公开/公告号CN113072610A
专利类型发明专利
公开/公告日2021-07-06
原文格式PDF
申请/专利权人 中央民族大学;
申请/专利号CN202110344551.X
申请日2021-03-30
分类号C07J63/00(20060101);A61P9/00(20060101);A61P19/02(20060101);A61P27/02(20060101);A61P39/06(20060101);
代理机构11649 北京贵都专利代理事务所(普通合伙);
代理人李新锋
地址 100081 北京市海淀区中关村南大街27号
入库时间 2023-06-19 11:44:10
技术领域
本发明涉及刺老苞研究技术领域,更具体的说是涉及一种新骨架单体化合物刺老苞皂苷A及其体外抗氧化作用。
背景技术
刺老苞Aralia echinocaulis Hand.-Mazz.为五加科楤木属植物，在我国分布广泛，生于森林中，垂直分布海拔可达2600m。药材块片状或槽状，气微香，嚼之带粘液性，味辛，性平。归肝、肾经，功能滋阴健肾，祛风湿，壮筋骨，散瘀血，消肿毒，可用于风湿痹痛、跌打损伤、骨折等治疗。
现阶段刺老苞的研究，多集中在药材鉴定、人工栽培与药理作用等方面，而关于其药效物质基础的研究较为薄弱。目前从刺老苞中分离鉴定的化合物有皂苷类10个、挥发油95个、有机酸类1个及甾醇类1个，此外，刺老苞还含有丰富的糖类及微量元素。刺老苞根皮中总多糖、总黄酮的含量分别为7.33％及0.92％，钙、镁、铯、镓、铜、锌等无机元素含量较高，尤其是铜、钙、铯元素的含量高过同类中草药10多倍。刺老苞根皮能通过增强细胞活力、提高超氧化物歧化酶(SOD)活性及细胞膜流动性，降低活性自由氧(ROS)及脂质过氧化物(LPO)的含量，从而改善H
综上所述，现有技术存在以下缺陷：
缺陷一：现阶段刺老苞的研究，多集中在药材鉴定、人工栽培与药理作用等方面，而关于其药效物质基础的研究较为薄弱。目前从刺老苞中分离鉴定的化合物有皂苷类10个、挥发油95个、有机酸类1个及甾醇类1个。本专利从刺老苞中分离出一种新骨架单体化合物，即刺老苞皂苷A。
缺陷二：现阶段刺老苞的上述新骨架单体化合物的体外抗氧化作用尚无报道。本专利对刺老苞皂苷A体外DPPH自由基的清除能力、·OH诱导DNA氧化损伤的保护作用以及H
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种新骨架单体化合物刺老苞皂苷A及其体外抗氧化作用，即从刺老苞中首次分离出刺老苞皂苷A，即刺老苞皂苷A体外DPPH自由基的清除能力、·OH诱导DNA氧化损伤的保护作用以及H
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
刺老苞根皮2.0kg以70％乙醇加热回流提取3次，每次加入7L乙醇加热2h，提取物旋转蒸发为400mL浸膏，取200mL浸膏以10％乙醇稀释为2.5L溶液过MCI-GEL大孔树脂，乙醇-水按照10％、30％、50％、70％、90％乙醇梯度洗脱，收集各洗脱部分，回收溶剂，低温真空干燥为粉末，得到9份样品，分别为10％乙醇Fr.1-4、10％乙醇Fr.5-9、30％乙醇Fr.1-3、30％-50％乙醇Fr.3-4、50％乙醇Fr.1、50％乙醇Fr.2-3、70％乙醇Fr.1、70％乙醇Fr.2-4、90％乙醇Fr.1-3，通过薄层色谱检测；
取50％乙醇Fr.1部位13.00g，甲醇溶解，用30g硅胶进行拌样，干法装柱，柱体积4L，以CH
所述化合物V为刺老苞皂苷A。
所述水中含0.01％甲酸。
所述刺老苞皂苷A对DPPH自由基有一定的清除能力。
所述刺老苞皂苷A对·OH诱导DNA氧化损伤有保护作用。
所述刺老苞皂苷A对H2O2诱导DNA氧化损伤有保护作用。
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明从药用植物刺老苞中首次分离制备出本种植物未报道的刺老苞皂苷A，并进行了刺老苞皂苷A体外抗氧化作用的研究，为今后开展地梢瓜相关通过抗氧化或淬灭自由基功能治疗相关疾病(心血管疾病、关节炎、老年黄斑变性等)的治病作用提供了可靠的实验数据支撑与理论依据。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
一、刺老苞皂苷A的分离鉴定方法：
(1)提取：刺老苞根皮2.0kg以70％乙醇加热回流提取3次，每次加入7L乙醇加热2h，提取物旋转蒸发为400mL浸膏，取200mL浸膏以10％乙醇稀释为2.5L溶液过MCI-GEL大孔树脂，乙醇-水(10％、30％、50％、70％、90％乙醇梯度)梯度洗脱，收集各洗脱部分，回收溶剂，低温真空干燥为粉末。共得到9份样品，分别为10％乙醇Fr.1-4、10％乙醇Fr.5-9、30％乙醇Fr.1-3、30％-50％乙醇Fr.3-4、50％乙醇Fr.1、50％乙醇Fr.2-3、70％乙醇Fr.1、70％乙醇Fr.2-4、90％乙醇Fr.1-3，通过薄层色谱检测。
取50％乙醇Fr.1部位13.00g，甲醇溶解，用30g硅胶(100～200目)进行拌样，干法装柱，柱体积4L。以CH
利用MCI-GEL大孔树脂、硅胶柱及色谱制备等方法，从刺老苞提取物中分离鉴定得到了一种新骨架单体化合物(化合物V)，通过对化合物的MS、
(2)鉴定：刺老苞皂苷A(echinocaulisaponin A，化合物V)
化合物V为白色粉末，硫酸乙醇显紫色。TOF-MS：m/z 695.4015[M+COOH]ˉ，分子式为C
表1 刺老苞皂苷A的13C-NMR及1H-NMR数据
二、体外抗氧化作用的研究：
刺老苞皂苷A的体外抗氧化活性评价
1、实验材料及仪器：
样品：刺老苞皂苷A
芦丁标准品(CAS#160-16-8，HPLC＞98％)、DPPH、氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝、EDTA二钠、3％过氧化氢：北京生化试剂公司；无水乙醇、六水合硫酸亚铁铵：北京市通广精细化工公司；维生素C：日本富士和光纯叶株式会；DNA提取试剂盒(GD3121-1250preps)：BIOMIGA；酶标仪FlexStation 3：Molecular Devices。
2、实验方法与结果：
2.1、对DPPH自由基的清除能力
采用DPPH自由基清除模型，评价样品体外抗氧化能力。取96孔板，样品孔中加入不同浓度的样品溶液100μL，然后加入100μL的2×10-7mol/mL的DPPH溶液；样参孔中分别加入不同浓度的样品溶液100μL、无水乙醇100μL；对照孔中加入DPPH溶液100μL、蒸馏水100μL，混匀，室温避光静置反应30min，于517nm处测吸光值，以Vc为对照，用半数抑制率IC50表示抗氧化能力。
采用DPPH自由基清除模型，评价刺老苞皂苷A的抗氧化能力。其中，DPPH自由基的清除率的计算公式如下：
DPPH自由基清除率＝[1-(A
其中，A
结果表明(表2)样品刺老苞皂苷A对DPPH自由基均有不同程度清除能力，清除率随溶液浓度的增大而增强。刺老苞皂苷A的清除率范围为35.62％～92.16％，IC50为0.1985mg/mL。
表2 刺老苞皂苷A对DPPH自由基的清除能力
2.2、对·OH诱导DNA氧化损伤的保护作用
在96孔板中依次加入1μL 100ng/μL DNA、10μL 0.1mol/L(NH4)2Fe(SO4)2溶液、10μL 0.17mol/L的EDTA二钠溶液、10μL 0.015％H2O2溶液、10μL 10mg/mL Vc溶液、10μL不同浓度的样品溶液、40μL TE缓冲溶液，最后加入0.5μL Goldview染料，轻轻摇匀静置反应5min，以维生素C为对照，测其荧光强度(荧光测定条件为：在激发波长486nm下扫描500～695nm范围内的荧光光强度)。
结果表明(表3)刺老苞皂苷A对·OH诱导DNA氧化损伤均有不同程度保护作用，作用效果随溶液浓度的增大而增强。刺老苞皂苷A的荧光强度范围为0.358～0.496。
表3 刺老苞皂苷A、刺老苞皂苷C对·OH诱导DNA氧化损伤的保护作用。
2.3、对H2O2诱导DNA氧化损伤的保护作用
96孔板依次加入1μL 100ng/μL DNA溶液、10μL 3％H2O2溶液，5μL样品溶液，95μLTE缓冲溶液以及0.5μL Goldview溶液，轻轻摇匀后静置反应10min，将盛样品比色皿放在紫外灯下照射10min，以维生素C为对照，测其荧光强度(荧光测定条件为：在激发波长486nm下扫描500～695nm范围内的荧光光强度)。
结果表明(表4)样品刺老苞皂苷A对H2O2诱导DNA氧化损伤均有不同程度保护作用，作用效果随溶液浓度的增大而增强。刺老苞皂苷A的荧光强度范围为0.335～0.465。
表4刺老苞皂苷A对H2O2诱导DNA氧化损伤的保护作用。
本发明从药用植物刺老苞中首次分离制备出一种新骨架单体化合物，并进行了单体化合物体外抗氧化作用的研究，为今后开展刺老苞相关通过抗氧化或淬灭自由基功能治疗相关疾病(心血管疾病、关节炎、老年黄斑变性等)的治病作用提供了可靠的实验数据支撑与理论依据。
说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。对于实施例公开的装置而言，由于其与实施例公开的方法相对应，所以描述的比较简单，相关之处参见方法部分说明即可。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
机译： 抑制janus酪氨酸激酶3的功能和/或增殖的体外方法，辅助鉴定可用作治疗性免疫抑制剂的物质的体外试验方法，辅助鉴定新的免疫抑制剂药物的体外方法，在体外抑制表达janus酪氨酸激酶3的细胞的功能和/或增殖，使用至少一种化合物，分离或纯化的化合物和药物组合物
机译： 一种从人参中制备新的糖脂蛋白的人参皂苷的方法以及通过该方法制备的新的糖脂蛋白的人参皂苷
机译： 包含光学特性的单体化合物的组合物，使用所述化合物的方法，一种单体化合物，一种包含所述单体化合物的聚合物及其用途
