RGD

摘要： 肿瘤细胞具有较强的增殖和扩散转移能力,肿瘤细胞的增殖和转移受细胞表达的整合素所调节。其中,整合素αvβ3是被研究和讨论最为集中的细胞外基质粘附受体之一。因为αvβ3在肿瘤新生血管中的高表达,使其成为肿瘤诊断和抗肿瘤药物研究的重要靶点。αvβ3的天然配体中都含有一段精氨酸–甘氨酸–天冬氨酸(RGD)序列,参与肿瘤细胞的增殖和转移等活动。RGD的此特性可用于为体外构建肿瘤诊断的分子成像探针和用于靶向治疗的药物。基于整合素αvβ3在肿瘤诊断和治疗中所起到的关键性作用,本文对αvβ3的结构功能以及在癌症诊断和治疗中的作用进行简要概述。

摘要： Objective:To optimize the expression of fusion protein streptavidin (SA)-hirudin (H)-RGD,determine its biological activities and obtain its conjugates with fibrin aptarer.Methods:The pET-44b-SA-H-RGD plasmid was sequenced and the isopropylthio-β-D-galactoside (IPTG) inducted conditions was optimized.Then it Was purified with Ni affinity gel chromatography column and identified with Western blotting.The function of SA-H-RGD was identified by prothrombin time (PT) and the experiment of anti-platelet aggregation.The conjugates that targeted to fibrin was prepared by mixing the biotin-labeledG81-2 aptamer and the SA-H-RGD at the molar ratio of 4:1,and validated by electrophoretic mobility shift assay (EMSA).Results:The sequence of pET-44b-SA-H-RGD plasmid was absolutely correct,the expression of fusion protein SA-H-RGD in Escherichia coli was optimized with 0.9mmol/L IPTG for 5 hours and purified.The activity of anticoagulant and anti-platelet aggregation of SA-H-RGD was identified.The activity to combine with the biotin-labeled G81-2 aptamer was showed by EMSA.Conclusions:The expression and purification of hirudin fusion protein SA-H-RGD were successfully performed.The expressed protein possessed anticoagulant and anti-platelet aggregation functionandits conjugates with biotin-labeled G81-2 aptamer was obtained ultimately.%目的:优化表达并纯化水蛭素融合蛋白SA-H-RGD,检测其生物学活性,获得能够与生物素标记的纤维蛋白适配子G81-2结合的偶联物.方法:将序列正确的质粒pET-44b-SA-H-RGD进行原核表达,采用不同浓度的IPTG及时间优化融合蛋白表达条件,镍亲和凝胶层析柱纯化融合蛋白,Western-blot鉴定蛋白.通过凝血酶原时间(PT)和抗血小板聚集实验检测融合蛋白活性;之后按照生物素-G81-2:SA-H-RGD摩尔比为4:1的比例制备纤维蛋白特异性的偶联物,用凝胶迁移阻滞实验(EMSA)验证二者的偶联.结果:融合蛋白SA-H-RGD在IPTG 0.9 mmol/L、5h时在大肠杆菌中获得可溶性高效表达,纯化的融合蛋白具有延长PT的作用和抑制血小板聚集的活性,EMSA表明SA-H-RGD具有结合生物素标记的G81-2适配子的功能.结论:本研究成功地优化表达了具有抗凝血和抗血小板聚集功能的融合蛋白SA-H-RGD,获得了水蛭素融合蛋白与生物素-G81-2适配子组成的靶向偶联物.

摘要： 目的研究诱变型内皮抑素对T-24膀胱癌细胞Bcl-2蛋白表达量的影响。方法运用定点诱变技术,将人内皮抑素25~31位氨基酸由RGIRGAD改为RGDRGD后,合成诱变型人内皮抑素(1~30位氨基酸对应核苷酸序列),连接到质粒p TYB2中,转化至大肠杆菌BL-21(DE3)中表达,几丁质亲和层析树脂一步纯化诱变型内皮抑素,葡聚糖凝胶G15去除DTT后经Tricine SDS-PAGE鉴定诱变型内皮抑素。诱变型内皮抑素作用体外培养T-24膀胱肿瘤细胞后,Western blot检测T-24细胞的Bcl-2蛋白表达量;MTT比色法测定对T-24细胞的增殖抑制情况;流式细胞技术测定T-24细胞的早期调亡情况。结果通过诱变技术及基因工程方法提取的诱变型内皮抑素其相对分子质量与理论大小一致;Western blot检测结果显示诱变型内皮抑素抑制了T-24细胞的Bcl-2蛋白表达;MTT法显示诱变型内皮抑素对T-24细胞有明显的增殖抑制作用,流式细胞仪检测到细胞凋亡增加。结论诱变型人内皮抑素(诱变型内皮抑素)能够明显抑制T-24膀胱肿瘤细胞Bcl-2的表达,抑制细胞的增殖,促进早期凋亡。

摘要： 目的:研究钛表面RGD/仿生磷酸钙复合涂层对MC3T3-E1细胞黏附、增殖和分化的影响。方法:1)两步法在钛表面制备仿生磷酸钙涂层,扫描电子显微镜(SEM)观察形态,X射线衍射(XRD)、傅立叶转换红外光谱(FTIR)检测表征;2)RGD固定至仿生磷酸钙涂层;3)实验分3组:纯钛组,钛/仿生磷酸钙涂层组,钛/RGD/仿生磷酸钙复合涂层组,细胞分别接种至3组材料表面。4)SEM观察细胞接种4h和24h的形态;5)结晶紫染色检测细胞接种4h和8h的黏附情况。6)MTT法检测细胞1、3、7d的增殖活性;7)检测细胞3、7、14d的ALP活性。结果:SEM细胞形态观察及结晶紫染色结果显示,RGD/仿生磷酸钙复合涂层组的细胞黏附效果优于对照组。MTT结果显示RGD/仿生磷酸钙复合涂层组的细胞增殖活性强于对照组。ALP检测结果显示RGD/仿生磷酸钙复合涂层组的成骨分化活性高于对照组。结论:钛表面RGD/仿生磷酸钙复合涂层对MC3T3-E1细胞的黏附、增殖、分化均有促进作用。

摘要： 合成cRGD-羧甲基壳聚糖-软脂酸(cRGD-CMCh-PA)载体,以紫杉醇(paclitaxel,PTX)为模型药物,薄膜分散法制备pH敏感性载紫杉醇-cRGD-羧甲基壳聚糖-软脂酸胶束(PTX-cRGD-CMCh-PA),采用FT-IR、1H NMR对相关产物结构进行表征,并对胶束粒径、电位和形态进行测定;透析法考察载药胶束在pH 5.3和7.4的磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffered saline,PBS)中体外释药行为.采用MTT法考察了细胞毒性,共聚焦显微镜及活细胞工作站动态观察胶束的细胞动态摄取过程;近红外小动物活体成像技术探索胶束的肿瘤靶向性.结果显示:合成的cRGD-CMCh-PA羧甲基化程度为45.0％,软脂酸接枝率为15.0％;载药胶束包封率和载药量分别为99.67％和28.5％,粒径为(162.9±1.5) nm.pH 7.4 PBS条件下PTX释放缓慢,释药遵循Higuchi方程;pH 5.3 PBS中2h内出现突释现象,呈现pH敏感特性.PTX-CMCh-PA的IC50为2.077 μg·mL-1,PTX-cRGD-CMCh-PA的IC50为0.876 μg·mL-1;共聚焦显微镜和活细胞工作站均显示肿瘤细胞对PTX-cRGD-CMCh-PA摄取率更为显著,近红外小动物活体成像技术显示其对肿瘤具有更高的靶向性.本实验中合成的cRGD-CMCh-PA胶束具有pH敏感释药特点和良好的肿瘤靶向性,是一种具有开发潜力的新型药物载体.

摘要： 整合素αvβ3在肿瘤内皮血管细胞表面特异性表达,是肿瘤靶向的一个重要位点.精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp,RGD)三肽序列对αvβ3有很强亲和力,RGD 可以作为αvβ3的受体识别.HPMA具有良好的水溶性、生物相容性,与抗癌药物连接为水溶性高分子聚合物后,利用增强渗透和滞留效应,能改善抗癌药物的体内分布和药代动力学.然而单体 RGD多肽有很多缺陷,需要进一步修饰.将 HPMA-RGD共轭可用于靶向肿瘤血管再生,增加药物在肿瘤的浓度和累积量.核磁共振(MRI)是肿瘤诊断的重要手段,用放射性核素Gd等标记的RGD多肽,可用于肿瘤的无创性检查.%The specific expression of integrin alpha v beta 3 on the surface of tumor vascular endothe-lial cell,is an important site of tumor targeting.three peptide sequences with arginine,glycine,and as-partic acid (Arg-Gly-Asp,RGD)have strong affinity with alpha v beta 3.RGD can be used as receptor recognition of alpha v beta 3.On the other hand,HPMA has good water solubility and biocompatibility when it is connected with anticancer drugs.Then,it may be connected into a water soluble polymer.By utilizing enhanced permeability and retention effect,it can improve the anticancer drug distribution in vivo and pharmacokinetics.However,the monomer of RGD peptide has many defects,which need to be further modified.The HPMA-RGD conj ugate could be used to target tumor angiogenesis and in-crease both drug concentration and accumulation in tumor.Surely,nuclear magnetic resonance (MRI) is an important method for tumor diagnosis.Therefore,RGD peptide and radionuclide with Gd markers can be used noninvasive inspection for tumor.

摘要： 目的 制备一种携RGD肽的靶向相变型光声/超声双模态造影剂(RNP),并观察其体外光致相变以及细胞靶向效果.方法 制备包裹ICG及液态氟碳(PFH)的RGD肽靶向高分子微球,在荧光显微镜下观察RGD肽与微球的结合情况,流式细胞术量化其结合率,脉冲激光辐照观察微球相变情况,用乳腺癌MD-MB231细胞验证其体外细胞靶向能力.结果 制备的RNP平均粒径为(627±28.5) nm,微球与RGD肽结合率为98.9％,脉冲激光辐照后微球发生液气相变.体外靶向实验结果显示,与对照组相比,更多的靶向微球聚集在MD-MB231细胞的周围.结论 成功制备出携RGD肽的靶向相变型光声/超声双模态造影剂,该造影剂对高表达整合素的乳腺癌MD-MB231细胞具有较高的靶向结合能力.

摘要： 目的 构建RGD-重组葡激酶-人α微球蛋白融合蛋白的原核表达质粒,在大肠杆菌中表达融合蛋白,纯化并初步鉴定其生物学活性.方法 利用重叠延伸PCR获得目的融合基因片段RGD-rSAK-α1M,插入带有His-GST标签的原核高效可溶性表达载体PEGX-6P-1中.经酶切鉴定后,将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21菌株,IPTG诱导目的蛋白表达,经Ni+亲和层析柱纯化后用3C蛋白酶切除重组蛋白的His-GST标签,再利用DEAE离子交换柱和分子筛纯化蛋白.最后应用纤维蛋白平板溶圈法和血小板聚集抑制试验分别测定评价重组融合蛋白的溶栓活性和抗血小板聚集作用.结果 1)成功构建了RGD-重组葡激酶-人α微球蛋白融合蛋白.2)实现了目的融合蛋白在大肠杆菌上清液中的高效表达,并纯化了融合蛋白.3)体外实验表明纯化后的融合蛋白纤溶活性同尿激酶标准品无明显差异.4)融合蛋白抗血小板聚集作用较单纯重组葡激酶明显提高.结论 经文献检索确认为首次获得了纯化的RGD-重组葡激酶-人α微球蛋白融合蛋白,并验证了其纤溶活性和尿激酶标准品无明显差异,而抗血小板聚集作用较单纯重组葡激酶增强,为下一步进行融合蛋白免疫原性鉴定奠定了基础.

摘要： 分析了规则格网数据分块的原则和方法,提出了规则格网数据金字塔模型的构建方法;系统论述了基于金字塔模型的规则格网数据可视化编辑原理、方法和实现过程,特别对格网数据编辑结果向金字塔模型中其他数据层的传播进行了全面研究,编程实践了单点和区域两种方式对基于金字塔模型的规则格网数据的可视化交互编辑.

摘要： 分析了规则格网数据分块的原则和方法,提出了规则格网数据金字塔模型的构建方法;系统论述了基于金字塔模型的规则格网数据可视化编辑原理、方法和实现过程,特别对格网数据编辑结果向金字塔模型中其他数据层的传播进行了全面研究,编程实践了单点和区域两种方式对基于金字塔模型的规则格网数据的可视化交互编辑.

摘要： 分析了规则格网数据分块的原则和方法,提出了规则格网数据金字塔模型的构建方法;系统论述了基于金字塔模型的规则格网数据可视化编辑原理、方法和实现过程,特别对格网数据编辑结果向金字塔模型中其他数据层的传播进行了全面研究,编程实践了单点和区域两种方式对基于金字塔模型的规则格网数据的可视化交互编辑.

摘要： 分析了规则格网数据分块的原则和方法,提出了规则格网数据金字塔模型的构建方法;系统论述了基于金字塔模型的规则格网数据可视化编辑原理、方法和实现过程,特别对格网数据编辑结果向金字塔模型中其他数据层的传播进行了全面研究,编程实践了单点和区域两种方式对基于金字塔模型的规则格网数据的可视化交互编辑.

摘要： 本发明公开了包括R‑G‑磺基丙氨酸(即R‑G‑NH‑CH(CH

摘要： 本发明涉及血栓靶向释放RGDS的聚天冬酰‑RGDS，涉及它的制备方法，涉及它在大鼠血栓模型上的靶向抗血栓作用。因而本发明阐明了聚天冬酰‑RGDS作为靶向抗血栓剂的临床应用前景。本发明属于生物医药领域。

摘要： 本发明公开一种本发明发现了Lj-RGD3全RGD模体缺失突变体Lj-112的重组蛋白（rLj-112）可阻止真菌细胞膜麦角固醇的合成，从而破坏了真菌细胞的完整性，使真菌细胞膜破坏、膜通透性增高、细胞内容物质释放、细胞破裂溶解，从而杀死真菌，即能够剂量依赖性的抑制真菌而对细菌无抑制作用，发明了Lj-RGD3全RGD模体缺失突变体Lj-112重组蛋白在制备抗真菌药物中的应用。

摘要： “类HRG的七鳃鳗Lj-RGD3全RGD缺失突变体Lj-112在抗肿瘤药物中的应用”属于生物技术领域，涉及到日本七鳃鳗口腔腺中RGD模体蛋白Lj-RGD3的三个RGD(Arg-Gly-Asp)模体缺失突变基因的人工合成、突变基因的克隆、与之对应的突变体蛋白(命名为Lj-112)在大肠杆菌中的表达，以及rLj-112通过类富含组氨酸糖蛋白(HRG)功能途径更强效抑制血管新生功能及其作为血管新生抑制剂在抗肿瘤制药中的应用。

摘要： 本发明涉及用于抑制细胞粘附至RGD结合位点或引导诊断剂或治疗剂至RGD结合位点的组合物和方法。本发明公开了包括R‑G‑磺基丙氨酸(即R‑G‑NH‑CH(CH

摘要： 本发明涉及血栓靶向释放RGDS的聚天冬酰-RGDS，涉及它的制备方法，涉及它在大鼠血栓模型上的靶向抗血栓作用。因而本发明阐明了聚天冬酰-RGDS作为靶向抗血栓剂的临床应用前景。本发明属于生物医药领域。

摘要： 本发明涉及用于抑制细胞粘附至RGD结合位点或引导诊断剂或治疗剂至RGD结合位点的组合物和方法。本发明公开了包括R-G-磺基丙氨酸(即R-G-NH-CH(CH2-SO3H)COOH或Arg-Gly-NH-CH(CH2-SO3H)COOH)和其衍生物(包括药学上可接受的盐、水合物、立体异构体、多聚体、环状形式、线性形式、药物缀合物、前药及其衍生物)的化合物。还公开了制备和使用这种化合物的方法，包括在人或动物受试者中抑制细胞粘附到RGD结合位点上或将其它诊断剂或治疗剂递送到RGD结合位点的方法。

摘要： 本发明公开一种Lj-RGD3全RGD模体缺失突变体Lj-112的重组蛋白（rLj-112）可阻止真菌细胞膜麦角固醇的合成，从而破坏了真菌细胞的完整性，使真菌细胞膜破坏、膜通透性增高、细胞内容物质释放、细胞破裂溶解，从而杀死真菌，即能够剂量依赖性的抑制真菌而对细菌无抑制作用，发明了Lj-RGD3全RGD模体缺失突变体Lj-112重组蛋白在制备抗真菌药物中的应用。

摘要： 类HRG的七鳃鳗Lj-RGD3全RGD缺失突变体Lj-112在抗肿瘤药物中的应用属于生物技术领域，涉及到日本七鳃鳗口腔腺中RGD模体蛋白Lj-RGD3的三个RGD(Arg-Gly-Asp)模体缺失突变基因的人工合成、突变基因的克隆、与之对应的突变体蛋白(命名为Lj-112)在大肠杆菌中的表达，以及rLj-112通过类富含组氨酸糖蛋白(HRG)功能途径更强效抑制血管新生功能及其作为血管新生抑制剂在抗肿瘤制药中的应用。

摘要： 本发明公开了包括R-G-磺基丙氨酸(即R-G-NH-CH(CH