用于治疗耳蜗植入手术引起的听力损失的方法

背景技术

听力损失是一种普遍的疾病，据报告，约17%的美国成人有一定程度的听力损失。参见Weaver etal., Hearing J. 67: 14-20 (2014)。耳蜗植入（cochlear implant）可以为许多因暴露于耳毒素（ototoxin）、噪音创伤或衰老而遭受听力损失的患者提供听力改善。参见Yawn et al. F1000 Prime Report, 7:45 (2015)。耳蜗植入术是一种外科手术，其中电极被插入患者的耳蜗中，并且电极与患者的听觉神经系统非常接近。然后电极可以将信号从外部麦克风直接传输到患者的听觉系统。因此，耳蜗植入术用可以使患者在某种程度上恢复听力的数字化听力系统代替患者的正常听力。由于耳蜗植入术利用患者的听觉神经纤维，因此符合此程序的患者必须具有正常且健康的听觉神经细胞用于使耳蜗植入术发挥作用。保留声学听力以实现混合听力技术的优势需要保留耳蜗内的内部和外部毛细胞以及传入神经元，尽管存在耳蜗植入插入创伤。

通常认为，耳蜗植入术会破坏听力的自然机制，并用数字听力替代它。参见Yawnet al. F1000 Prime Report, 7:45 (2015)。在复杂的聆听环境中，保持自然的听力可以改善语音理解、声音本地化和听力。为了保持自然的听力机制，已经尝试了许多不同的耳蜗植入的外科手术。这些外科手术包括最大化防止损伤的鼓阶（scala tympani）插入的方法，依赖于通过自然存在的途径（例如圆窗）将电极插入耳蜗的方法，或依赖于在耳蜗中形成单独开口的方法。但是，在耳蜗植入患者中，保持自然听力的外科手术方法之间没有发现显著差异。

在一项由耳蜗植入术引起听力损失的研究中，发现局部施用N-乙酰半胱氨酸（NAC）对改善听力仅具有适度和短暂的作用。Eastwood et al., Hearing Research 259:24-30 (2010)。这项研究指出，仅在插入后4周的时间点在最高频率（32 kHz）处局部施用NAC，听力几乎没有明显改善，而在较低频率下则无保护作用。

因此，在减轻接受耳蜗植入手术的患者遭受的听力缺陷方面仍然存在巨大的医学需求。

概述

本发明人通过提供用于在有此需要的对象中减轻耳蜗植入手术的负面影响的方法和组合物，成功地满足了上述医学需求。因此，本发明的至少一个方面涉及减轻耳蜗植入手术的负面影响的方法，其包含在进行耳蜗植入手术之前、期间或之后向对象施用有效量的2,4-二磺酰基α-苯基叔丁基硝酮（2,4-DSPBN或HPN-07）或其药学上可接受的盐和N-乙酰半胱氨酸（NAC）或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，将HPN-07和NAC局部地（locally）施用于遭受耳蜗植入手术负面影响的对象。

在一些实施方案中，将HPN-07和NAC全身性施用于遭受耳蜗植入手术负面影响的对象。

在一些实施方案中，将HPN-07和NAC直接施用进遭受耳蜗植入手术负面影响的对象的耳蜗中。

在一些实施方案中，将HPN-07和NAC口服施用于遭受耳蜗植入手术负面影响的对象。

在一些实施方案中，在对象接受电极的耳蜗植入术之前，将HPN-07和NAC施用于对象。

在本发明的另一方面，在耳蜗植入手术之前、期间和之后，将HPN-07和NAC施用于对象。在一些实施方案中，在手术之前、期间和之后口服施用HPN-07和NAC。在一些实施方案中，在手术之前静脉内或局部（topically）施用HPN-07和NAC，并且在手术期间和之后口服施用HPN-07和NAC。在一些实施方案中，在手术之前口服施用HPN-07和NAC，在手术时或紧接在手术前静脉内施用HPN-07和NAC，以及在手术之后口服施用HPN-07和NAC。

在一些实施方案中，在对象接受电极的耳蜗植入术之前，将包含HPN-07和NAC和进一步包含润滑剂的组合物局部施用于对象。

在一些实施方案中，需要耳蜗植入术的对象接受涂覆有HPN-07和NAC的组合物的电极。

在一些实施方案中，需要耳蜗植入术的对象接受包含HPN-07和NAC和进一步包含热敏凝胶（例如Pluronic水凝胶）的组合物。

在一些实施方案中，在耳蜗植入手术之前、期间或之后，在鼓室内施用HPN-07和NAC的组合物。

在一些实施方案中，对象属于成人群体。

在一些实施方案中，对象属于儿童群体。

在一些实施方案中，儿童群体选自新生儿（出生至1个月）、婴儿（1个月至2岁）、发育中的儿童（2-12岁）和青少年（12-16岁）。

一方面，本发明提供一种在进行耳蜗植入手术之前、期间和/或之后治疗被诊断患有感觉神经性听力损失的人类对象的方法，其包含在进行耳蜗植入手术之前、期间和/或之后向对象施用有效量的2,4-二磺酰基α-苯基叔丁基硝酮（2,4-DSPBN）或其药学上可接受的盐和N-乙酰半胱氨酸（NAC）或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，在进行耳蜗植入手术之前、期间和/或之后治疗被诊断患有感觉神经性听力损失的人类对象的方法进一步包含在一个或多个测试频率下进行听性脑干反应（ABR）阈值记录（通过引起ABR应答所需的声压级（以dB为单位）进行测量）。

在一些实施方案中，在进行耳蜗植入手术之前、期间和/或之后治疗被诊断患有感觉神经性听力损失的人类对象的方法进一步包含将在一个或多个测试频率下为对象记录的ABR阈值与在相同的一个或多个测试频率下为未经治疗或对照对象记录的ABR阈值进行比较。

在一些实施方案中，在一个或多个测试频率下为对象记录的ABR阈值低于未经治疗或对照对象的ABR阈值。

在一些实施方案中，在范围为1至8 kHz的一个或多个测试频率下进行ABR阈值记录。

在一些实施方案中，在进行耳蜗植入手术之前、期间和之后进行施用。

在一些实施方案中，本发明提供一种在进行耳蜗植入手术之前、期间和/或之后在对象中减少多个毛细胞损失的方法，其包含在进行耳蜗植入手术之前、期间和/或之后向人类对象施用有效量的2,4-二磺酰基α-苯基叔丁基硝酮（2,4-DSPBN）或其药学上可接受的盐和N-乙酰半胱氨酸（NAC）或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述毛细胞包含内部毛细胞、外部毛细胞或两者。在一些实施方案中，与未经治疗或对照对象相比，在范围为1至8 kHz的声音频率位置（tonotopic frequency position）处的多个外部毛细胞的损失减少了至少约70％。

在一些实施方案中，与未经治疗或对照对象相比，在范围为1至8 kHz的声音频率位置处的多个内部毛细胞的损失减少了至少约38％。

在一些实施方案中，与未经治疗或对照对象相比，在范围为2至8 kHz的声音频率位置处的多个外部毛细胞的损失减少了至少约86％。

在一些实施方案中，与未经治疗或对照对象相比，在范围为2至8 kHz的声音频率位置处的多个内部毛细胞的损失减少了至少约64％。

通过以下详细描述，这些和其他特征连同其组织和操作方式将变得显而易见。

附图说明

图1对应于实施例1，并显示了在耳蜗植入术之后即时和4周后在所有测试频率（2、4、8和16 kHz）下的平均阈值位移。图1所示的结果是从成年花色豚鼠获得的，该豚鼠是未经治疗的（仅载体）或施用含有10 mM NAC、10 mM 2,4-DSPBN（HPN-07）和1 μg/mL地塞米松的溶液的，使用具有灌注和泵系统的耳蜗电极植入在植入后7天的过程中以1 μL/小时的速率递送（耳蜗内）治疗剂。耳蜗植入术之后，动物12-35和12-36未接受2,4-DSPBN（HPN-07）和NAC的治疗。耳蜗植入术之后，动物12-37和12-39接受2,4-DSPBN（HPN-07）和NAC。

图2对应于实施例5，并显示了耳蜗植入插入创伤的豚鼠模型中NAC/HPN-07治疗介导的ABR阈值位移的减弱。图2中示出的结果是从成年花色豚鼠获得的，这些豚鼠是未经治疗的或在手术前两天用安慰剂（盐水）治疗（b.i.d.）或用含有300 mg/kg NAC/HPN-07（i.p.）的盐溶液治疗的。将外科手术级的银线模拟耳蜗电极通过手术植入每只豚鼠的一只耳朵中，在手术后对动物不进行治疗或用安慰剂治疗或用NAC/HPN-07（b.i.d.）治疗7天。手术后三周，进行ABR记录，并在安慰剂（盐水）对照和NHPN-1010治疗的动物中测量ABR阈值（图2A）和阈值位移（图2B）。图2A示出，在较宽的测试频率范围内观察到NHPN-1010特异性的耳保护（otoprotection）。在安慰剂治疗的对照组中，相对于原始对照组（黑色虚线），插入创伤（红线）在较宽的频率范围内持续引起统计学上显著的阈值升高（**，****，p<0.01和0.001）。在整个测试范围内，用NAC/HPN-07进行围手术期（peri-surgically）治疗的豚鼠中，这些升高显著减弱（绿线，主效应，##，p<0.01）。图2B示出在未经治疗、安慰剂治疗或NAC/HPN-07治疗的动物中测得的相对阈值位移的计算结果显示在整个测试频率范围内广泛的耳保护的明显趋势，在16 kHz时测得具有统计学上显著的保护作用（*，p＜0.05）。

图3对应于实施例5，并且示出NAC/HPN-07治疗显著降低由耳蜗植入创伤手术引起的内部和外部毛细胞损失的程度。如图2中所示的，在耳蜗植入手术之前，对成年花色豚鼠用安慰剂（盐水）或含有300 mg/kg NAC/HPN-07（i.p.）的盐溶液预治疗（b.i.d.）2天，然后手术后再用安慰剂或NAC/HPN-07（(b.i.d.）治疗7天。手术后三周，对动物进行安乐死，收集并固定耳蜗组织，用于使用HC特异性抗体（抗MyoVIIa）和TRITC标记的鬼笔环肽标记HC静纤毛对整个固定制剂中的内部和外部毛细胞（分别为IHC和OHC）损失进行组织学评估。沿每个样品各自的柯蒂氏器官（organ of Corti）的总长度进行耳蜗HC计数，对安慰剂治疗组（三角形数据点）和NAC/HPN-07治疗组（圆形数据点）的OHC损失百分比（％）（如图3A所示）和IHC损失百分比（％）（如图3B所示）进行平均，并独立绘制细胞耳蜗图。图上方的数字表示声音频率位置。在安慰剂治疗对照组（三角形数据点）中，相对于原始对照组，插入创伤在8-32kHz的声音频率范围内引起普遍的OHC（图3A）和IHC（图3B）损失。在整个解剖范围内，用NAC/HPN-07进行围手术期治疗的豚鼠，这种CI手术引起的HC损失的程度显著降低（圆形数据点，主效应，###，A中p<0.001，##，B中p<0.01）。

详细描述

本申请的发明人惊奇的发现，先前建立的NAC和HPN-07的协同耳保护性能还可以防止由耳蜗植入手术引起的听力损失。因此，本文描述的内容提供一种减轻耳蜗电极植入的负面影响的方法。本文描述了具体的治疗方法，但总的来说，所述方法包含与N-乙酰半胱氨酸及其衍生物或其药学上可接受的盐（以下称为“NAC”）组合施用有效量的2,4-二磺酰基α-苯基叔丁基硝酮（2,4-DSPBN）及其衍生物或其药学上可接受的盐（以下简称“HPN-07”）。

如“实施例”部分中所述，进行了研究来测试HPN-07和NAC在减轻由耳蜗植入手术引起的听力损失中的作用。通过进行听性脑干反应（ABR）测试并测量毛细胞损失，可以发现由耳蜗植入术引起的听力损害。最令人惊奇的是，实施例1和5示出，通过ABR测量和通过测量毛细胞的损失确定HPN-07和NAC与或不与地塞米松的共同施用可以防止耳蜗植入术引起的听力损失。本申请的发明人假设，本文公开的方法还将通过防止毛细胞损失来提供针对耳蜗植入引起的听力损失的长期保护。

2,4-DSPBN（HPN-07），2,4-二磺酰基α-苯基叔丁基硝酮；ABR，听性脑干反应；BHA，丁基羟基茴香醚；BHT，丁基羟基甲苯；EDTA，乙二胺四乙酸；CI，耳蜗植入；COX-2，环氧化酶-2；dB，分贝；DNA，脱氧核糖核酸；EIT，电极插入创伤；ICAM-1，细胞间黏附分子-1；IHC，内部毛细胞；IL-1，白介素-1；iNOS，诱导型一氧化氮合酶；kHz，千赫；NAC，N-乙酰半胱氨酸；NF-кB，核因子κB；OC，柯蒂氏器官；OHC，外部毛细胞；RWM，圆窗膜；TGF-β，转化生长因子-β；TNF-α，肿瘤坏死因子-α。

本发明提供一种减轻耳蜗植入手术对听力的负面影响的方法，其包含向遭受耳蜗植入术负面影响的对象施用有效量的HPN-07或其药学上可接受的盐和NAC或其药学上可接受的盐。

在耳蜗植入术期间，将电极通过手术插入至耳蜗中并连接至听觉神经纤维，从而对耳蜗内的器官和组织造成创伤。Yawn R. et al. F1000 Prime Report 7, 45 (2015)。耳蜗内部器官的这种创伤可以导致听力损失。

与耳蜗植入（CI）电极插入手术相关的原发性（机械性）和继发性（分子性）创伤均导致剩余听力敏锐度的急性和进行性损失。因此，CI手术可能导致物理或机械创伤，从而导致听力损失。

如本文实施例1中所示进行的研究表明，与NAC组合施用有效量的HPN-07可以防止由耳蜗植入术引起的听力损失。NAC和HPN-07的组合治疗方案具有解决与CI电极插入创伤（EIT）相关的这些主要病理反应模式的潜力。因此，在一些实施方案中，在进行耳蜗植入术之前、期间和/或之后，将HPN-07和NAC施用于对象。

HPN-07和NAC对耳蜗植入术引起的听力损失的保护作用可以通过听性脑干反应（ABR）测量来衡量。在下面进一步描述ABR。简而言之，通过将激活的针状电极和参比电极分别放置在右耳和左耳附近，同时将接地电极放置在顶点处来进行ABR测量。听觉刺激是使用与高频换能器连接的计算机辅助系统生成的。声音刺激是在2、4、8、16和32 kHz的频率下的音调点。以10 dB的下降步长测试听力阈值，直到接近阈值为止，然后采用5 dB的上升步长来确定阈值。阈值定义为观察到的清晰反应的最低水平与无反应的下一个水平之间的中点。阈值位移是指受伤（例如，暴露于爆炸、大声的声音、耳毒素等）前后阈值的差异。基于ABR测量，本文的实施例1和5表明，与对照动物相比，接受HPN-07和NAC以及耳蜗植入的动物能够以较低的分贝值检测到测试音。HPN-07和NAC的最明显的影响发生在较低的2和4 kHz的频率上。因此，本发明提供一种在进行耳蜗植入手术之前、期间和/或之后治疗被诊断患有感觉神经性听力损失的人类对象的方法，其包含在进行耳蜗植入手术之前、期间和/或之后向对象施用有效量的2,4-二磺酰基α-苯基叔丁基硝酮（2,4-DSPBN）或其药学上可接受的盐和N-乙酰半胱氨酸（NAC）或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，在进行耳蜗植入手术之前、期间和/或之后治疗被诊断患有感觉神经性听力损失的人类对象的方法进一步包含在一个或多个测试频率下进行听性脑干反应（ABR）阈值记录（通过引起ABR应答所需的声压级（以dB为单位）进行测量）。

在一些实施方案中，在进行耳蜗植入手术之前、期间和/或之后治疗被诊断患有感觉神经性听力损失的人类对象的方法进一步包含将在一个或多个测试频率下为对象记录的ABR阈值与在相同的一个或多个测试频率下为未经治疗或对照对象记录的ABR阈值进行比较。在一些实施方案中，在一个或多个测试频率下为对象记录的ABR阈值低于未经治疗或对照对象的ABR阈值。在一些实施方案中，在一个或多个测试频率下为对象记录的ABR阈值比未经治疗或对照对象低2倍、3倍、4倍、5倍或10倍。在一些实施方案中，在范围为1至8 kHz的一个或多个测试频率下进行ABR阈值记录。

如本文所用，术语“听性脑干反应（ABR）阈值”是指在给定频率下从多个动物记录的阈值位移的平均值。在这种情况下，阈值位移是在原始基线中引起ABR应答所需的声压级（dB）与在创伤（在这种情况下为CI手术）后在同一动物中引起应答所需的声压级之差。例如，如果动物的基线ABR阈值在8 kHz下为25 dB，并且在CI手术后三周时在8 kHz下为75dB，则该频率下的阈值位移将为50 dB。

在本领域中众所周知，豚鼠中使用的测试频率比人类对象中使用的临床相关测试频率高约2倍。因此，本文中豚鼠的测试频率2、4、8和16 kHz将分别对应于人类对象中的测试频率1、2、3或8 kHz。

通过在实施例5中测量毛细胞损失，还观察到了HPN-07和NAC对由耳蜗植入术引起的听力损失的保护作用。因此，本发明提供一种在进行耳蜗植入手术之前、期间和/或之后在对象中减少多个毛细胞损失的方法，其包含在进行耳蜗植入手术之前、期间和/或之后向人类对象施用有效量的2,4-二磺酰基α-苯基叔丁基硝酮（2,4-DSPBN）或其药学上可接受的盐和N-乙酰半胱氨酸（NAC）或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述毛细胞包括内部毛细胞、外部毛细胞或两者。

在一些实施方案中，与未经治疗或对照对象相比，在范围为1至8 kHz的声音频率位置处的多个外部毛细胞的损失减少了至少约70％。在一些实施方案中，与未经治疗或对照对象相比，在范围为1至8 kHz的声音频率位置处的多个外部毛细胞的损失减少了至少约20％、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%。

在一些实施方案中，与未经治疗或对照对象相比，在范围为1至8 kHz的声音频率位置处的多个内部毛细胞的损失减少了至少约38％。在一些实施方案中，与未经治疗或对照对象相比，在范围为1至8 kHz的声音频率位置处的多个内部毛细胞的损失减少了至少约20％、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%。

在一些实施方案中，与未经治疗或对照对象相比，在范围为2至8 kHz的声音频率位置处的多个外部毛细胞的损失减少了至少约86％。在一些实施方案中，与未经治疗或对照对象相比，在范围为1至8 kHz的声音频率位置处的多个外部毛细胞的损失减少了至少约20％、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%。

在一些实施方案中，与未经治疗或对照对象相比，在范围为2至8 kHz的声音频率位置处的多个内部毛细胞的损失减少了至少约64％。在一些实施方案中，与未经治疗或对照对象相比，在范围为1至8 kHz的声音频率位置处的多个内部毛细胞的损失减少了至少约20％、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%。

不受理论的束缚，本发明假设HPN-07和/或NAC可以通过防止氧化应激、炎症和细胞死亡来防止听力损失。因此，如下面进一步描述的，还可以通过对氧化应激、炎症和/或细胞死亡途径的生物标志物进行组织学评估来观察HPN-07和NAC对由耳蜗植入术引起的听力损失的保护作用。

NAC可以靶向氧化应激、谷胱甘肽缺乏症、神经炎症、线粒体损伤和半胱天冬酶介导的（凋亡）细胞死亡（Kopke et al., Hear Res. 226(1-2): 114-25 (2007)）。NAC可以直接作为有效的活性氧（例如H

NAC还可以通过显著限制促炎性转录因子（如核因子кB（NF-кB））的诱导而具有有效的抗炎性能（Shahripour et al., Brain and Behavior 4(2): 108-122 (2014)）。此外，NAC可以阻断或减弱大量的其他应激诱导的促炎性和促凋亡调节剂，包括TNFα、白介素-1（IL-1）、环氧合酶-2（COX-2）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）和半胱天冬酶3（(Chen et al.,Mediators Inflamm. 2008:716458 (2008); Lindblad, Noise Health. 13(55):392-401(2011); Kopke et al., Hear Res. 323:40-50 (2015)）。

此外，NAC可以抑制增殖性纤维化和转化生长因子-β（TGF-β）活性（Sugiura etal.,Pulm Pharmacol Ther. 22(6): 487-91 (2009); Li et al., Respiration 84(6):509-17 (2012); Shen et al., Acta Pharmacol Sin. 37(5): 637-44 (2016)），更具体地，NAC可以减少啮齿动物脑膜炎模型中的耳蜗纤维化和骨化（Klein et al., AnnNeurol. 54(4):451-8 (2003); Wilk et al., PLoS One 11(2): e0147552 (2016)）。

HPN-07或2,4-二磺酰基α-苯基叔丁基硝酮（2,4-DSPBN）可以起到清除和中和自由基的作用，以生成稳定并易于从体内排出的氮氧化物结合物，（Williams et al., FreeRadic. Res. 41 : 1047-52(2007)）。HPN-07可以通过直接和间接抑制诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、COX-2和NF-кB来降低谷氨酸兴奋性毒性（Floyd et al., Anticancer AgentsMed Chem. 1; 11(4): 373-379 (2011)）。不受理论的束缚，本文假设HPN-07对iNOS表达的抑制可能部分归因于HPN-07抑制应激诱导的NF-кB DNA结合的能力（Kotake et al.,Biochim Biophys Acta. 1448:77-84 (1998)），并且可以延伸为直接和间接抑制多种其他促炎性途径。

因此，用于组织学评估NAC和HPN-07对应激诱导的炎症和细胞死亡的作用的有用生物标志物可以包括但不限于TNFα、白介素-1（IL-1）、环氧合酶-2（COX-2）、NF-кB DNA结合、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、半胱天冬酶3和TGF-β。

2,4-二磺酰基α-苯基叔丁基硝酮也称为2,4-二磺酰基PBN、2,4-DSPBN、NXY-059或HPN-07。它具有以下结构：

该化合物的酸形式具有以下结构：

酸形式可以是固体或在低pH溶液中被发现。化合物的离子化盐形式存在于较高的pH值下，可以用下列结构之一表示：

在盐形式中，X是药学上可接受的阳离子。最常见的是，这种阳离子是一价物质，如钠、钾或铵，但其也可以是单独的多价或阳离子与药学上可接受的一价阴离子的组合，例如钙与氯化物离子、溴化物离子、碘化物离子、羟基、硝酸根、磺酸根、醋酸根、酒石酸根、草酸根、琥珀酸根、双羟萘酸根等阴离子；镁与这样的阴离子；锌与这样的阴离子等。在这些材料中，最优选游离酸和简单的钠、钾或铵盐，钙和镁盐也是优选的，但稍微不那么优选。美国专利号5,488,145详细描述了2,4-DSPBN，其通过引用并入本文。2,4-DSPBN的盐也可以类似于如本文所述的使用2,4-DSPBN的方式用于减轻由耳蜗植入术引起的听力损失。

2,4-DSPBN或其药学上可接受的盐可以以药学上可接受的量或其一部分（例如当调释剂型意图以2个胶囊进行给药时，药学上可接受量的50%）存在于调释剂型（modifiedrelease dosage form）中。例如，在一些实施方案中，2,4-DSPBN或其药学上可接受的盐以约250 mg至约3000 mg的量包含在调释剂型中。例如，一些实施方案包括约250、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700、1800、1900、2000、2100、2200、2300、2400、2500、2600、2700、2800、2900或3000 mg、以及介于其中的值或范围的2,4-DSPBN或药学上可接受的盐。在一些实施方案中，2,4-DSPBN或其药学上可接受的盐的该重量基于2,4-DSPBN部分的重量，从而药学上可接受的盐的反荷离子不会影响2,4-DSPBN的摩尔量。

为了减轻耳蜗植入术对听力的负面影响，能够以以下剂量施用2,4-DSPBN，例如约1 mg/kg至约1000 mg/kg体重之间、约50 mg/kg至约800 mg/kg体重之间、约100 mg/kg至约600 mg/kg体重之间、约200 mg/kg至约400 mg/kg体重之间。

在一些实施方案中，2,4-DSPBN的剂量可以是约50 mg/kg体重、约100 mg/kg体重、约200 mg/kg体重、约300 mg/kg体重，约400 mg/kg体重，约500 mg/kg体重、约600 mg/kg体重、约700 mg/kg体重、约800 mg/kg体重、约900 mg/kg体重或约1000 mg/kg体重。

为了减轻人类对象中耳蜗植入术对听力的负面影响，能够以以下日剂量施用2,4-DSPBN，例如约100 mg至约20,000 mg之间、或约500 mg至约10,000 mg之间、或约1,000 mg至约5,000 mg之间、或约100 mg、或约200 mg、或约500 mg、或约1,000 mg、或约2,000 mg、或约3,000 mg、或约5,000 mg、或约8,000 mg、或约10,000 mg。

对象可以以每日一剂、或每日两剂、或每日三剂、或每日四剂、或每日五剂施用。

在一些实施方案中，NAC是N-乙酰基-L-半胱氨酸的异构体纯净或富集形式（例如95、96、97、98、99、99.5、99.9对映体过量，定义为每种对映体的摩尔分数之间的绝对差）。在一些实施方案中，NAC是N-乙酰半胱氨酸的外消旋混合物。

为了减轻耳蜗植入术对听力的负面影响，能够以以下剂量施用NAC，例如约1 mg/kg至约1000 mg/kg体重之间、约50 mg/kg至约800 mg/kg体重之间、约100 mg/kg至约600mg/kg体重之间、约200 mg/kg至约400 mg/kg体重之间。

在一些实施方案中，NAC的剂量可以是约50 mg/kg体重、约100 mg/kg体重、约200mg/kg体重、约300 mg/kg体重，约400 mg/kg体重，约500 mg/kg体重、约600 mg/kg体重、约700 mg/kg体重、约800 mg/kg体重、约900 mg/kg体重或约1000 mg/kg体重。

为了减轻人类对象中耳蜗植入术对听力的负面影响，能够以以下日剂量施用NAC，例如约100 mg至约20,000 mg之间、或约500 mg至约10,000 mg之间、或约1,000 mg至约5,000 mg之间、或约100 mg、或约200 mg、或约500 mg、或约1,000 mg、或约2,000 mg、或约3,000 mg、或约5,000 mg、或约8,000 mg、或约10,000 mg。

在一些实施方案中，调释剂型包含NAC或其药学上可接受的盐的多个药丸。药丸可以是例如0.5 mm的目标尺寸至2.5 mm ± 10％的目标尺寸，但没有超过2.8 mm的药丸。

NAC或其药学上可接受的盐可以以药学上可接受的量或其一部分（例如当调释剂型意图以2个胶囊或片剂（例如压缩片）进行给药时，药学上可接受量的50%）存在于调释剂型中。例如，在一些实施方案中，NAC或其药学上可接受的盐以约300 mg至约2400 mg的量包含在调释剂型中。例如，一些实施方案包括约300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700、1800、1900、2000、2100、2200、2300或2400 mg、以及介于其中的值或范围的NAC。在一些实施方案中，NAC或其药学上可接受的盐的该重量基于N-乙酰基半胱氨酸部分的重量，使得药学上可接受的盐的反荷离子不影响NAC的摩尔量。

HPN-07和NAC的施用途径也可以影响针对耳蜗植入引起的听力损失的保护作用。在一些实施方案中，HPN-07和NAC作为混合物共同施用。在一些实施方案中，HPN-07和NAC作为不同的剂型按顺序或同时施用。

一方面，可以将有效剂量的HPN-07和NAC直接局部施用进耳蜗内。在一个实施方案中，HPN-07和NAC的有效剂量可以通过鼓膜内递送。例如，可以通过鼓膜通过注射将有效剂量的HPN-07和NAC直接递送至中耳内。替代地，可以在将电极植入接受耳蜗植入术的对象之前，通过用组合物涂覆电极来施用活性组合物。进一步地，活性组合物可以以纳米颗粒或树状聚合物制剂的形式施用。纳米颗粒可以是多功能的，并且由聚合物和顺磁性氧化铁颗粒组成，从而允许施加外磁力来帮助将药物递送至期望的靶标（例如内耳）。

在一个实施方案中，HPN-07和NAC可以间接地被递送至中耳的圆窗膜（RWM）。已经显示，RWM起半透膜的作用，当应用于中耳RWM时，它将允许许多物质（尤其是低分子量物质）渗透至内耳。参见例如Duan et al., 4(1): 34-43 (2009)。

另一方面，可以全身性施用有效剂量的HPN-07和NAC。全身性施用可以口服、鼻内或通过注射进行。通过注射施用可以在腹膜内、静脉内或肌内进行。其他递送方法包括但不限于吸入、舌下、皮下或鞘内给药。

一方面，可以在耳蜗植入手术之前、期间或之后施用HPN-07和NAC。

另一方面，可以在耳蜗植入手术之前、期间和之后施用HPN-07和NAC。在一些实施方案中，可以在手术之前、期间和之后口服施用HPN-07和NAC。在一些实施方案中，可以在手术之前静脉内或局部施用HPN-07和NAC，以及在手术期间或之后口服施用HPN-07和NAC。在一些实施方案中，可以在手术之前口服施用HPN-07和NAC，在手术时或紧接在手术前静脉内施用HPN-07和NAC，并且在手术之后口服施用HPN-07和NAC。

在一些实施方案中，在耳蜗植入术后，将HPN-07或其药学上可接受的盐和NAC施用于对象至少一个月、至少三个月、至少六个月、至少一年或至少两年。

在一些实施方案中，将HPN-07或其药学上可接受的盐和NAC施用于遭受耳蜗植入术负面影响的对象至少一个月、至少三个月、至少六个月、至少一年或至少两年。

本发明的组合物可以被用于治疗广泛的人类对象。在一些实施方案中，待治疗的人类对象可以属于成人群体。

在一些实施方案中，待治疗的人类对象可以属于儿童群体。如本文所用，术语“儿童群体”是指新生儿（出生至1个月）、婴儿（1个月至2岁）、发育中的儿童（2-12岁）和青少年（12-16岁）的群体。因此，在出生至16岁的年龄范围内的任何对象都属于儿童群体。年龄超过16岁的对象属于成人群体。

在一些实施方案中，本文公开的药物组合物包含一种或多种药学上可接受的载体，例如水性载体、缓冲剂和/或稀释剂。

在一些实施方案中，本文公开的药物组合物还包含简单的多元醇化合物，例如甘油。多元醇化合物的其他实施例包括糖醇。在一些实施方案中，本文公开的药物组合物包含水性载体和甘油的比例为约2：1。

制剂可以便利地以单位剂型存在，并且可以通过药学领域公知的任何方法制备。示例性的口服剂型是片剂或胶囊。示例性的鼻内剂型是液体或粉末鼻用喷雾。鼻用喷雾被设计为将药物递送到上鼻腔，并且其可以是液体或粉末制剂，并且例如是气溶胶、液体喷雾或粉末剂型。

HPN-07和/或NAC可以根据施用途径与合适的载体或媒介物组合或协调施用。如本文所用，术语“载体”是指药学上可接受的固体或液体填充剂、稀释剂或包封材料。含水液体载体可以包含药学上可接受的添加剂，例如酸化剂、碱化剂、抗菌性防腐剂、抗氧化剂、缓冲剂、螯合剂、络合剂、增溶剂、湿润剂、溶剂、悬浮剂和/或增黏剂、张度剂、湿润剂或其他生物相容性材料。在美国Pharmacopeia National Formulary 1857-1859和（1990）中可以找到按上述类别列出的成分列表。可以用作药学上可接受的载体的材料的一些实施例是糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；胶黄芪粉末；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，例如可可脂和栓剂蜡；油，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇，例如丙二醇；多元醇，例如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；酯，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；海藻酸；无热原水；等渗盐水；林格氏液，乙醇和磷酸盐缓冲液以及药物制剂中使用的其他无毒相容性物质。根据配方师的需求，组合物中也可以存在湿润剂、乳化剂和润滑剂（如十二醇硫酸钠和硬脂酸镁），以及着色剂、脱模剂、包衣剂、甜味剂、调味剂和增香剂、防腐剂和抗氧化剂。药学上可接受的抗氧化剂的实施例包括水溶性抗氧化剂，例如抗坏血酸、盐酸半胱氨酸、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠等；油溶性抗氧化剂，例如抗坏血酸棕榈酸酯、丁基羟基茴香醚（BHA）、二丁基羟基甲苯（BHT）、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚等；以及金属螯合剂，例如柠檬酸、乙二胺四乙酸（EDTA）、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等。

根据本发明的药物组合物还可以包含一种或多种粘合剂、填充剂、润滑剂、悬浮剂、甜味剂、调味剂、防腐剂、缓冲剂、湿润剂、崩解剂、泡腾剂和其他赋形剂。这样的赋形剂是本领域已知的。填充剂的实施例包括乳糖一水合物、无水乳糖和各种淀粉；粘合剂的实施例包括各种纤维素和交联的聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素（例如Avicel

用于治疗性施用的任何药物可以是无菌的。无菌性通过例如无菌滤膜（例如0.2微米的膜）过滤可以容易地实现。任何药学上可接受的无菌方法可以被用于本发明的组合物中。

考虑到个别患者的临床状况、施用方法、施用时间表以及从业人员已知的其他因素，包含HPN-07衍生物或其盐或NAC衍生物或其盐的药物组合物将按照与优质临床医疗指南一致的方式进行配制和给药。

HPN-07、NAC和/或HPN-07和NAC的组合制剂或本发明的组合物可以被包装在一起或与说明或包装插页一起包含在试剂盒中。考虑到HPN-07或其衍生物或盐以及NAC或其衍生物或盐的保质期，此类说明或包装插页可以满足建议的存储条件，例如时间、温度和光照。此类说明或包装插页还可以满足HPN-07或其衍生物或盐以及NAC或其衍生物或盐的特别的优势，例如易于储存的制剂，其可能需要在可控的医院、诊所或办公室条件之外的现场使用。

本发明还提供了一种药物包装或试剂盒，其包含一个或多个装有本文公开的一种或多种HPN-07和/或NAC药物组合物的容器。试剂盒可以包括例如装有适当量的HPN-07和/或NAC药物组合物的粉末、片剂、待溶解或无菌溶液的容器。与此类容器相关的可以是调节药品或生物制品制造、使用或销售的政府机构规定形式的通知，该通知反映了机构对用于人类施用的制造、使用或销售的批准。此外，HPN-07和/或NAC可以与其他治疗性化合物结合使用。

在其他方面，公开了一种试剂盒，其包含本文所描述的鼻用喷雾装置。一方面，试剂盒可以包含本文公开的一种或多种装置，其包含公开的低剂量HPN-07和/或NAC组合物，其中所述装置被密封在足以保护装置免受大气影响的容器内。容器可以是例如箔或塑料袋，特别是箔袋或热封箔袋。本领域技术人员容易理解足以充分保护该装置的合适容器。

一方面，试剂盒可以包含一个或多个本文公开的装置，其中该装置可以被密封在保护产品的物理完整性的第一保护性包装、或第二保护性包装或第三保护性包装中。第一、第二或第三保护性包装中的一个或多个可以包含箔袋。试剂盒可以进一步包含装置的使用说明。一方面，试剂盒包含两个或更多个装置。

一方面，试剂盒可以包含如本文公开的装置，并且可以进一步包含使用说明。一方面，说明可以包含对设备的使用者的视觉辅助/图片和/或书面指导。

如在本发明的说明书和所附权利要求书中所使用的，单数形式“一”、“一个”、“一种”和“该”可以互换使用，并且旨在包括复数形式并且落入每种含义内，除非上下文另有明确规定。而且，如本文所使用的，“和/或”是指并涵盖所列项目的一个或多个的任何和所有可能的组合，以及当以替代方式（“或”）解释时缺乏的组合。

如本文中所使用的，本领域普通技术人员将理解“约”，并且将在使用它的上下文中在某种程度上变化。如果给定其使用的上下文，但对于本领域普通技术人员而言尚不清楚该术语的使用，则“约”表示特定术语的正负10％。

如本文所用，短语“有效量”应指在需要这种治疗的大量对象中施用药物提供特定药理反应的药物剂量。要强调的是，在特定情况下向特定对象施用的治疗有效量的药物在治疗本文所述的病症/疾病中并不总是有效的，即使该剂量被本领域技术人员认为是治疗有效量。

如本文所用，术语“施用”包括处方施用以及实际施用，并且包括由所治疗的对象或另一者进行物理施用。

如本文所用，“对象”、“患者”或“个体”是指任何对象、患者或个体，并且这些术语在本文中可互换使用。在这方面，术语“对象”、“患者”和“个体”包括哺乳动物，尤其是人。当与“有此需要”一起使用时，术语“对象”、“患者”或“个体”是指具有特定症状或疾病或有特定症状或疾病风险的任何对象、患者或个体。

术语“治疗”、“处理”或其任何变化包括减轻、改善或消除（i）一种或多种特定症状和/或（ii）一种或多种特定疾病的症状或作用。术语“预防”、“防止”或其任何变化包括减轻、改善或消除发展（i）一种或多种特定症状和/或（ii）一种或多种特定疾病的症状或作用的风险。

应当理解，虽然已经结合上述实施方案描述了本公开，但是前述描述和实施例旨在说明而不是限制本公开的范围。对于本公开所属领域的技术人员来说，在本公开范围内的其他方面、优点和修改是显而易见的。

除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。

本文说明性描述的实施方案可以适当地在缺少本文未具体公开的任何要素、限制的情况下实施。因此，例如，术语“包含”、“包括”“含有”等应当被广泛地阅读而不受限制。另外，这里使用的术语和表达已被用作描述而非限制的术语，并且无意使用这些术语和表达来排除所示和所描述的特征的任何等效物或其部分，但应认识到，在本公开的范围内可以进行各种修改。

因此，应该理解的是，尽管已经通过具体实施方案和可选特征具体公开了本公开，但是本领域技术人员可以采用本文公开的实施方案的修改、改进和变化，并且这些修改、改进和变化被认为是在本公开的范围内。本文提供的材料、方法和实施例是具体实施方案的代表，是示例性的，并不旨在作为对本公开范围的限制。

本文已广泛地和一般地描述了本公开的范围。落入一般的公开内容中的每个较窄物种和亚属群组也构成本公开的一部分。这包括从该属中去除任何对象的附带条件或否定限制的一般性描述，无论是否在本文中具体叙述了被去除的材料。

另外，在根据马库什群组描述本公开的特征或方面的情况下，本领域技术人员将认识到，本公开的实施方案因此也可以根据马库什群组的任何单个成员或成员子群来描述。

本文提及的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献通过引用明确地以其整体并入，其程度如同每个单独地通过引用并入。如果发生冲突，以本说明书（包括定义）为准。

实施例

进行听性脑干反应的方法

听力是使用听性脑干反应（ABR）进行评估的，听性脑干反应（ABR）在AAT前1到3天之间以及AAT后以下一个或多个时间点进行测量：1小时、8小时、24小时、7天和21天。21天测试点的ABR阈值位移被认为是永久阈值位移（PTS）。在氯胺酮（90 mg/kg）和甲苯噻嗪（9 mg/kg）麻醉下进行ABR记录。如果需要，可以使用小的补充剂量（初始剂量的1/3）的麻醉剂。通过放置在头皮上的皮下针电极记录ABR，其中活性电极位于顶点，而参考电极和接地电极分别位于同侧和对侧乳突。从电极获得的电反应被放大（×100,000），过滤（100-3,000 Hz），并在信号处理板上数字化。对于每个刺激级别，在速率为21次/s的1024次重复中对它们进行平均。声学刺激是在2、4、8、16和32 kHz的频率下具有5 ms平稳期和0.5 ms cos2上升-下降包络线（envelope）的交变极性的音频脉冲。刺激通过高频传感器递送，该传感器的末端装有密封耳道的橡胶头。通过使用与成人对象耳朵同等体积的耦合器腔来校准传感器，该耦合器腔安装在声级计上。使用计算机辅助的SmartEP（Intelligent Hearing Systems,Miami, Fla.）完成刺激的产生和数据采集。

以10 dB的下降步长测试听力阈值，直到接近阈值为止，然后采用5 dB的上升步长来确定阈值。阈值定义为观察到的清晰反应的最低水平与无反应的下一个水平之间的中点。阈值位移是指AAT之前和之后的阈值差异。进行ABR测量的研究人员对动物群的身份不知情。

实施例1

该实施例的目的是证明包含2,4-二磺酰基PBN（HPN-07）、N-乙酰半胱氨酸（NAC）和地塞米松的组合物可以减轻豚鼠中由耳蜗植入创伤引起的听力损失。

手术步骤。对于该实验，一只耳朵植入了豚鼠硅树脂耳蜗电极和微型渗透泵装置。首先，通过在皮肤切开和微型泵放置时皮下注射赛洛卡因，并用甲苯噻嗪和氯胺酮的混合物完成全身麻醉。然后，将耳后区域剃毛并用碘和70％酒精消毒。使用耳后手术入路暴露大疱和顶点。然后用2 mm的金刚石切针（diamond burr）在大疱上钻一个开口，露出耳蜗的圆窗和基底回（basal turn）。然后使用0.5 mm金刚石切针在圆窗龛（round window niche）下进行1-2 mm的耳蜗造口术，直到看到外淋巴。然后使用微型镊子将有机硅电极插入鼓阶3mm。取自胸锁乳突肌的一小块肌肉移植物（约1×1 mm）包裹在电极载体周围，并用一滴2-辛基氰基丙烯酸酯（Dermabond, Ethicon）防止任何内耳液泄漏。将伤口完全缝合成两层。

下表1示出了该实施例的治疗方案。T-1测试组中的两只豚鼠仅植入了递送载体（人工外淋巴）。在指定为测试组T-2的人工外淋巴中，向两只豚鼠植入HPN07（10 mM）+ NAC（10 mM）+地塞米松（1 μg/ml）的活性治疗剂。C组动物为正常对照组，未进行耳蜗植入手术。表2列出了进行耳蜗植入手术后即时和4周后，在2 kHz、4 kHz、8 kHz和16 kHz时听性脑干反应对听力影响的结果。表3示出了正常豚鼠的ABR结果。

表1：用于测试HPN-07和NAC对耳蜗植入引起的听力损失的治疗方案。

表2：用于测试HPN-07和NAC对由耳蜗植入引起的听力损失的影响的ABR测量。

表3示出了正常豚鼠的ABR结果。

图1示出了与对照动物相比在所有测试频率上的阈值。如图1所示，HPN-07/NAC/地塞米松治疗的最显著效果出现在2和4 kHz。这表明接受HPN-07/NAC/地塞米松治疗的动物比对照组动物能够以更低的分贝值检测到测试音。

实施例2

该实施例的目的是确定NAC和HPN-07对耳蜗植入的动物的影响。实验方案显示在下表4中。

表4：用于确定NAC的短期影响的实验设置

如表4所示，比较了三组动物。第1组包括的对照动物不进行手术。第2组包括的动物进行耳蜗植入手术但不治疗。第3组包括的动物进行耳蜗植入手术并在手术前和手术后腹膜内注射HPN-07和NAC，每天两次，持续2周。植入后将观察动物四周。

用300 mg/kg的HPN-07和300 mg/kg的NAC治疗动物。每种药物的剂量可以增加到600 mg/kg。

在植入后4周通过ABR和通过由组织学分析确定的毛细胞损失来测量HPN-07和NAC的作用。

实施例3

该实施例的目的是确定NAC和HPN-07对耳蜗植入动物的长期影响。该实验旨在确定由耳蜗植入引起的损伤的时程，并确定与耳蜗插入创伤相关的细胞机制。研究了耳蜗植入术的早期和延迟影响。

实验设计是在动物的一只耳朵中进行耳蜗植入术，并如下表5所示评估与未经手术的对照动物相比其随时间变化的听力，并在未治疗的动物与用HPN-07和NAC治疗的动物之间进行并列式比较。在耳蜗植入术后48小时、10天、8周和12周评估动物的听力损失。听力损失通过ABR分析确定。进行组织学分析来测量毛细胞和螺旋神经节细胞计数。另外，进行组织学分析来测量氧化应激、炎症和细胞死亡途径的生物标志物。

表5：评估手术后12周内NAC和HPN-07的长期影响的研究方案

实施例4

该实施例的目的是确定NAC和HPN-07（NAC和HPN-07的组合有时称为NHPN-1010）的递送方式对耳蜗植入术引起的听力损失的影响。

该实验比较了通过腹膜内注射的全身性途径、通过圆窗膜（RWM）的局部递送、通过耳蜗内途径和通过从电极洗脱的方式来施用NAC和HPN-07的效果，如下表6所示。实验动物只有一只耳朵被植入和治疗。每个治疗组具有不活跃的载体对照，并且可以适当地具有模拟对照。在整个治疗期间，通过ABR和通过毛细胞损失的组织学分析测量NAC和HPN-07对耳蜗植入引起的听力损失的长期影响。

表6：比较4种不同的HPN-07和NAC施用方式的实验方案

实施例5

该实施例的目的是在成年花色豚鼠中进行的一项初步研究中评估NAC和HPN-07对耳蜗电极植入引起的听性脑干反应（ABR）阈值升高和毛细胞损失的预测的保护作用。

为了测量手术后ABR阈值位移，在开始实验之前，对研究中的所有豚鼠进行了基线ABR记录。然后对豚鼠不予治疗或在手术前两天用安慰剂（盐水）或含有300 mg/kg（每一种）NAC和HPN-07（i.p.）的盐溶液预治疗（b.i.d.）。涂有全氟烷氧基（PFA）的银线（0.0055’’）用于模拟电极（A- M System Inc, Carlsborg, WA）。使用丙烷/氧气炬将要植入的末端熔化成球形（300-400 um）。在手术当天，将外科手术级银线模拟耳蜗电极手术植入每只豚鼠的一只耳朵中。使用耳后入路手术暴露大疱和顶点。然后用2 mm的金刚石切针在大疱上钻一个开口，露出耳蜗的圆窗和基底回。然后使用0.5 mm金刚石切针在圆窗龛下进行1-2 mm的耳蜗造口术，直到看到外淋巴。然后使用微型镊子将银线插入鼓阶约3.5-4 mm。取自胸锁乳突肌的一小块肌肉移植物（约1×1 mm）包裹在电极载体周围。通过使用牙粘固剂将金属线固定在大疱上。将伤口完全缝合成两层。

在手术当天，对动物不予治疗或在手术后施用（i.p.）单剂量的NAC/HPN-07（每一种为300 mg/kg）或等体积的盐（安慰剂）溶液。然后对动物不予治疗或用NAC/HPN-07（b.i.d.）或盐水治疗另外7天。手术后三周，进行终末ABR记录，并测量每个实验组中每只动物的阈值位移。然后对动物进行安乐死，收集并固定耳蜗组织，用于使用HC特异性抗体（抗MyoVIIa）对整个固定制剂中的内部和外部毛细胞（分别为IHC和OHC）损失进行组织学评估。

如图2A所示，在手术后三周，在植入模拟耳蜗电极并用安慰剂治疗的豚鼠耳蜗中，ABR阈值在宽的频率范围内均显著升高（10-40 dB），听力损失的等级以顶点到基底（低频到高频）的方式发生。如图2B所示，这些动物在2-16 kHz频率范围内的平均ABR阈值位移（相对于手术前水平25.0 dB）与未经治疗的对照组的测量值（25.6 DB）相似，该对照以相同的方式进行了手术植入，但未使用安慰剂或NAC/HPN-07进行治疗。但是，在相同测试频率范围内，在用NAC/HPN-07进行围手术期治疗的豚鼠的手术植入耳蜗中，平均ABR阈值显著降低（图2A，主效应，p<0.01），从而导致平均阈值位移（10.4 dB）明显降低，表明持续的治疗特异性的耳保护作用。尽管该研究中动物的数量少（每组n = 3），但在宽的测试频率范围内NAC/HPN-07特异性的听力功能的保留是明显的，在2和4 kHz测试频率时平均阈值位移降低了三倍，并且在16 kHz时ABR阈值位移在统计学上显著降低，这意味着其灵敏度阈值比安慰剂或未经治疗的对照组低两倍以上。

如图3中细胞耳蜗图所示，在耳蜗电极植入手术后三周，在未经治疗和经安慰剂治疗的耳朵中测量到显著的外部毛细胞（OHC）和内部毛细胞（IHC）损失，其中大部分损失发生在8-32 kHz声音频率位置。在用NAC/HPN-07进行围手术期治疗的豚鼠中，该声音跨度的损伤的相对大小显著减小，从而产生了统计学上显著的治疗效果（主效应，对于OHC，###，p <0.001；对于IHC，##，p<0.01）。值得注意的是，在对应于8-32 kHz的整个声音频率位置上，平均CI手术相关的OHC的损失从用安慰剂治疗的对照组的85.1（± 3.9 SEM）降低至用NAC/HPN-07治疗的豚鼠中的26.1（± 5.4 SEM）。类似地，在相同的声音频率位置范围上，用NAC/HPN-07治疗的动物（26.9±4.4）中的平均IHC损失比用安慰剂治疗的对照组（43.4 ± 4.8）降低38%。在用安慰剂治疗的豚鼠的耳蜗基底回处，NAC/HPN-07治疗的治疗效果更加明显，比用安慰剂治疗的对照组中CI手术引起的平均OHC和IHC损失的影响分别降低了86％（97.0±1.7对13.4±3.8）和64％（50.5±6.4对18.0±3.8）。