从石榴皮中提取安石榴苷的方法

技术领域

本发明涉及植物多酚的提取方法，尤其涉及从石榴皮中提取安石榴苷的方法，属于安石榴苷的提取领域。

背景技术

石榴皮，是石榴的主要加工副产品。其中，安石榴苷是石榴皮多酚的主要成分，具有羟基化程度高、安全性无毒的特点，具有很高的开发价值和健康功能应用价值。据报道，安石榴苷具有抗氧化、抗癌、抗菌、抗病毒、抗炎等多种药理学功效。

迄今为止，目前，安石榴苷的提取技术主要包括溶剂热回流、浸泡和超声提取法等，提取溶剂大多为有机溶剂，也有少量水提的报道，采用最多的是有机溶剂和水的混合溶剂。其中，公开号为CN103467534A的中国专利公开了一种以干石榴皮为原料回流提取石榴皮安石榴苷的方法，该方法存在耗时长的缺点；公开号为CN104327131A的中国专利公开了一种高压提取石榴皮安石榴苷的方法，该方法主要存在成本高的问题；公开号为CN101747388A的中国专利公开了一种同时从石榴皮提取安石榴苷和鞣花酸的方法，该方法存在的主要缺点是：操作繁琐，使用有机溶剂大；公开号为CN201610740838A的中国专利公开了一种石榴皮安石榴苷的乙醇浸提方法，该方法的主要缺点是有机溶剂使用量大。公开号为CN101955500A的中国专利公开了一种石榴皮安石榴苷的乙醇超声提取的方法，该方法存在的主要缺点是：能耗高、安石榴苷得率低。

综上可见，目前，石榴皮安石榴苷已有的提取技术具有溶剂残留、成本高、安石榴苷不稳定、安石榴苷得低，工业化困难等缺点，有待改进。

发明内容

本发明的主要目的是提供一种从石榴皮中提取安石榴苷的方法，该方法操作简便、提取时间短、成本低、污染小，安石榴苷稳定且得率高。

本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：

一种从石榴皮中提取安石榴苷的方法，包括：(1)制备石榴皮浆；(2)将石榴皮浆与水混合进行闪式提取，将提取液离心，取上清液；(3)去除上清液中的多糖，冷冻干燥，即得。

作为本发明一种优选的具体实施方案，所述石榴皮浆的制备包括：将新鲜石榴皮与水混合后打浆；优选的，按照g：mL计，石榴皮与水的比例是(1-3):1，最优选为1.5:1。

其中，作为本发明一种优选的具体实施方案，采用闪式提取的条件包括：按照g：mL计，石榴皮浆与水的比例优为1：(2-12)，优选为1：(4-6)，最优选为1：4；提取转速为2000-10000rpm，优选为7000-9000rpm，最优选为8000rpm；提取时间为60-300s，优选为60-180s，最优选为120s。

其中，作为本发明一种优选的具体实施方案，采用闪式提取的条件还包括：间隔30s提取1次。

其中，作为本发明一种优选的具体实施方案，步骤(3)中去除上清液中多糖的方法包括：将上清液浓缩，加入3-4倍体积0-90％乙醇，沉淀；离心，过滤，收集上清液；优选的，采用0-90％的乙醇水溶液缓慢加入到石榴皮浓缩液中，低温静置8-16小时进行沉淀，离心，收集上清液。

本发明综合考虑安石榴苷的稳定性和得率，以鲜石榴皮为研究对象，采用闪式提取法提取石榴皮中的安石榴苷，建立了操作简单快速、成本低、绿色高效的鲜石榴皮安石榴苷提取方法，本发明的安石榴苷提取方法操作简便、提取时间短、成本低、污染小，并且安石榴苷得率高，从而提高了安石榴苷的利用率，具备实际推广应用价值。

附图说明

图1安石榴苷标准曲线图。

图2料液比对安石榴苷含量的影响图。

图3提取时间对安石榴苷含量的影响图。

图4提取转速对安石榴苷含量的影响图。

具体实施方式

以下结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

实施例1从石榴皮中提取安石榴苷

(1)将鲜石榴皮处理得到石榴皮浆，具体方法为：取150g新鲜石榴皮，加入100mL水，搅碎，得到石榴皮浆。

(2)闪式提取得提取液：按照料液比1:4(g/mL)在步骤(1)所得的石榴皮浆中加入水溶液，闪式提取，得石榴皮安石榴苷提取液。闪式提取的参数为：间隔30s提取1次，提取转速为7700r，提取时间为120s。

(3)安石榴苷提取物干粉：收集步骤(2)的提取所得上清液，浓缩上清液，加入3-4倍体积0-90％乙醇，沉淀8h，离心，过滤，收集上清液，浓缩，冻干，HPLC法测定安石榴苷的得率，其中采用HPLC法生物色谱条件包括：色谱柱为Shim-pack GIS C18色谱柱，色谱柱的尺寸为4.6×250mm,5μm。检测温度为35℃。流动相A为：体积百分比为0.1％甲酸水溶液和甲醇，流动相为B：体积百分比为0.1％甲酸水溶液。洗脱程序为：梯度洗脱，0～70min，流动相B占流动相的体积百分数为20～70％；70～71min，流动相B占流动相的体积百分数为70～100％；71～74min，流动相B占100％；流动相流速为1.0mL/min，检测波长为280nm，进样量为20μL。采用安石榴苷标准曲线(0～200μg/mL)对安石榴苷进行定量(如图1所示)，以mg/g表示，安石榴苷得率的检测结果见图1。

试验例1安石榴苷提取参数的单因素筛选试验

在实施例1制备石榴皮安石榴苷提取液的基础上，通过单因素实验探究闪式提取方法中不同提取参数对石榴皮安石榴苷提取液中安石榴苷得率的影响。不同提取参数包括：料液比(1：4，1：6，1：8，1：10，1：12g/mL)，提取转速(5000，6000，7000，8000，9000r)，时间(60、120、180、240、300s),每个实验处理重复三次。

单因素试验结果如图2～4所示。单因素试验结果表明：液固体比例为4：1(如图2所示)，提取时间120S(如图3所示)，提取转速为8000r(如图4所示)时，所得到的提取液中安石榴苷得率高。

试验例2安石榴苷提取工艺的多因素筛选试验

根据试验例1的单因素筛选结果，对安石榴苷提取工艺进行多因素的筛选，提取工艺选择如表1所示。按照实施例1制备提取液的方法，采用表1所示提取工艺提取安石榴苷，利用实施例1的HPLC法测定安石榴苷得率，测定结果见表1。

表1.安石榴苷提取工艺的选择

从表1的试验结果可知：当料液比为1:4(w/v)，提取转速为8000r，提取时间为120S时，安石榴苷的得率最高，且显著高于采用其它的提取参数。

试验例3提取工艺验试验

根据试验例2的提取工艺考察结果，结合生产实际，确定最优提取工艺为料液比为1:4(w/v),提取时间为120S,提取转速为8000r；按照上述提取工艺各制备了3批石榴皮安石榴苷提取液进行验证实验，验证安石榴苷得率测量值的平均值为615.546±3.04％，该数值和预测值611.77接近。验证结果，充分证明了该提取工艺所得石榴皮提取液安石榴苷得率高且稳定。