甲状腺素运载蛋白作为TBI患者受伤严重程度评估的新用途及其试剂盒

技术领域

本发明属于甲状腺素运载蛋白的用途领域，具体涉及甲状腺素运载蛋白作为TBI患者受伤严重程度评估的新用途。本发明还涉及一种评估或辅助评估TBI患者伤情严重程度的试剂盒及甲状腺素运载蛋白在制备作为评估或辅助评估TBI患者伤情严重程度的标记物中的应用。

背景技术

创伤性颅脑损伤(Traumatic Brain Injury，TBI)是世界上影响人类健康的一个重要因素。由于其可发生于交通意外，工作以及运动等与人类生活密切的场合，因此其具有极高的发生率。最近统计显示在美国每年有200万TBI发生，其中43％的TBI患者会遗留残疾。据统计在中国每年有100万TBI发生，而中国头部外伤数据显示(Chinese Head TraumaData Bank，CHTDB)，TBI患者的死亡率可以达到21.8％。

根据损伤程度，TBI可以分为轻度、中度和重度TBI。其划分方法主要依据格拉斯哥昏迷评分(Glasgow Coma Scale，GCS)，即在TBI中，GCS评分在3到8之间的患者为重度TBI，GCS评分在9到12之间的患者为中度TBI，GCS评分在13到15之间的患者为轻度TBI。其中GCS评分主要通过睁眼反应、语言反应和运动反应对TBI患者伤情进行评估。由于主治医生的经验等原因，具评估结果往往具有一定的主观性。而且TBI往往伴随着多发伤，导致与TBI可能无关的睁眼、语言和运动障碍，导致对TBI病情的误判。此外，不同国家、不同地域的语言也可能存在一定的交流障碍。因此TBI患者病情准确客观的评估对其精准合理治疗，防止治疗过度和治疗不足具有重要的指导意义。甲状腺素运载蛋白(transthyretin，TTR)，又称为前白蛋白(prealbumin，PA)、VA运转蛋白,分子质量约为54ku。90％是由肝脏产生的，脉络膜丛及视网膜也产生此蛋白质的小片段，而后分泌人脑脊液和血液。TTR是一种可溶性四聚体蛋白质，每个单体含127个氨基酸，它以四聚体的形式发挥功能，转运甲状腺素和视黄醇。

发明内容

本发明的第一个方面在于公开了一种用于检测甲状腺素运载蛋白的物质在制备评估或辅助评估TBI患者伤情严重程度的物质中的应用。

本发明的第二个方面在于公开了一种用于检测甲状腺素运载蛋白的物质在制备评估或辅助评估TBI患者伤情严重程度的试剂盒中的应用。

优选的，本发明的第一、第二方面的应用中，所述用于检测甲状腺素运载蛋白的物质为抗甲状腺素运载蛋白的抗体。

优选的，本发明的第一、第二方面的应用中，所述甲状腺素运载蛋白如序列表的序列1所示。

优选的，本发明的第一、第二方面的应用中，对于某个待测患者而言，如果甲状腺素运载蛋白含量≤3.0ng/ml，判断为轻度TBI患者；如果甲状腺素运载蛋白含量3.0ng/ml<TTR含量≤8.5ng/ml，判断为中度TBI患者；如果甲状腺素运载蛋白含量＞8.5ng/ml、判断为重度TBI患者。

本发明的第三个方面公开了一种评估或辅助评估TBI患者伤情严重程度的试剂盒，包括用于检测甲状腺素运载蛋白的物质。

优选的，本发明的第三方面的试剂盒中，所述用于检测甲状腺素运载蛋白的物质为抗甲状腺素运载蛋白的抗体。

优选的，本发明的第三方面的试剂盒中，所述甲状腺素运载蛋白如序列表的序列1所示。

本发明的第四个方面公开了一种甲状腺素运载蛋白在制备评估或辅助评估TBI患者伤情严重程度的标记物的应用。

优选的，本发明的第四方面的应用中，所述标记物含有甲状腺素运载蛋白，所述甲状腺素运载蛋白如序列表的序列1所示。

本发明中，除特别声明外，甲状腺素运载蛋白与Tranthyretin、TTR含义相同。

在一些实施方式中，本发明的目的是提供甲状腺素运载蛋白(TTR)作为TBI患者伤情严重程度评估标记物的新用途。

在一些实施方式中，本发明要求保护用于检测甲状腺素运载蛋白(TTR)的物质在制备评估TBI患者伤情的试剂盒中的应用。所述甲状腺素运载蛋白具体可如序列表的序列1所示。所述用于检测甲状腺素运载蛋白的物质具体可为抗甲状腺素运载蛋白的抗体，如兔抗TTR抗体，具体可为abcam公司的兔抗TTR抗体。

在一些实施方式中，本发明还要求保护用于检测甲状腺素运载蛋白的物质在制备检测或辅助检测待评估患者TBI伤情的试剂盒中的应用。所述甲状腺素运载蛋白具体可如序列表的序列1所示。所述用于检测甲状腺素运载蛋白的物质具体可为抗甲状腺素运载蛋白的抗体，如兔抗TTR抗体，具体可为abcam公司的兔抗TTR抗体。

在一些实施方式中，本发明还保护一种评估TBI患者伤情试剂盒，包括用于检测甲状腺素运载蛋白的物质。所述甲状腺素运载蛋白具体可如序列表的序列1所示。所述用于检测甲状腺素运载蛋白的物质具体可为抗甲状腺素运载蛋白的抗体，如兔抗TTR抗体，具体可为abcam公司的兔抗TTR抗体。

在一些实施方式中，本发明还保护一种评估或辅助评估TBI患者伤情严重程度的试剂盒，包括用于检测甲状腺素运载蛋白的物质。所述甲状腺素运载蛋白具体可如序列表的序列1所示。所述用于检测甲状腺素运载蛋白的物质具体可为抗甲状腺素运载蛋白的抗体，如兔抗TTR抗体，具体可为abcam公司的兔抗TTR抗体。

在一些实施方式中，本发明还保护甲状腺素运载蛋白作为TBI患者伤情评估的标记物的应用。所述甲状腺素运载蛋白具体可如序列表的序列1所示。

TBI患者伤情严重程度评估必须具备特异性好、敏感性高、重现性好和患者依从性好等特点。实验证明，TTR可作为TBI患者伤情严重程度评估的标志物。在实施例2中，对于178例TBI患者来说，伤情越重，脑脊液中TTR的相对水平越高(P<0.0001)，实施例2中的灵敏度大于99.9％、特异性大于99.9％。GCS评分越低，TBI患者脑脊液中的TTR水平越高。结果表明，TTR可用于TBI患者伤情严重程度评估，且结果准确，操作简便，具有较大的应用价值。

附图说明

图1为实施例1的结果；

图2为实施例2中的ELISA分析结果；

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

灵敏度(真阳性率)：实际有病而按试验标准被正确判断为有病的百分率，灵敏度越大越好，理想灵敏度为100％。

特异度(真阴性率):实际无病而按试验标准被正确判断为无病的百分率，特异度越大越好，理想特异度100％。

实施例1 甲状腺素运载蛋白可以作为TBI患者伤情严重程度的标记物的发现过程

配对样本：6只TBI SD大鼠，以及假手术SD大鼠。

通过iTRAQ对TBI大鼠脑组织损伤区以及假手术组大鼠对应部位蛋白进行标记，采用定量蛋白组学UPLC-LTQ Orbitrap-Velos超高压液相与质谱分析TBI后大鼠损伤区脑组织蛋白表达变化；MaxQuant(版本1.5.3.28)搜索Swiss-Prot(版本release 2015_08,7928query number)数据库。经典卡值：蛋白质丰度增加1.0倍或者蛋白质丰度减少1.0倍。

通过免疫荧光技术证实TTR基因在TBI组中表达量显著上调。具体的实验方法如下：分别取各个样本，进行免疫组织化学检测。一抗为TTR抗体(Abcam，货号：ab154560)，二抗为羊抗兔荧光二抗(Abcam，货号：ab150077)。结果见图1。

Sham组为假手术组；CCI组为控制性脑皮质撞击(Controlled Corti-cal Impact，CCI)模型组。

实施例2 TTR在TBI患者脑脊液中的水平差异

检测样本：178例TBI患者的脑脊液(55例轻度TBI，61例中度TBI，62例重度TBI)；

各个患者均为知情同意的志愿者。

分别取各个样本，进行酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbentassay，ELISA)检测。采用ELISA试剂盒为TTR检测试剂盒(Cloud-Clone，货号：SEB236Hu)。178例TBI患者脑脊液TTR检测结果见图2(每个点代表1个样本)。对于TBI患者来说，患者伤情越重，脑脊液中的TTR含量越高。

基于如下标准评判：对于某个待测患者而言，如果TTR含量≤3.0ng/ml、判断为轻度TBI患者，如果3.0ng/ml<TTR含量≤8.5ng/ml、判断为中度TBI患者；TTR含量＞8.5ng/ml、判断为重度TBI患者。灵敏度大于99.9％，特异性大于99.9％。

综上所述，仅为本发明之较佳实施例，不以此限定本发明的保护范围，凡依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆为本发明专利涵盖的范围之内。

序列表

<110> 北京臻惠康生物科技有限公司

<120> 甲状腺素运载蛋白作为TBI患者受伤严重程度评估的新用途及其试剂盒

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 147

<212> DNA

<213> 人工序列()

<400> 1

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