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一种改进的鉴定细胞样品中RNA结合蛋白的靶标RNA序列的方法

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本发明涉及生物技术领域，提供了一种改进的对细胞内RNA结合蛋白所结合的靶标RNA序列的鉴定。通过UV交联‑ 免疫共沉淀获得RNA 结合蛋白的靶标RNA，使用微球菌核酸酶对紫外交联后的靶标RNA 作不完全酶解，酶解结束后使用能去除Ca2+ 离子的螯合剂使该酶失活，将上述方法获得的靶标RNA 3’末端磷酸化并连接3’RNA 接头，之后对连接产物磷酸化、分离和回收，之后连接5’RNA 接头，并进行RT‑PCR 扩增，获得靶标RNA 相应的cDNA 文库。本发明简化实验流程，去掉同位素标记步骤，加入IgG抗体阴性对照样品扣除非特异结合和背景对实验结果的影响，达到与Clip‑seq同等质量的数据结果。

著录项

公开/公告号CN107674870A

专利类型发明专利
公开/公告日2018-02-09

原文格式PDF
申请/专利权人武汉生命之美科技有限公司;
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申请/专利号CN201610619492.1
发明设计人张翼;薛亚强;张宇;陈栋;
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申请日2016-08-01
分类号C12N15/10(20060101);C40B50/06(20060101);
代理机构42222 武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙);
代理人张火春
地址 430075 湖北省武汉市东湖新技术开发区高新二路388号武汉光谷国际生物医药企业加速器1.1期9楼4号
入库时间 2023-06-19 04:28:55

法律信息

法律状态公告日

法律状态信息

法律状态
2018-03-09

实质审查的生效 IPC(主分类):C12N15/10 申请日:20160801

实质审查的生效
2018-02-09

公开

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3. Control primer annealing to improve the specificity of annealing in nucleic acid amplification kit.Methods for amplifying a nucleic acid sequence of a DNA or a mixture of nucleic acids.And for selectively amplifying a nucleic acid sequence of a target DNA or a mixture of nucleic acids, and a sequence of the target nucleic acid from a mRNA.Method for detecting the complementarity of DNA to mRNA differentially expressed in two or more samples of nucleic acid, methods for amplifying a fragment of the cDNA and DNA quickly target.And to amplify a population of cDNAs of filament double full-length complementary to mRNAs cDNAs, and filament double fortified with 5 'complementary to mRNAs,Method to amplify rather than a sequence of nucleotu00ecdeo target at the same time, methods for producing a digital printing gDNA DNA, and RNA in a sample of mRNA.Method for identifying segments of homology is conserved in a family of multigene from a sample of mRNA, a method for the mutagenesis in a target [P] . BR0214741A . 2004-11-23

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4. Control primer annealing to improve the specificity of annealing in nucleic acid amplification, kit, methods for amplifying nucleic acid sequences of DNA and sequence of target nucleic acid or a mixture of nucleic acids, to detect the complementari Dade of DNA to mRNA differentially expressed in two or more samples of nucleic acid.To amplify a fragment of the cDNA target quickly, to amplify a population of cDNAs of filament double full-length complementary to mRNAs cDNAs, and filament double fortified with 5 'complementary to mRNAs to amplify rather than a sequence of nucleotide al VO at the same time, to produce a digital printing gDNA DNA, and RNA in a sample of mRNA.To identify segments of homology is conserved in a multigene family from a sample of mRNA, to identify a variation of nucleotide in a target nucleic acid, for mutagenesis in a target nucleic acid, and use of the initiator [P] . BRPI0214741B1 . 2015-05-12

机译：控制引物退火以改善核酸扩增中退火的特异性，试剂盒，扩增DNA核酸序列和靶核酸序列或核酸混合物的方法，检测DNA与mRNA互补表达的互补性（两种）或更多核酸样品。要快速扩增cDNA靶标的片段，以扩增与mRNA cDNA互补的长丝两倍全长的cDNA群体，并用与mRNA互补的5'双重修饰的长丝进行扩增而不是序列同时鉴定一个核苷酸的VO片段，以产生一个数字印刷的gDNA DNA和一个mRNA样品中的RNA。从一个mRNA样品中鉴定一个多基因家族中的同源片段是保守的，以鉴定一个核苷酸中一个核苷酸的变异。靶核酸，用于在靶核酸中诱变，以及引发剂的用途
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