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利用巢式PCR结合基因特异引物的反转录技术挖掘低丰度表达基因和系统鉴定剪接变体的方法与应用

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本发明公开了一种利用巢式PCR结合基因特异引物(GSP)反转录技术挖掘低丰度表达基因和系统鉴定剪接变体的方法与应用。该方法基于3’GSP1的反转录PCR，利用梯度PCR寻找每个基因每对引物组合的最佳退火温度，基于GSP的巢式PCR测序并基于序列分析判定是否为新的剪接变体。本方法简便易行、重复性好、稳定性高、可靠性强，并且极大地节约了实验成本，可应用于不同生理病理状态下真核生物低丰度表达基因的挖掘和高、低丰度表达基因剪接变体的鉴定及发现中，可用于挖掘低丰度表达基因和鉴定与发现高表达基因及低丰度表达基因的剪接变体，除了靶定基因已知的剪接变体外，更可用于基因未知剪接变体的发现，应用前景广阔。

著录项

公开/公告号CN102260670B

专利类型发明专利
公开/公告日2013-04-03

原文格式PDF
申请/专利权人中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所;
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申请/专利号CN201110195025.8
发明设计人张成岗;张艳春;严瑞芬;屈武斌;吴永红;高艳;
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申请日2011-07-12
分类号
代理机构北京尚诚知识产权代理有限公司;
代理人鲁兵
地址 100850 北京市海淀区太平路27号
入库时间 2022-08-23 09:13:57

法律信息

法律状态公告日

法律状态信息

法律状态
2020-07-10

未缴年费专利权终止 IPC(主分类):C12N15/11 授权公告日:20130403 终止日期:20190712 申请日:20110712

专利权的终止
2013-04-03

授权

授权
2013-04-03

授权

授权
2012-01-11

实质审查的生效 IPC(主分类):C12N15/11 申请日:20110712

实质审查的生效
2012-01-11

实质审查的生效 IPC(主分类):C12N 15/11 申请日:20110712

实质审查的生效
2011-11-30

公开

公开
2011-11-30

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机译：双低（00）fad3等位基因的等位基因双低等位基因（A）的位点A和C的突变和非突变片段的核苷酸序列形成去饱和酶基因和油菜植物（甘蓝型油菜）的低亚麻酸突变体（LLMut），是同种异体对fad3基因座A和C特异的SNP标记形成去饱和酶基因-冬季油菜植物的双低（00）和低亚麻酸突变体（LLMut），用于扩增fad3基因去饱和酶A和C的引物对的核苷酸序列冬季油菜植物基因，fad3去饱和酶基因的基因座A和C的扩增方法，用于鉴定fad3形式脱氢酶基因的突变和非突变等位基因的引物的核苷酸序列-双低（00 ）和基因座A和基因座C中油菜的低亚麻酸突变体（LLMut）的微测序反应，fad3形式脱氢酶基因突变和非突变等位基因的鉴定方法-双低（00）和低亚麻酸突变体（法学硕士
4. Nucleotide sequences of primers specific for the terminal areas of the tested DNA fragment conjugated with Rfo restorer gene for CMS ogura in rape, method for DNA amplification by polymerase chain reaction (PCR) with primers specific for genomic DNA fragment coupled with Rfo gene for CMS ogura in rape, process for the preparation of the nucleotide sequence of the DNA fragment conjugated the Rfo restorer gene for CMS ogura in rape, process for the preparation of SCAR type DNA marker for the identification of rape plants with Rfo restorer gene for ogura gene-cytoplasmic male sterility, method for the identification of rape plants with Rfo restorer gene for ogura gene-cytoplasmic male sterility and test kit for the identification of rape plants with Rfo restorer gene for ogura gene-cytoplasmic male sterility [P] . PL212433B1 . 2012-10-31

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5. Method for the amplification by reverse transcription coupled to a nested or semi-nested reaction PCR in a single step, of a target RNA, and its applications in the identification of enterovirus and the discrimination between poliovirus and non-polio enterovirus. [P] . ES2188357A1 . 2003-06-16

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