水、葡萄糖(dextrose)、甘油、乙醇或其类似物、纤维素、淀粉、糖膨润土(sugar bentonite)、及前述的组合。可利用任何适宜的方法，以适于口服的剂型提供该药剂，例如：锭剂(例如糖衣锭)、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、流浸膏剂、溶液剂、糖浆剂、悬液剂、酊剂等。

至于适于皮下、静脉内、肌肉、或腹腔注射的针剂或点滴剂，则可于本发明所提供的药剂中含有一种或多种例如等张溶液、盐类缓冲液(如磷酸盐缓冲液或柠檬酸盐缓冲液)、增溶剂、乳化剂、5％糖溶液、以及其他载体等成分，以静脉输注液、乳剂静脉输注液、干粉注射剂、悬液注射剂、或干粉悬液注射剂等剂型提供该药剂。或者，将该药剂制备成一种注射前固体，以可溶于其他溶液或悬浮液中的剂型、或可乳化的剂型提供该注射前固体，并于施用至有需要的个体之前，将该注射前固体溶于其他溶液或悬浮液中或将其乳化，提供所需要的注射剂。

根据需要，可于本发明所提供的药剂中另外含有适合用量的添加剂，例如可提高该药剂于服用时的口感及视觉感受的调味剂、调色剂、着色剂等，以及可改善该药剂的稳定性及储存性的缓冲剂、保存剂、防腐剂、抗菌剂、抗真菌剂等。此外，该药剂可根据需要另外含有一种或多种其他活性成分(例如肾上腺素、抗组织胺剂、类固醇等)，或者与含有该一种或多种其他活性成分的药物并用，以进一步加强该药剂的功效或增加制剂配方的运用灵活性与调配度，只要该其他活性成分对式(I)化合物的药效没有不利的影响即可。

可以一日一次、一日多次、或多日一次等不同服药频率施用本发明所提供的药剂，根据服药个体的需求、年龄、体重、及健康况状而异。举例言之，当以口服方式施用至一个体以提升免疫力、抑制过敏反应、及/或抑制自身免疫反应时，以式(I)化合物计，其用量为每天约0.1毫克/公斤体重至约10毫克/公斤体重，较佳为每天约1毫克/公斤体重至约10毫克/公斤体重，更佳为每天约5毫克/公斤体重至约10毫克/公斤体重，其中，该单位“毫克/公斤体重”是指每公斤体重个体所须的服药量。

根据需要，可将本发明药剂与以下的一种方式并用，以提升免疫力、抑制过敏反应、及/或抑制自身免疫反应的效果：脱敏疗法、及生物制剂疗法。

本发明也关于一种使用式(I)化合物于制造一种食品的用途，其中该食品用于提升免疫力、抑制过敏反应、及/或抑制自身免疫反应。

本发明的食品可以是保健食品或营养补充食品，且可以制成例如乳制品、肉类加工品、面包类、面食品、饼干、口含锭、果汁类、茶类、运动饮料、营养饮料等产品，但不以此为限。较佳地，根据本发明的食品是以保健食品的形式提供。

可以一日一次、一日多次、或多日一次等不同频率食用本发明所提供的保健食品及营养补充食品，根据食用个体的需求、年龄、体重、及健康况状而异。也可针对特定族群调整本发明所提供的保健食品及营养补充食品中式(I)化合物的含量，较佳为调整至每日应服用的量。举例言之，若一个体的建议摄取量为每日约10毫克式(I)化合物，而该保健食品每份含5毫克的式(I)化合物，则该个体每日可食用大约两份该保健食品。

可于本发明保健食品及/或营养补充食品的外包装上标示建议使用量、特定族群(例如孕妇、糖尿病患者、白血病患者)的使用标准及条件、或与其他食品或医药共同服用的注意事项，以方便用户在没有医师、药师或相关执业人员指导下可在家自行服用而无安全疑虑。

根据本发明的式(I)化合物可由任何合适的来源提供，举例言之，可由市面上购得，或由植物的萃取物纯化分离而来，也可通过化学合成方法获得。举例言之，可由天山雪莲(Saussurea involucrata)(通常使用其愈伤组织)萃取、纯化而获得式(I)化合物。

本发明另外关于一种提升免疫力、抑制过敏反应、及/或抑制自身免疫反应的方法，其包含对一个有需要的个体施用一有效量的式(I)化合物。其中，有关该式(I)化合物的来源、施用途径、施用形式、适用剂量及应用，均如上述的说明。

兹以下列实施例进一步举例说明本发明。其中这些实施例仅提供作为说明，而非用以限制本发明的保护范围。本发明保护范围如权利要求书所示。

实施例

制备实施例

A.周边血单核球细胞(PBMC)的获取

PBMC存在于周边血中的免疫细胞。于本制备实施例中，由健康捐赠者提供周边血，并从中分离出PBMC。

B.PBMC的处理

(b1)于24孔盘的各孔中添加1毫升X-VIVO 10培养液，接着，以1x10⁶至2x10⁶的密度将步骤A所获得的细胞分别种入各孔中；以及

(b2)将步骤b1所得到的细胞分为两组(控制组和实验组)，并进行以下处理：

控制组：直接将PBMC细胞置于5％CO₂与37℃恒温培养箱下培养(即，将PBMC细胞培养于不含式(I)化合物的培养液中)，历时24小时；

实验组：在各孔中添加式(I)化合物至最终浓度为5％，接着将PBMC细胞置于5％CO₂与37℃恒温培养箱下培养，历时24小时。

C.mRNA表达量的测定

(c1)纯化与放大aRNA

(c11)依照试剂制造商的指示，收集经步骤b2处理的细胞(包括控制组及实验组)，以进行RNA萃取及纯化，之后，使用NanoDrop 1000分光亮度计测量所得RNA的OD260/280比值、及OD260/230比值；

(c12)取1微克的RNA进行反转录作用，以合成第一股cDNA(first strand cDNA)；

(c13)利用步骤c12的第一股cDNA合成第二股cDNA，并纯化出双股cDNA；

(c14)对c13的双股cDNA进行转录作用，以合成经胺基丙烯基修饰的aRNA(aminoAllyl-modifies aRNA)，并纯化；以及

(c15)以Cy5荧光染剂对经纯化的aRNA进行染剂偶合反应(dye couplingreaction)，并纯化出经荧光标示的aRNA。

(c2)RNA微数组侦测

(c21)使用Phalanx杂交缓冲液、及Phalanx杂交系统，将步骤c15的经荧光标示的aRNA杂交至人类全基因体芯片(Human Whole Genome)

(c22)在杂交16小时后，将非专一性结合的目标物清洗掉；

(c23)使用DNA微数组扫描仪(型号G2505C)，扫描芯片；

(c24)使用GenePix 4.1软件，分析各点的Cy5荧光强度；

(c25)于再现性超过0.975的情况下，重复上述步骤c21至c24，各单一样本都至少重复两次，取荧光强度的平均值并填入Rosetta Resover中；

(c26)比较控制组及实验组的数据，并使用t-test来找出表达量显著改变的基因；以及

(c27)使用这些表达量显著改变的基因进行丛集分析(cluster analysis)，以找出受影响的路径。

实施例1：式(I)化合物于提升免疫力的功效

(1-1)活化巨噬细胞

介白素-1(interleukin-1，IL-1)及TNF-α都为促发炎细胞激素，可持续刺激活化巨噬细胞。活化的巨噬细胞具有清除外来病原的功能，可有效降低外来病原对生物体的伤害。

为了解式(I)化合物是否可促进巨噬细胞活化，于制备实施例C的mRNA表达量测定之后，分别将控制组及实验组中与巨噬细胞活化相关的基因(包括IL-1B及TNF-α)的表达量记录下来。之后，以控制组的基因表达量为基准标准化实验组的基因表达量。结果示于图1。

由图1可知，相较于控制组，实验组的IL-1B及TNF-α的表达量都显著提升。其中，相较于控制组，实验组的IL-1B的表达量甚至提升至16.32倍。此结果显示，式(I)化合物可有效促进巨噬细胞的活化，可用于提升生物体对抗外来病原的免疫力。

(1-2)活化MHC-I路径(major histocompatibility complex class I pathway)

MHC-I路径的功能在于毒杀受病毒或细菌感染的细胞，因此活化MHC-I路径将可提升生物体对抗外来病原的免疫力。其中，已知CTSL、HSPA1B、及HSPA2表达量的上升代表MHC-I路径被活化。

为了解式(I)化合物是否可促进MHC-I路径的活化，于制备实施例C的mRNA表达量测定之后，分别将控制组及实验组中与MHC-I路径相关的基因(包括CTSL、HSPA1B、及HSPA2)的表达量记录下来。接着，以控制组的基因表达量为基准标准化实验组的基因表达量。结果示于图2。

由图2可知，相较于控制组，实验组的CTSL、HSPA1B、及HSPA2的表达量都显著提升。其中，相较于控制组，实验组的CTSL及HSPA2的表达量甚至分别提升至3.13及4.61倍。此结果显示，式(I)化合物可有效促进MHC-I路径的活化，用于提升生物体对抗外来病原的免疫力。

由(1-1)及(1-2)的结果可知，式(I)化合物可有效提升免疫力。

实施例2：式(I)化合物于推迟免疫细胞老化的功效

(2-1)推迟免疫细胞老化的基因的表现

已知FOXO3、SOD2、及TNFRSF14等基因与免疫细胞的抗氧化、增殖与生长等相关。若可提升这些基因的表达量，将有助于推迟免疫细胞老化，使免疫细胞停留在年轻阶段。

为了解式(I)化合物是否有助于推迟免疫细胞老化，于制备实施例C的mRNA表达量测定之后，分别将控制组及实验组中有助于推迟免疫细胞老化的基因(包括FOXO3、SOD2、及TNFRSF14)的表达量记录下来。接着，以控制组的基因表达量为基准标准化实验组的基因表达量。结果示于图3。

由图3可知，相较于控制组，实验组的FOXO3、SOD2、及TNFRSF14的表达量都显著提升。其中，相较于控制组，实验组的SOD2的表达量甚至提升至6.06倍。此结果显示，式(I)化合物可有效推迟免疫细胞老化，使免疫细胞停留在年轻阶段。

(2-2)免疫细胞老化基因的表现

在免疫细胞中，有另外一群代表免疫细胞进入老年阶段的基因，包括CD244、ITGA4、及KLRG1等。当这些基因的表达量上升，表示免疫细胞已进入老年阶段。

为进一步了解式(I)化合物是否有助于推迟免疫细胞老化，于制备实施例C的mRNA表达量测定之后，分别将控制组及实验组中代表免疫细胞进入老年阶段的基因(包括CD244、ITGA4、及KLRG1)的表达量记录下来。接着，以控制组的基因表达量为基准标准化实验组的基因表达量。结果示于图4。

由图4可知，相较于控制组，实验组的CD244、ITGA4、及KLRG1的表达量都显著下降，分别仅有控制组的0.14、0.24、及0.35倍。此结果显示，式(I)化合物可有效抑制免疫细胞进入老年阶段，可用于推迟免疫细胞老化。

由(2-1)及(2-2)的结果可知，式(I)化合物可有效推迟免疫细胞老化。如前述，免疫细胞的功能会随着细胞老化而逐渐降低，此乃造成免疫力下降的主要原因之一。因此，(2-1)及(2-2)的结果也显示，式(I)化合物具有推迟免疫细胞老化的效果，从而可提升免疫力。

实施例3：式(I)化合物于抑制过敏反应的功效

已知MHC-II路径与过敏反应及/或自身免疫反应的发生具有高度关联，若能有效抑制MHC-II路径的活化，即可实现抑制过敏反应及/或自身免疫反应的效果。

为了解式(I)化合物是否可抑制MHC-II路径的活化，于制备实施例C的mRNA表达量测定之后，分别将控制组及实验组中与MHC-II路径相关的基因(包括CD4、CD74、CIITA、HLA-DMB、HLA-DPA1、HLA-DPB1、HLA-DQB1、HLA-DRA、及LGMN)的表达量记录下来。接着，以控制组的基因表达量为基准标准化实验组的基因表达量。结果示于图5。

由图5可知，相较于控制组，实验组的CD4、CD74、CIITA、HLA-DMB、HLA-DPA1、HLA-DPB1、HLA-DQB1、HLA-DRA、及LGMN的表达量都显著下降，分别仅有控制组的0.47、0.18、0.40、0.31、0.23、0.23、0.14、0.36及0.32倍。此结果显示，式(I)化合物可有效抑制MHC-II路径活化，可用于抑制过敏反应及/或抑制自身免疫反应。

由上述实验结果可知，本发明的式(I)化合物确实具有提升免疫力、抑制过敏反应、及/或抑制自身免疫反应的能力。