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在哺乳动物细胞中高效表达猪圆环病毒2型核衣壳蛋白的方法

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摘要

本发明公开了一种在哺乳动物细胞中高效表达猪圆环病毒2型核衣壳蛋白的方法。该方法通过抑制猪圆环病毒2型核衣壳蛋白的泛化作用(Ubiquitination)，增强其稳定性，从而提高病毒蛋白在哺乳动物细胞中表达水平。方法的步骤为：1）猪圆环病毒2型SX04株全基因组序列的克隆；2）含有猪圆环病毒2型（PCV2）核衣壳蛋白基因的真核表达质粒的构建；3）将上述质粒转染猪肾细胞PK15，转染后24小时，在细胞培养液中加入MG132；4）继续培养48小时后，收集细胞，免疫印迹检测表达蛋白。相对于普通的真核表达方法，该方法可有效稳定真核细胞中的PCV2核衣壳蛋白。转染后72小时的蛋白免疫印迹检测显示，本专利使用的方法，可最高提高PCV2核衣壳蛋白的表达量在20倍左右。

著录项

  • 公开/公告号CN102586326B

    专利类型发明专利

  • 公开/公告日2013-05-29

    原文格式PDF

  • 申请/专利权人 杭州贝尔塔生物技术有限公司;

    申请/专利号CN201210018722.0

  • 发明设计人 李龙;于涟;方立;

    申请日2012-01-20

  • 分类号

  • 代理机构杭州求是专利事务所有限公司;

  • 代理人张法高

  • 地址 310014 浙江省杭州市下城区费家塘路588号7号楼213室

  • 入库时间 2022-08-23 09:14:14

法律信息

  • 法律状态公告日

    法律状态信息

    法律状态

  • 2013-05-29

    授权

    授权

  • 2012-09-19

    实质审查的生效 IPC(主分类):C12N 15/85 申请日:20120120

    实质审查的生效

  • 2012-07-18

    公开

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