一种使虾夷扇贝和栉孔扇贝性腺同步发育的方法及杂交育苗方法

技术领域

本发明属于海洋生物育苗技术领域，具体涉及一种使虾夷扇贝和栉孔扇贝性腺同步发育的方法及杂交育苗方法。

背景技术

杂交育种是培育新品种的一种传统、有效的育种方法，是改良遗传性状、培育优良品种的可靠途径。在贝类中，相关学者陆续开展了扇贝、牡蛎、鲍等养殖品种种内、种间、不同地理群体等的杂交育种试验，所得杂交种在成活率、生长速度和抗逆性等方面显示出了良好的生产性状和一定的杂种优势。

虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis)原产于日本，引入中国后迅速在山东、辽宁等地区进行养殖，是我国重要的养殖贝类之一。经过多年的养殖，虾夷扇贝种质退化严重，大规模死亡现象频发，特别是在夏季高温期，损失更为严重。栉孔扇贝(Chlamys farreri)是我国的土著扇贝种，因其适温范围广，在黄渤海地区得到大面积推广养殖。二者生物学差异显著，杂交后代可供选择的变异幅度就广泛，集两种亲本优良性状的潜力就大，能在较短时间内获得新的优良品种。

研究和利用杂交优势的前提是不同群体性腺同步发育、精卵细胞同步成熟。对大多数贝类来说，影响生殖周期的主要环境因子是水温和饵料，通过设置一定的温度梯度和饵料搭配，即可顺利实现对杂种优势的利用。栉孔扇贝(♀)与虾夷扇贝

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种使虾夷扇贝和栉孔扇贝性腺同步发育的方法及杂交育苗方法，虾夷扇贝和栉孔扇贝亲本性腺同步发育成熟，能显著提高受精率、孵化率，降低受精卵死亡率和畸形率，克服杂交幼虫死亡率高的问题。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种使虾夷扇贝和栉孔扇贝性腺同步发育的方法，包括以下步骤：(1)2月中下旬，分别选择雄性栉孔扇贝和雌性虾夷扇贝在暂养池内暂养3d；

(2)栉孔扇贝在培养时，每天升温0.5℃，升至4℃时恒温暂养5d，而后升至8℃时恒温暂养5天；随后每天升温1℃，升至12℃时恒温暂养5天，而后升至15℃时恒温暂养7～10d，得性腺发育成熟的栉孔扇贝；

(3)虾夷扇贝在培养时，每天升温0.5℃，升至4℃时恒温暂养7d，而后升至5℃时恒温暂养7d，再升温至8℃时恒温暂养7d，最后升至10℃时恒温暂养5～7天，得性腺发育成熟的虾夷扇贝；

步骤(2)和步骤(3)不存在时间上的先后顺序。

优选的，步骤(2)和步骤(3)中，在升温期间，每天倒池1次；后期恒温暂养期间原池换水，每天换水2次，每次换水量为原水体积的1/3～1/2，加水速度维持在10m

优选的，所述栉孔扇贝在暂养池暂养期间、升温期间和后期恒温暂养期间每天投喂6～8次饵料；所述饵料包括硅藻和螺旋藻或海洋红酵母。

优选的，所述硅藻的投喂质量占所述饵料总投喂质量的60％～80％。

优选的，所述虾夷扇贝在暂养池暂养期间和升温至8℃以前每天投喂4～6 次饵料；所述饵料为硅藻。

优选的，当升温至8℃以上后，虾夷扇贝每天投喂6～8次饵料；所述饵料包括硅藻和金藻。

优选的，所述硅藻的投喂质量为所述饵料总投喂质量的60％～80％。

本发明还提供了一种虾夷扇贝和栉孔扇贝的杂交育苗方法，包括以下步骤：1)将利用上述方法培养得到的性腺发育成熟的栉孔扇贝阴干处理 30～60min后放入17℃水中催产，排精结束后将温度降至15℃；

2)将利用上述方法培养得到的性腺发育成熟的虾夷扇贝阴干处理30～60min后放入13℃孵化池中催产，排卵结束后将温度升至15℃；

3)将精液与卵子按照(3～4):1的数量比在孵化池内混合进行授精，在 14.5～15℃的环境中孵化；

步骤1)和步骤2)之间不存在时间上的先后顺序。

优选的，步骤3)所述孵化的孵化密度为30～50个/ml；在孵化期间保持连续充气或每隔30min搅池一遍；每隔1h去除多余的精液和亲贝粪便。

优选的，在步骤3)所述孵化后，还包括幼虫培育和投放附着基；

所述幼虫培育的温度为14.5～15.5℃；

投放附着基后，温度维持在15.5～16.5℃之间。

本发明提供了一种使虾夷扇贝和栉孔扇贝性腺同步发育的方法，虾夷扇贝和栉孔扇贝亲本同时入池暂养，通过调控升温模式，使二者性腺同步发育成熟；虾夷扇贝排卵、栉孔扇贝排精结束后将温度调至同一温度进行受精、孵化；受精卵孵化后控制好幼虫和变态后稚贝培育温度。本发明提供的性腺同步促熟方法，能使群体内、群体间性腺同步发育成熟率在95％以上；能提高受精率、孵化率，降低受精卵死亡率和畸形率。利用性腺同步发育的虾夷扇贝和栉孔扇贝进行杂交育苗，能增强D形幼虫的抗应激能力和发育的同步性，提高杂交幼虫的存活率，克服杂交幼虫死亡率高的问题。

具体实施方式

本发明提供了一种使虾夷扇贝和栉孔扇贝性腺同步发育的方法，包括以下步骤：(1)2月中下旬，分别选择雄性栉孔扇贝和雌性虾夷扇贝在暂养池内暂养3d；

(2)栉孔扇贝在培养时，每天升温0.5℃，升至4℃时恒温暂养5d，而后升至8℃时恒温暂养5天；随后每天升温1℃，升至12℃时恒温暂养5天，而后升至15℃时恒温暂养7～10d，得性腺发育成熟的栉孔扇贝；

(3)虾夷扇贝在培养时，每天升温0.5℃，升至4℃时恒温暂养7d，而后升至5℃时恒温暂养7d，再升温至8℃时恒温暂养7d，最后升至10℃时恒温暂养5～7天，得性腺发育成熟的虾夷扇贝；

步骤(2)和步骤(3)不存在时间上的先后顺序。

本发明在2月中下旬，分别选择雄性栉孔扇贝和雌性虾夷扇贝在暂养池内暂养3d。本发明所述暂养池暂养的温度优选为自然温度，低于4℃。本发明所述暂养池优选位于室内，作为促性腺成熟培养的缓冲。本发明在暂养池暂养期间，栉孔扇贝暂养密度优选为80个/m

本发明栉孔扇贝在培养时，每天升温0.5℃，升至4℃时恒温暂养5d，而后升至8℃时恒温暂养5天；随后每天升温1℃，升至12℃时恒温暂养5 天，而后升至15℃时恒温暂养7～10d，得性腺发育成熟的栉孔扇贝。本发明对所述升温的方法并没有特殊限定，优选在升温期间，每天倒池1次；后期恒温暂养期间原池换水，每天换水2次，每次换水量为原水体积的1/3～1/2，加水速度维持在10m

虾夷扇贝在培养时，本发明每天升温0.5℃，升至4℃时恒温暂养7d，而后升至5℃时恒温暂养7d，再升温至8℃时恒温暂养7d，最后升至10℃时恒温暂养5～7天，得性腺发育成熟的虾夷扇贝。本发明对所述升温的方法并没有特殊限定，优选在升温期间，每天倒池1次；后期恒温暂养期间原池换水，每天换水2次，每次换水量为原水体积的1/3～1/2，加水速度维持在 10m

本发明所述使虾夷扇贝和栉孔扇贝性腺同步发育的方法优选均在暂养池内进行，且在暂养期间，栉孔扇贝优选每天投喂5～9次饵料；所述饵料优选包括硅藻和螺旋藻或海洋红酵母，且所述硅藻的投喂质量优选占所述饵料总投喂质量的60％～80％。本发明针对栉孔扇贝优选的12℃以前每天投喂4～6 次硅藻，每次2×10

本发明还提供了一种虾夷扇贝和栉孔扇贝的杂交育苗方法，包括以下步骤：1)将利用上述方法培养得到的性腺发育成熟的栉孔扇贝阴干处理 30～60min后放入17℃水中催产，排精结束后将温度降至15℃；

2)将利用上述方法培养得到的性腺发育成熟的虾夷扇贝阴干处理 30～60min后放入13℃孵化池中催产，排卵结束后将温度升至15℃；

3)将精液与卵子按照3～4:1的数量比在孵化池内混合进行授精，在 14.5～15℃的环境中孵化；

步骤1)和步骤2)之间不存在时间上的先后顺序。

本发明将利用上述方法培养得到的性腺发育成熟的栉孔扇贝阴干处理 30～60min后放入17℃水中催产，排精结束后将温度降至15℃。本发明所述阴干处理的温度优选为13～19℃，风速优选为≤2.0m/s，湿度≥60％。本发明对降温的方法并没有特殊限定，利用本领域的常规降温方法即可，优选在 20～30min降至所需温度。

本发明将利用上述方法培养得到的性腺发育成熟的虾夷扇贝阴干处理 30～60min后放入13℃孵化池中催产，排卵结束后将温度升至15℃。本发明所述阴干处理的温度优选为13～19℃，风速优选为≤2.0m/s，湿度≥60％。本发明对升温的方法并没有特殊限定，利用本领域的常规升温方法即可，优选在20～30min升至所需温度。

本发明将精液与卵子按照3～4:1的数量比在孵化池内混合进行授精，在 14.5～15℃的环境中孵化。本发明优选将精液泼至含有卵子的孵化池进行授精，每个卵子周围3～4个精子。本发明所述孵化的孵化密度优选为30～50个 /ml，且在孵化时，保持14.5～15℃的温度，既能最大化利用孵化水体，又能保持较高的孵化率。本发明在所述孵化期间优选保持连续充气或每隔30min 用搅耙搅池一遍，每隔1h用纱布在孵化池表面拖一遍，以去除多余的精液和亲贝粪便。

本发明在所述孵化后，优选还包括幼虫培育和投放附着基；幼虫培育温度优选维持在14.5～15.5℃之间；投放附着基后，温度优选维持在15.5～16.5℃之间。本发明所述幼虫的开口饵料优选为金藻，后期混合投喂金藻、硅藻、扁藻等，初期日投喂量2×10

下面结合实施例对本发明提供的一种使虾夷扇贝和栉孔扇贝性腺同步发育的方法及杂交育苗方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

2018年2月22日，栉孔扇贝与虾夷扇贝同时入暂养池暂养，自然水温 2.5℃。

一、升温模式

栉孔扇贝：2月25日开始升温，每天升温0.5℃，2月27日至3月3日维持在4℃；

每天升温0.5℃，3月11日至15日维持在8℃；

每天升温1℃，3月19日至23日维持在12℃；

每天升温1℃，3月26日至4月4日维持在15℃。

虾夷扇贝：2月25日开始升温，每天升温0.5℃，2月27日至3月5日维持在4℃；

每天升温0.5℃，3月9日至15日维持在5℃；

每天升温0.5℃，3月21日至27日维持在8℃；

每天升温0.5℃，3月31日至4月4日维持在10℃。

二、饵料搭配

栉孔扇贝：每天投喂2次螺旋藻(12℃以前每次投喂2g/m

虾夷扇贝：8℃以前仅投喂硅藻(每天投喂5次，每次投喂2×10

三、催产、孵化

4月5日，虾夷扇贝、栉孔扇贝同日排卵、排精。雄性栉孔扇贝全部排精，成熟率100％；雌雄虾夷扇贝98.5％排卵，即成熟率达到98.5％。精、卵质量高、营养物质积累多。

受精及孵化温度均为15℃。受精率为99.7％、孵化率为97.51％。

四、幼体培育

4月7日16:00进行选优。幼体培育温度维持在14.5～15.5℃之间，投喂金藻。初始日投喂量2×10

4月25日投放附着基，5月2日全部附着完毕。

投放附着基后水温维持在15.5～16.5℃之间，投喂金藻和硅藻，二者搭配比例1:1，日投喂量逐渐提升至12×10

5月12日出池，生长至500～600μm时移至海上进行暂养。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。