一种经典霍奇金淋巴瘤的外周血TCR标志物及其检测试剂盒和应用

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种经典霍奇金淋巴瘤的外周血TCR标志物及其检测试剂盒和应用。

背景技术

经典霍奇金淋巴瘤(Hodgkin's Lymphoma，HL)，又称霍奇金病是淋巴瘤的一种独特类型，为青年人中最常见的恶性肿瘤之一。流行病学显示，在欧美国家，霍奇金淋巴瘤约占15％～20％，而在我国霍奇金淋巴瘤的平均发病率较低，平均每年每100万人群中有6人发病，即全国大约有8000人被诊断为霍奇金淋巴瘤。在所有淋巴瘤中，霍奇金淋巴瘤仅占到10％左右，但儿童群体中霍奇金淋巴瘤发病率高，占所有恶性淋巴瘤的33％-55％，男性患病率略高于女性(1.31～1.4:1)。

霍奇金淋巴瘤的发病原因至今不是很清楚。一般认为是感染、免疫功能失调、遗传、职业暴露和生活方式等因素相关，在多种因素的作用下，机体内的免疫细胞发生突变，引起了细胞内癌症基因的激活和抑制基因的失活，淋巴细胞恶性增殖，最终形成淋巴瘤。

霍奇金淋巴瘤是一种治愈率较高的肿瘤。在国际上，初治霍奇金淋巴瘤的治愈率能达到75％～85％。但国内霍奇金淋巴瘤的整体治愈率目前还达不到75％，原因有好几个。首先是与诊断的准确性有关。经典霍奇金淋巴瘤分为4种组织学类型：淋巴细胞为主型、结节硬化型、混合细胞型和淋巴细胞耗竭型。近年来WHO分型中增加了一种结节性淋巴细胞为主型。我国最常见为混合细胞型。组织学亚型是决定患者临床表现、预后和治疗的主要因素。2019淋巴瘤白皮书数据显示，参与调研的患者中，约43％患者曾有过误诊经历，51％的患者辗转多家医院后方得以确诊。患者从初次诊断到最终确定所患亚型，平均耗费时长为2.5个月，而一些亚型患者确诊所需等待时间更为漫长。同时，调研表明，大部分患者为了确诊，需奔赴北上广等医疗资源集中的大城市；其次是患者的就诊意识较低。很多患者前来就诊时就已经是晚期，治疗效果肯定不如早期。所以早诊断、早治疗，是提高淋巴瘤治疗效果，改善患者预后，节约社会资源的迫切需求。

经典霍奇金淋巴瘤的常用检测诊断方法有：

1、血常规：

贫血多见于晚期患者，为正色素、正细胞性贫血。偶见溶血贫血，2％～10％患者Coombs试验阳性。少数病例可出现中性粒细胞增多，嗜酸性粒细胞增多。外周血淋巴细胞减少(<1.0×10

2、影像学检查

a)X线检查可以观察肺门、纵膈淋巴结的肿大，同时观察肺门内是否被肿瘤侵犯。前上纵膈及肺门淋巴结明显肿大时，应考虑淋巴瘤的可能。

b)CT检查仍作为淋巴瘤分期、再分期、疗效评价和随访的最为常用的影像学方法，于无碘对比剂禁忌证的患者，应尽可能采用增强CT扫描。但需要注意的是，CT有明显的缺点，不能发现小病灶，尤其是实质脏器内或者边缘的小病灶；CT仅能测定肿瘤的大小，既不能可靠地区分正常的淋巴细胞结合被肿瘤细胞侵润的淋巴结，也不能判断残留病灶是纤维坏死瘢痕组织还是始终有活性的瘤细胞。

c)B超也是分期常用的手段，对于浅表淋巴结的发现及随诊十分重要，根据淋巴结结构有无破坏和血流情况可协助判断肿大淋巴结的良恶性。能够发现直径大于2cm的淋巴结，对于协助发现肝脾肿大淋巴结有重要意义。

d)MRI检查是针对于中枢神经系统、骨髓和肌肉部位的首选检查手段；尤其是对于不宜行增强CT扫描，或者作为CT发现可以病变后的进一步检查。

e)正电子发射计算机体层现(PET/CT)随着影像技术的不断发展，18F-FDG PET/CT以其灵敏度高、特异性强、准确性好的优点越来越广泛用于恶性淋巴瘤的诊疗。目前首选PET/CT用于霍奇金淋巴患者治疗前分期、化疗前后疗效评估。

3、病理检查

a)组织活检是最可靠的诊断依据，切取病变部位的淋巴结进行病理检查，找到典型镜影细胞(R-S细胞)诊断的关键，并以此作为亚型的依据。

b)细胞学检查对确定霍奇金淋巴亚型有一定的困难其主要是辅助分期，治疗后随访有无复发。

c)骨髓穿刺可以判断骨髓的状态和功能。当肿瘤侵犯骨髓时，在骨髓组织中可以找到典型的RS细胞。

d)其他检查免疫组织化学、染色体分析和原位杂交等新技术对判断鉴别霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤，判断恶性淋巴瘤和反应性增殖、恶性淋巴瘤和白血病等起到重要辅助作用。如果霍奇金淋巴瘤存在细胞免疫缺陷，CD15和CD30抗原识别RS细胞的重要免疫标志，抗原阳性提示肿瘤的可能。

综上所述，血液检测灵敏度不够，往往不能发现早期患者；而骨髓穿刺和活检，需要穿刺活检，取样困难，不能作为实时监测手段，对患者身体也会造成损伤。血液和骨髓穿刺往往需结合在一起，不能通过检测一项而判断疾病，这也增加了患者负担。影像学检测也都有各自优缺点，其检测都需要肿瘤达到一定体积大小才能检测到，存在滞后性，因辐射等原因不能作为实时监控的手段。因此，亟需一种能更便捷灵敏，且可以追踪霍奇金淋巴瘤发生、发展状况的筛查、检验方法。

发明内容

针对现有技术中的上述不足，本发明提供一种经典霍奇金淋巴瘤的外周血TCR标志物及其检测试剂盒和应用，能准确快速的判断待测样本中是否有较高经典霍奇金淋巴瘤风险患者。

为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种经典霍奇金淋巴瘤的外周血TCR标志物，该标志物包括序列为SEQ ID NO.1～100所示的蛋白中的至少一种，具体序列见表1。

表1标志物序列

进一步地，标志物的蛋白序列为SEQ ID NO.1～100所示的序列经取代、缺失和/或替换一个或多个碱基后，能表达相同功能的蛋白。

进一步地，标志物为外周血TCR CDR3序列。

上述标志物在制备治疗经典霍奇金淋巴瘤的制剂中的应用。

进一步地，制剂中包括含有该标志物的T细胞受体，或能表达产生该标志物的T细胞受体的质粒、病毒载体或核酸片段。

一种用于经典霍奇金淋巴瘤检测的试剂盒，包括能与上述标志物发生特异性结合的抗体。

一种制剂，包括能与上述标志物发生特异性结合的抗体；所述制剂可用于对经典霍奇金淋巴瘤进行诊断、预测、检测或筛查。

一种检测经典霍奇金淋巴瘤的蛋白质芯片，该蛋白质芯片包括基片和点样在基片上特异性抗体，该特异性抗体为能与上述标志物发生特异性结合的抗体。

本发明的原理为：人体内的B淋巴细胞和T淋巴细胞是获得性免疫系统中重要的两类细胞。B细胞通过细胞表面的B细胞受体(BCR)识别抗原，后期BCR在B细胞分化成浆细胞时，表达成抗体，分泌到细胞外。T细胞通过细胞表面的T细胞受体(TCR)识别抗原。BCR和TCR的多样性是建立获得性免疫系统的基础。BCR多样性的理论值是10

在各种疾病中，随着不同的抗原刺激，BCR和TCR的多样性或者表达水平都会发生改变。因此，利用BCR或者TCR高通量测序结果可以追踪疾病的发生、发展。人体内细胞中，衰老蛋白质降解后，其片段会被运输到细胞表面，通过组织相容性抗原II(MCHII)呈递给免疫系统中的T细胞。正常细胞呈递的抗原片段，由于免疫耐受的关系，不会引起免疫反应。一旦当正常细胞出现癌变后，突变的基因表达的异常蛋白，其片段被呈递到细胞表面后，就会引起人体免疫系统产生针对性的免疫反应。因此，分析BCR或TCR的变化，能够检测出肿瘤的发生和发展。

本发明的有益效果为：

1、本发明中，首先利用1300个非经典霍奇金淋巴瘤的对照组样本、和70个经典霍奇金淋巴瘤病人的TCR高通量测序数据建立了人工智能分析模型，通过和这些经典霍奇金淋巴瘤特异性TCR序列对比，可以清楚的判断待测样本中是否有较高经典霍奇金淋巴瘤风险者。

2、通过高通量测序分析TCR变化可以发现很早期的经典霍奇金淋巴瘤，利用经典霍奇金淋巴瘤特有的TCR CDR3序列分析人的免疫系统中的T细胞对经典霍奇金淋巴瘤的反应，是一种新型的检测方法。

3、本发明通过采用高通量测序技术同时比较数量巨大的特异性TCR序列，比起单独检测一种或几种标记物，具有更高的特异性和准确性。

4、本发明中使用的高通量测序仪器成本低于大型影像学设备，且可向第三方外包，此外，采样、处理的人力成本低于同时检测多种标记物，也低于大量细胞学检测，因此，本发明大大降低了检测成本。

5、本发明只需要采取少量外周血，采样简便、安全。

6、本发明中所述TCR CDR3序列，可用于经典霍奇金淋巴瘤的免疫治疗。

附图说明

图1为本发明中利用基于免疫大数据分析系统发现的经典霍奇金淋巴瘤特征性TCR序列；其中，横坐标代表某一特定氨基酸组合的CDR3序列被加入对照序列集合或经典霍奇金淋巴瘤特征序列集合的先后顺序,纵坐标代表该序列在某一样本中重复出现次数C

图2为本发明中利用经典霍奇金淋巴瘤特征特征性指数对比分析经典霍奇金淋巴瘤和其他疾病；健康人、非肿瘤病人、非经典霍奇金淋巴瘤肿瘤患者的经典霍奇金淋巴瘤特征性指数均与经典霍奇金淋巴瘤患者具有显著差异，证明了经典霍奇金淋巴瘤特征序列集的特异性，据此可以判断未知受试者是否罹患经典霍奇金淋巴瘤。

具体实施方式

下面对本发明的具体实施方式进行描述，以便于本技术领域的技术人员理解本发明，但应该清楚，本发明不限于具体实施方式的范围，对本技术领域的普通技术人员来讲，只要各种变化在所附的权利要求限定和确定的本发明的精神和范围内，这些变化是显而易见的，一切利用本发明构思的发明创造均在保护之列。

实施例1通过免疫图谱分析，获得经典霍奇金淋巴瘤TCR标志物CDR3序列集

1、采样及免疫图谱分析(方法参考申请号为201910300069.9的专利)

采集1301名对照组(包括健康人和非肿瘤疾病病人，1300人用于建立模型，1个健康人用于验证)、71名经典霍奇金淋巴瘤患者(70人用于建立模型，1人用于验证)及1名未知健康状况受试者的外周血(每人10mL)，通过高通量测序得到受试者和对照组的TCR的抗原决定簇3(CDR3)氨基酸序列，保证每个样本的功能性TCR的CDR3序列总数综合不低于25000；

2、对每个功能性TCR的CDR3序列总数综合高于30000的样本的序列进行随机不放回抽样，使该样本的CDR3序列数量总和为30000。至此所有样本包含的功能性TCR的CDR3序列总数为25000-30000。对任一特定CDR3序列X，在单样本测序结果中重复出现次数计为C

3、通过分析TCR CDR3数据，确定经典霍奇金淋巴瘤TCR标志物CDR3序列：

a)将1300名用于建立模型的对照组样本的所有CDR3序列归总去重，设为对照序列集；

b)将70名用于建立模型的经典霍奇金淋巴瘤样本的所有CDR3序列归总去重，再去除所有与对照序列集中包含序列重复的序列，设为经典霍奇金淋巴瘤特征序列集。作图如附图1A所示，其中横坐标代表某一特定氨基酸组合的CDR3序列被加入对照序列集合或经典霍奇金淋巴瘤特征序列集合的先后顺序，纵坐标代表该序列在某一样本中重复出现次数C

c)按照同样作图方法，将1名健康人、1名经典霍奇金淋巴瘤患者和1名健康状况未知受试者的免疫图谱，参照对照序列集合和经典霍奇金淋巴瘤特征序列集合进行作图，见附图1B-D。从图中可见，经典霍奇金淋巴瘤患者的免疫图谱中，含有较多种类且较高重复出现次数的经典霍奇金淋巴瘤特征序列(图1B)；健康人的免疫图谱中，只有极少量经典霍奇金淋巴瘤特征序列(图1C)；而未知健康状况受试者，有高于健康人的经典霍奇金淋巴瘤特征序列，说明此人有较高风险罹患经典霍奇金淋巴瘤(图1D)。

d)将经典霍奇金淋巴瘤特征序列集中，将所有出现在两个及以上参与建模经典霍奇金淋巴瘤样本里的CDR3序列，按“所有参与建模经典霍奇金淋巴瘤样本里该序列单样本中重复出现次数CX的总和×包含该序列的参与建模经典霍奇金淋巴瘤样本数”从高到低排序，排名前100者即为经典霍奇金淋巴瘤TCR标志物CDR3序列，具体序列如SEQ ID NO.1～100所示。

实施例2验证经典霍奇金淋巴瘤TCR标志物CDR3序列集的特异性

1、采样及免疫图谱分析(方法参考申请号为201910300069.9的专利)

采集522名非经典霍奇金淋巴瘤的肿瘤患者、5名未知健康状况受试者的外周血(每人10mL)，通过高通量测序得到受试者和对照组的TCR的抗原决定簇3(CDR3)氨基酸序列，保证每个样本的功能性TCR的CDR3序列总数综合不低于25000；对每个功能性TCR的CDR3序列总数综合高于30000的样本的序列进行随机不放回抽样，使该样本的CDR3序列数量总和为30000。至此所有样本包含的功能性TCR的CDR3序列总数为25000-30000。

2、从实施例1的对照组中随机挑选100名健康人及43名非肿瘤疾病病人。

3、根据来自实施例1的100名健康人、43名非肿瘤疾病病人、67名经典霍奇金淋巴瘤患者，以及实施例2新获取的522名非经典霍奇金淋巴瘤肿瘤患者、5名未知健康状况受试者的免疫图谱，分析其经典霍奇金淋巴瘤特征性指数。

其中经典霍奇金淋巴瘤特征性指数定义为：某个样本中，属于经典霍奇金淋巴瘤特征序列集的所有CDR3序列在该样本内重复出现次数C

表2不同样本组的经典霍奇金淋巴瘤特征性指数

4、分析各组的经典霍奇金淋巴瘤特征指数(表3)，5位未知健康状况受试者(检测样本)的经典霍奇金淋巴瘤特征指数显著高于“其它肿瘤”组的平均值+2×SD(134.0+2×476.2＝1086.4)，此5人具有较高风险罹患经典霍奇金淋巴瘤。与临床体检结果对照后，这5人确为早期经典霍奇金淋巴瘤患者。此实施例证明了利用经典霍奇金淋巴瘤特征序列集及经典霍奇金淋巴瘤特征性指数，预测受试者罹患经典霍奇金淋巴瘤风险的可行性。

表3经典霍奇金淋巴瘤特征性指数分析

综上所述，本发明所述经典霍奇金淋巴瘤TCR标志物CDR3序列，确实具有显著的经典霍奇金淋巴瘤特异性，不仅可以用于经典霍奇金淋巴瘤预测受试者罹患经典霍奇金淋巴瘤风险，未来还可用于经典霍奇金淋巴瘤的生物免疫治疗。

序列表

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<210> 52

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 52

Ala Ser Ser Arg Glu Gly Ser Gly Ser Asn Gly Glu Leu Phe

1 5 10

<210> 53

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 53

Ala Ser Arg Pro Ala Asp Trp Ser Pro Ser Thr Asp Thr Gln Tyr

1 5 10 15

<210> 54

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 54

Ala Ser Ser Val Gly Arg Thr Ser Gly Leu Gly Arg Glu Thr Gln Tyr

1 5 10 15

<210> 55

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 55

Ala Thr Ser Arg Asp Ser Arg Arg Thr Gly Ser Ser Tyr Glu Gln Tyr

1 5 10 15

<210> 56

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 56

Ala Ser Ser Tyr Glu Thr Val Ser Val Ala Asn Thr Gly Glu Leu Phe

1 5 10 15

<210> 57

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 57

Ala Ser Arg Thr Phe Ser Arg Asn Glu Gln Phe

1 5 10

<210> 58

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 58

Ala Ser Ser Trp Pro Ala Gln Gly Tyr Glu Gln Tyr

1 5 10

<210> 59

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 59

Ala Ser Ala Arg Ser Leu Ser Thr Glu Ala Phe

1 5 10

<210> 60

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 60

Ala Ser Thr Gly Leu Ala Gly Gly Arg Ala Pro Tyr Glu Gln Tyr

1 5 10 15

<210> 61

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 61

Ala Ser Thr Val Thr Gly Glu Arg Arg Gln Phe

1 5 10

<210> 62

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 62

Ala Thr Ser Arg Asp Leu Ala Gly Arg Gly Glu Asn Tyr Gly Tyr Thr

1 5 10 15

<210> 63

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 63

Pro Ala Val Thr Arg Asp Arg Glu Asp Thr Ser Ser Thr

1 5 10

<210> 64

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 64

Ala Ser Thr Pro Ile Gly Val Glu Glu Glu Thr Gln Tyr

1 5 10

<210> 65

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 65

Ser Gly Leu Pro Tyr Ser Ala Asn Glu Gln Phe

1 5 10

<210> 66

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 66

Ala Ser Ser Met Ser Gly Phe Thr Tyr Asn Glu Gln Phe

1 5 10

<210> 67

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 67

Ala Ser Ser Leu Thr Ala Gly Gly Cys Glu Gln Phe

1 5 10

<210> 68

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 68

Ala Ser Ser Ile Asp Arg Asp Ser Tyr Gln Pro Gln His

1 5 10

<210> 69

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 69

Ala Trp Ser Val Val Pro Glu Ile Thr Glu Ala Phe

1 5 10

<210> 70

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 70

Ala Ser Ser Pro Leu Thr Tyr Arg Asp Thr Gln Tyr

1 5 10

<210> 71

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 71

Ala Ser Ser Pro Pro Arg Thr Gly Gln Gly Tyr Tyr Glu Gln Tyr

1 5 10 15

<210> 72

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 72

Ala Thr Ser Tyr Asp Gln Glu Thr Gln Tyr

1 5 10

<210> 73

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 73

Ala Ile Ser Gly Ser Asp Pro Glu Asn Glu Gln Phe

1 5 10

<210> 74

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 74

Ser Ala Lys Asn Thr Tyr Tyr Glu Gln Tyr

1 5 10

<210> 75

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 75

Ala Ser Ser Thr Thr Thr Gly Thr Thr Asn Glu Lys Leu Phe

1 5 10

<210> 76

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 76

Ala Ser Asn Gln Gly Phe Gly Gly Ser Pro Leu His

1 5 10

<210> 77

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 77

Ala Ser Ser Val Ala Leu Ser Val Thr Asp Thr Gln Tyr

1 5 10

<210> 78

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 78

Ala Ser Ser Pro Ile Val Asn Arg Val Glu Thr Gln Tyr

1 5 10

<210> 79

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 79

Ala Ser Ser Asp Arg Met Val Ala Gly Asp Tyr Glu Gln Tyr

1 5 10

<210> 80

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 80

Ala Ser Lys Arg Trp Asn Gln Pro Gln His

1 5 10

<210> 81

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 81

Ala Ser Ser Arg Val Val Ser Glu Gln Phe

1 5 10

<210> 82

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 82

Ala Ser Met Gly Gly Gly Arg Arg Thr Asp Thr Gln Tyr

1 5 10

<210> 83

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 83

Ala Ser Ser Gly Thr Gly Gly Thr Arg Asn Gln Pro Gln His

1 5 10

<210> 84

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 84

Ala Ser Ser Ser Arg Met Gly Gln Gly Arg Asn Asn Tyr Gly Tyr Thr

1 5 10 15

<210> 85

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 85

Ala Ser Ser Ala Ala Gly Glu Gly Asn Tyr Gly Tyr Thr

1 5 10

<210> 86

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 86

Ala Ser Thr Asn Gly Val Asn Trp Asn Thr Glu Ala Phe

1 5 10

<210> 87

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 87

Ala Arg Gly Val Glu Asn Thr Asp Thr Gln Tyr

1 5 10

<210> 88

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 88

Ala Ser Thr Thr Pro Arg Gly Thr Gly Glu Leu Phe

1 5 10

<210> 89

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 89

Ala Ser Ser Pro Gln Val Gln Thr Arg Tyr Gly Thr Glu Ala Phe

1 5 10 15

<210> 90

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 90

Ala Ser Ser Val Gly Gln Ser Ile Gln Tyr

1 5 10

<210> 91

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 91

Ala Ser Ser Leu His Arg Met Asn Glu Ala Phe

1 5 10

<210> 92

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 92

Ala Ser Arg Gly Gly Arg Val Met Glu Gly Tyr Thr

1 5 10

<210> 93

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 93

Ala Ser Ser Ser Gly Tyr Arg Glu Gly His Glu Gln Tyr

1 5 10

<210> 94

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 94

Ala Ser Ser Ser Leu Arg Asp Val Asn Ser Asn Gln Pro Gln His

1 5 10 15

<210> 95

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 95

Ala Thr Ser Arg Glu Gly Gly Ile Glu Thr Gln Tyr

1 5 10

<210> 96

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 96

Ala Ser Ser Arg Met Thr Gly Gly Pro Tyr Glu Gln Tyr

1 5 10

<210> 97

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 97

Ala Ser Ser Pro Ser His Val Val Ser Ser Pro Leu His

1 5 10

<210> 98

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 98

Ala Ser Ser Ile Glu Gly Thr Ser Gly Thr Glu Thr Gln Tyr

1 5 10

<210> 99

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 99

Ala Ser Ser Pro Arg Gly Gly Ala Arg Arg Glu Thr Gln Tyr

1 5 10

<210> 100

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 100

Ala Ser Ser Tyr Trp Ala Gly Lys Leu Tyr Gly Tyr Thr

1 5 10