荧光相关光谱（FCS）在植物细胞核中的应用方法

技术领域

本发明涉及植物细胞核技术领域，具体为荧光相关光谱(FCS)在植物细胞核中的应用方法。

背景技术

植物细胞是植物生命活动的结构与功能的基本单位，由原生质体和细胞壁两部分组成；原生质体是细胞壁内一切物质的总称，主要由细胞质和细胞核组成，在细胞质或细胞核中还有若干不同的细胞器，此外还有细胞液和后含物等，一般采用荧光相关光谱机械能分析，传统荧光相关光谱在植物细胞核中的应用方法操作复杂，成本高，直接采用荧光基团原料使植物细胞核发出荧光，无法绘制荧光相关光谱，不利于观察植物细胞核，无法描述植物细胞核特征，更无法分析植物细胞核生理生化过程；针对这些缺陷，设计荧光相关光谱(FCS)在植物细胞核中的应用方法是很有必要的。

发明内容

本发明的目的在于提供荧光相关光谱(FCS)在植物细胞核中的应用方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为了解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：荧光相关光谱(FCS)在植物细胞核中的应用方法，包括步骤一，荧光调制；步骤二，植物加工；步骤三，显微成像；步骤四，细胞分析；步骤五，清洗处理；

其中在上述步骤一中，荧光调制包括以下步骤：

1)人工根据植物细胞选择合适的荧光基团原料；

2)将选择的荧光基团原料与水混合，并将其震荡静置存储；

其中在上述步骤二中，植物加工包括以下步骤：

1)人工准备载玻片，并将载玻片中央滴入清水，随后使用镊子将植物表皮撕下，放入载玻片中央；

2)滴加荧光染料，将荧光染料滴在载玻片另一侧，用吸水纸吸引荧光染料，使荧光染料浸润植物表皮；

其中在上述步骤三中，显微成像包括以下步骤：

1)人工将步骤一2)中混合物倒入探针中，通过探针将混合物滴加在植物表皮顶部，并盖上盖玻片；

2)将载玻片放入显微镜中，采用FCS对细胞质结构和细胞核进行探测；

3)记录观测的细胞质结构和细胞核，并通过显微镜拍照，绘制处细胞质结构和细胞核位置图片；

其中在上述步骤四中，细胞分析包括以下步骤：

1)人工在载玻片区域投射激发光，细胞质结构和细胞核激发荧光基团，由时间分辨单光子探测仪记录细胞质结构和细胞核荧光基团的光子发生事件，并计算出荧光相关光谱；

2)对比载玻液浓度，细胞质结构和细胞核结构移动的迁移率，测定细胞质结构和细胞核内动力学，绘制表格，存储对比；

其中在上述步骤五中，荧光相关光谱测试完成后，取下载玻片，用镊子取出植物表皮，清洗载玻片。

根据上述技术方案，所述步骤一2)中荧光基团原料与水混合比例为2∶1。

根据上述技术方案，所述步骤二1)中载玻片使用前需要使用纱布进行擦拭。

根据上述技术方案，所述步骤三1)中盖玻片需要提前清洗。

根据上述技术方案，所述步骤四1)中激发光为紫色激光。

根据上述技术方案，所述步骤五中清洗后擦干存放在阴凉地。

与现有技术相比，本发明所达到的有益效果是：该荧光相关光谱(FCS)在植物细胞核中的应用方法，操作简单，成本低，采用荧光基团原料使植物细胞核发出荧光，并采用电子显微镜绘制荧光相关光谱，方便快捷，有利于观察植物细胞核，描述植物细胞核特征，分析植物细胞核生理生化过程，且该发明工艺简单严谨，能够代替其他较为昂贵的荧光相关光谱技术，效果显著，材料便宜成本低廉，大大节约了成本，有利于用户使用。

附图说明

附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：

图1是本发明的方法流程图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

请参阅图1，本发明提供一种技术方案：荧光相关光谱(FCS)在植物细胞核中的应用方法，包括步骤一，荧光调制；步骤二，植物加工；步骤三，显微成像；步骤四，细胞分析；步骤五，清洗处理；

其中在上述步骤一中，荧光调制包括以下步骤：

1)人工根据植物细胞选择合适的荧光基团原料；

2)将选择的荧光基团原料与水混合，并将其震荡静置存储，荧光基团原料与水混合比例为2∶1；

其中在上述步骤二中，植物加工包括以下步骤：

1)人工准备载玻片，载玻片使用前需要使用纱布进行擦拭，并将载玻片中央滴入清水，随后使用镊子将植物表皮撕下，放入载玻片中央；

2)滴加荧光染料，将荧光染料滴在载玻片另一侧，用吸水纸吸引荧光染料，使荧光染料浸润植物表皮；

其中在上述步骤三中，显微成像包括以下步骤：

1)人工将步骤一2)中混合物倒入探针中，通过探针将混合物滴加在植物表皮顶部，并盖上盖玻片，盖玻片需要提前清洗；

2)将载玻片放入显微镜中，采用FCS对细胞质结构和细胞核进行探测；

3)记录观测的细胞质结构和细胞核，并通过显微镜拍照，绘制处细胞质结构和细胞核位置图片；

其中在上述步骤四中，细胞分析包括以下步骤：

1)人工在载玻片区域投射激发光，激发光为紫色激光，细胞质结构和细胞核激发荧光基团，由时间分辨单光子探测仪记录细胞质结构和细胞核荧光基团的光子发生事件，并计算出荧光相关光谱；

2)对比载玻液浓度，细胞质结构和细胞核结构移动的迁移率，测定细胞质结构和细胞核内动力学，绘制表格，存储对比；

其中在上述步骤五中，荧光相关光谱测试完成后，取下载玻片，用镊子取出植物表皮，清洗载玻片，清洗后擦干存放在阴凉地。

基于上述，本发明的优点在于，该荧光相关光谱(FCS)在植物细胞核中的应用方法，操作简单，成本低，采用荧光基团原料使植物细胞核发出荧光，并采用电子显微镜绘制荧光相关光谱，方便快捷，有利于观察植物细胞核，描述植物细胞核特征，分析植物细胞核生理生化过程。

需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。