肌细胞,平滑肌

摘要： 目的研究膀胱平滑肌细胞与膀胱脱细胞基质(BAM)的生物相容性。方法分离培养兔膀胱平滑肌细胞,采用α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)抗体进行鉴定。将以1×10^5个/mL的单细胞悬液均匀接种于制备BAM支架上,通过与单独培养的膀胱平滑肌细胞作对照,绘制两组细胞生长曲线图,对比观察两条生长曲线的差异性。结果第4代兔膀胱平滑肌细胞形态为典型的“长梭样”,免疫荧光显示α-SAM表达阳性。膀胱平滑肌细胞能够在BAM上很好地黏附生长,两组细胞生长曲线基本相似。结论膀胱平滑肌细胞与BAM生物相容性好,可用膀胱平滑肌细胞作为种子细胞,以BAM作为支架材料构建组织工程化尿路移植物。

摘要： 目的探讨Kruppel样因子4(KLF4)在巨噬细胞向破骨细胞分化中的作用及相关机制。方法提取雄性C57BL/6J小鼠腹腔原代巨噬细胞并鉴定,将其分为对照组,NF-κB受体激动剂配体(RANKL)组,共刺激组(KLF4抗体和RANKL共刺激4 d),用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测破骨细胞分化情况,用鬼笔环肽染色检测破骨细胞成熟程度;通过骨吸收陷窝实验测破骨细胞骨吸收能力;通过qRT-PCR检测破骨细胞分化相关基因表达,用钙盐染色检测血管平滑肌细胞钙化情况。结果TRAP染色显示,TRAP阳性细胞直径约100μm,细胞核>3个。共刺激组破骨细胞数量较RANKL组明显增多(P<0.05)。与RANKL组比较,共刺激组破骨细胞成熟程度进一步升高、陷窝面积及数量升高(P<0.05)。RANKL组较对照组相关破骨基因表达明显升高(P<0.05);共刺激组较RANKL组相关破骨基因表达明显升高(P<0.05),而血管平滑肌细胞钙化明显降低(P<0.05)。结论KLF4抗体可促进巨噬细胞向破骨细胞转分化,进而抑制平滑肌细胞钙化。

摘要： 背景 微小RNA-107(miRNA-107)在多种肿瘤(如膀胱癌、乳腺癌)的发生发展过程中具有重要作用,但其在过敏性哮喘发生发展中的作用尚不完全清楚.目的 探讨miRNA-107对气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖和迁移的影响.方法 本研究时间为2019年9月—2020年12月.原代培养SPF级雌性BABL/c小鼠的ASMCs,运用免疫荧光鉴定ASMCs.将细胞随机分为miRNA-107模拟物组(miRNA-107 mimic组)、模拟物对照组(mimic NC组)和miRNA-107抑制剂组(miRNA-107 inhibitor组)、抑制剂对照组(inhibitor NC组).miRNA-107 mimic组和mimic NC组的细胞分别转染5μl 20μmol/L的miRNA-107 mimic或5μl 20μmol/L的mimic NC+7.5μl viafect+200μl Opti-MEM无血清培养基;miRNA-107 inhibitor组和inhibitor NC组的细胞分别转染10μl 20μmol/L的miRNA-107 inhibitor或10μl 20μmol/L的inhibitor NC+15μl viafect+200μl Opti-MEM无血清培养基.采用荧光定量试剂盒检测各组ASMCs中miRNA-107相对表达水平,BrdU细胞增殖检测试剂盒(比色分析法)检测各组细胞增殖能力(吸光度差值),穿梭小室检测各组细胞迁移能力(迁移细胞数).分别比较miRNA-107 mimic组与mimic NC组、miRNA-107 inhibitor组与inhibitor NC组ASMCs中miRNA-107相对表达水平、细胞增殖能力和细胞迁移能力.结果 ASMCs从组织块周围呈放射状萌出,7 d后逐渐长满培养瓶,呈谷峰状;首次传代后,ASMCs呈梭形,多有突起,生长致密且平行排列;培养2代后的ASMCs经免疫荧光鉴定后有绿色荧光;经鉴定,99％以上的细胞均是ASMCs.miRNA-107 mimic组ASMCs中miRNA-107相对表达水平高于mimic NC组,吸光度差值、迁移细胞数低于mimic NC组(P<0.05).miRNA-107 inhibitor组ASMCs中miRNA-107相对表达水平低于inhibitor NC组,吸光度差值、迁移细胞数高于inhibitor NC组(P<0.05).结论 miRNA-107可以抑制ASMCs的增殖和迁移.抑制miRNA-107的表达可以促进ASMCs的增殖和迁移,这可能是哮喘患者发生气道重塑的机制之一.因此,miRNA-107有望作为抑制气道重塑的一个靶点,为哮喘的治疗提供新的方法.

摘要： cqvip:2019年,Laurent等[1]首次提出超常血管衰老(supernormal vascular aging, SUPERNOVA)概念,SUPERNOVA指不受危险因素影响,因颈-股动脉脉搏波传导速度(carotidfemoral pulse wave velocity,cfPWV)值极低而生成一种保护表型.Laurent等还依据cfPWV值将早发血管衰老(early vascular aging,EVA)和SUPERNOVA作为血管衰老分布的2个极端来处理.血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)作为血管的重要组成部分,在血管衰老中扮演重要的角色.现将血管衰老分为EVA,正常血管衰老(normal vascular aging,NVA)以及SUPERNOVA 3种类型,对VSMC在血管衰老及其不同类型发生发展的作用和机制的研究进展进行综述.

摘要： 目的 探讨Kruppel样因子4(KLF4)在巨噬细胞向破骨细胞分化中的作用及相关机制.方法 提取雄性C57BL/6J小鼠腹腔原代巨噬细胞并鉴定,将其分为对照组,NF-κB受体激动剂配体(RANKL)组,共刺激组(KLF4抗体和RANKL共刺激4 d),用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测破骨细胞分化情况,用鬼笔环肽染色检测破骨细胞成熟程度;通过骨吸收陷窝实验测破骨细胞骨吸收能力;通过qRT-PCR检测破骨细胞分化相关基因表达,用钙盐染色检测血管平滑肌细胞钙化情况.结果 TRAP染色显示,TRAP阳性细胞直径约100 μm,细胞核＞3个.共刺激组破骨细胞数量较RANKL组明显增多(P＜0.05).与RANKL组比较,共刺激组破骨细胞成熟程度进一步升高、陷窝面积及数量升高(P＜0.05).RANKL组较对照组相关破骨基因表达明显升高(P＜0.05);共刺激组较RANKL组相关破骨基因表达明显升高(P＜0.05),而血管平滑肌细胞钙化明显降低(P＜0.05).结论 KLF4抗体可促进巨噬细胞向破骨细胞转分化,进而抑制平滑肌细胞钙化.

摘要： 目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙激活氯通道ANO1蛋白表达的影响及其受体机制。方法用不同浓度(1、10、100、500、1000 nmol/L)AngⅡ处理VSMCs 24 h或用100 nmol/L AngⅡ处理VSMCs不同时间(1、6、12、24、48 h),观察AngⅡ对ANO1表达的影响。AngⅡ处理(100 nmol/L,24 h)前分别加入血管紧张素Ⅰ型受体(AT1R)阻断剂氯沙坦钾(LP)和血管紧张素Ⅱ型受体(AT2R)阻断剂PD123319(PD),进一步探讨AngⅡ作用的受体机制。以组织贴块法进行大鼠VSMCs的原代培养,采用Western blot法检测ANO1蛋白表达水平。结果与对照组相比,以10~1000 nmol/L AngⅡ处理24 h可明显提高细胞中ANO1蛋白表达水平,其中以100 nmol/L AngⅡ的作用最为显著(F=18.56,P<0.01);与对照组相比较,以100 nmol/L AngⅡ处理12~48 h可显著上调细胞中ANO1蛋白的表达(F=10.84,P<0.01)。AT1R阻断剂LP可完全阻断AngⅡ诱导的ANO1表达(F=9.68,P<0.05),而AT2R阻断剂PD无此作用。结论AngⅡ以浓度和时间依赖性的方式显著上调VSMCs中ANO1蛋白的表达,该作用是通过AngⅡ与AT1R结合而实现的。

摘要： 目的探讨蛋白去乙酰化酶9(HDAC9)基因对脂多糖(LPS)诱导的人冠状动脉平滑肌细胞(HCASMC)增殖、凋亡及炎症反应的影响。方法采用LPS诱导HCASMC,实验分为空白对照组、模型组、阴性对照组和转染组。采用实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blot方法检测HDAC9 mRNA和蛋白表达;MTT法和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡情况;ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-8(IL-8)含量。结果与空白对照组相比,模型组细胞中HDAC9 mRNA和蛋白表达水平升高(F=91.145、185.108,q=19.403、25.646,P<0.05)、细胞活力升高(F=77.940,q=17.819,P<0.05)、凋亡率降低(F=98.321,q=15.563,P<0.05)、TNF-α与IL-1β及IL-8的含量增多(F=91.145~325.808,q=10.813~15.180,P<0.05)。敲低HDAC9能够抑制细胞活力和炎症反应,并促进细胞凋亡。结论敲低HDAC9可抑制LPS诱导的HCASMC增殖及炎症反应,并促进细胞凋亡。

摘要： cqvip:目的探讨花生四烯酸15-脂氧合酶(ALOX15)对血管平滑肌细胞(VSMCs)铁死亡的影响。方法培养VSMCs,分为对照组(未处理)、空载组(转染Empty Vector)和ALOX15组(转染质粒ALOX15),转染24 h后,应用Western blot方法检测各组VSMCs中ALOX15蛋白表达;培养VSMCs,分为对照组(未处理)、erastin组(加erastin)、Empty Vector+erastin组(转染Empty Vector 12 h后加erastin)和质粒ALOX15+erastin组(转染质粒ALOX1512 h后加erastin),应用PI染色检测各组细胞的死亡率。结果Western blot检测结果显示,ALOX15组ALOX15蛋白表达高于对照组、空载组,差异有显著性(F=425.2,P<0.01)。PI染色结果表明,对照组、erastin组、Empty Vector+erastin组和质粒ALOX15+erastin组细胞死亡率比较差异有显著性,其中质粒ALOX15+erastin组细胞死亡率高于其他各组(F=138.1,P<0.01)。结论ALOX15在VSMCs中表达,通过过表达ALOX15可促进erastin诱导的VSMCs的铁死亡。

摘要： 目的:探讨IL-17对气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖的影响及其可能的信号机制。方法:原代分离培养大鼠ASMCs,通过形态学观察、细胞荧光免疫组织化学染色测定气道平滑肌细胞标志物SM-α-actin的表达进行细胞鉴定。不同浓度IL-17干预细胞后,MTT法检测细胞增殖情况;Western Blot法检测ERK1/2、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白的表达。结果:在0.1~1 ng/ml浓度范围内IL-17在24 h、48 h和72 h内均可促进ASMCs的增殖,其中以48 h内作用最为明显,24 h内作用较平缓,而72 h的作用则随着细胞状态的老化而变化不明显。且这种增殖作用随着浓度的增加而增加。1 ng/ml、10 ng/ml均能促进p-ERK1/2的表达,加入IL-17的阻滞剂磷酸化ERK1/2的表达下调。结论:IL-17能够促进大鼠ASMC的增殖,可能与激活ERK1/2信号通路有关。

摘要： 目的:探讨IL-17对气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖的影响及其可能的信号机制。方法:原代分离培养大鼠ASMCs,通过形态学观察、细胞荧光免疫组织化学染色测定气道平滑肌细胞标志物SM-α-actin的表达进行细胞鉴定。不同浓度IL-17干预细胞后,MTT法检测细胞增殖情况;Western Blot法检测ERK1/2、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白的表达。结果:在0.1~1 ng/ml浓度范围内IL-17在24 h、48 h和72 h内均可促进ASMCs的增殖,其中以48 h内作用最为明显,24 h内作用较平缓,而72 h的作用则随着细胞状态的老化而变化不明显。且这种增殖作用随着浓度的增加而增加。1 ng/ml、10 ng/ml均能促进p-ERK1/2的表达,加入IL-17的阻滞剂磷酸化ERK1/2的表达下调。结论:IL-17能够促进大鼠ASMC的增殖,可能与激活ERK1/2信号通路有关。

摘要： 本发明公开了一种可调控细胞粘附的材料，由基底材料和涂层组成，所述涂层的制备方法包括：(1)分别配制聚阳离子电解质溶液和聚阴离子电解质溶液；(2)将基底材料浸泡于聚阳离子电解质溶液中，取出后洗涤除去聚阳离子电解质溶液；(3)将步骤(2)中得到的基底材料浸泡于聚阴离子电解质溶液中，取出后洗涤除去聚阴离子电解质溶液；(4)重复步骤(2)和步骤(3)若干次后，得到聚电解质组装涂层；所述涂层的厚度为1nm～10μm。该材料无需负载生物活性因子就可调控细胞的粘附程度，实现材料周围细胞粘附程度的改变，与现有技术相比，本发明材料更加安全和稳定。

摘要： 本发明公开了一种小分子化合物组合及利用该小分子化合物组合诱导分化的细胞制备血管平滑肌细胞的方法。所述小分子组合包括按时序分开使用的第一阶段小分子化合物和第二阶段小分子化合物，所述第一阶段小分子化合物包括DNMT抑制剂和赖氨酸脱乙酰基酶抑制剂中的至少一种；所述第二阶段小分子化合物包括WNT/β‑catenin激动剂，cAMP激动剂和TG F‑beta受体抑制剂。本发明通过小分子化合物分阶段诱导，能够将分化的细胞转分化为血管平滑肌细胞，各步骤可实现精准质控，便于标准化操作和规模化生产。本发明提供的方法供体来源广泛，患者本人即是理想供体，可在较短时间内获得基础研究、临床治疗或组织工程生产所需的足够数量的血管平滑肌细胞。

摘要： 本发明涉及细胞培养领域，具体是一种体外诱导牙髓干细胞向膀胱平滑肌细胞分化的细胞培养方法，该细胞培养方法包括如下步骤：步骤(1)牙髓干细胞DPSCs的分离和培养；步骤(2)膀胱平滑肌细胞SMCs的分离和培养；步骤(3)膀胱平滑肌细胞SMCs条件培养液CM收集；步骤(4)筛选膀胱平滑肌细胞SMCs体外诱导培养液；步骤(5)体外诱导牙髓干细胞DPSCs向膀胱平滑肌细胞SMCs方向分化。本发明通过利用牙髓干细胞体外诱导分化为膀胱平滑肌细胞，使其能有效替代需进行膀胱扩大成形术或置换术患者的膀胱组织发挥正常功能，以期患者有更好的生活质量。

摘要： 本发明属于微流控技术领域，提出了一种内皮细胞‑平滑肌细胞共培养的单流道微芯片模型的构建方法。以动脉血管为原型建模，光刻蚀方法制作不同高度的阳模，在所形成的微通道中依次培养平滑肌细胞和内皮细胞制得内皮细胞‑平滑肌细胞分层培养的单流道微芯片模型。本构建方法改善了传统内皮细胞与平滑肌细胞共培养模式中无法使内皮细胞与平滑肌细胞在同一微流道内直接物理接触的问题以及无法在同一流动刺激下动态监测内皮细胞与平滑肌细胞细胞形态和功能改变。从细胞角度及分子表达层面直接观察流动剪切刺激下内皮细胞与平滑肌细胞相互作用以及分泌物的变化，对研究动脉粥样硬化等心脑血管疾病的发生机制的研究中提供了强有力的工具。

摘要： 本发明涉及一种模拟阻力血管平滑肌细胞与内皮细胞相互作用的体外模型。本发明所述的模拟阻力血管平滑肌细胞与内皮细胞相互作用的体外模型包括：体外共培养的原代血管内皮细胞与原代血管平滑肌细胞；Transwell小室，其底层为聚碳酸酯膜；所述原代血管内皮细胞与所述原代血管平滑肌细胞以所述聚碳酸酯膜相隔，透过所述聚碳酸酯膜形成缝隙连接。本发明所述的模拟阻力血管平滑肌细胞与内皮细胞相互作用的体外模型，在体外存活时间显著增加，达到3‑7天；该模型可重复性好，并且容易批量构建；可在单一因素刺激后，分别观察平滑肌细胞内皮细胞蛋白表达或功能变化情况；可选择性在平滑肌细胞或内皮细胞侧给药，观察其对细胞蛋白表达或功能的作用。

摘要： 本发明公开了一种动物神经系统血管平滑肌细胞单细胞的分离方法，属于生物技术领域。该方法包括：将切碎后的新鲜神经组织与细胞解离消化液混合培养后，离心，加入总细胞培养液，过滤后得到细胞混合物A；将细胞混合物A首先与内皮细胞梯度分离液混合，纯化分离得到含有血管平滑肌细胞的细胞混合物B。随后利用碘克沙醇溶液进一步分离得到纯的血管平滑肌细胞，该方法操作简便、成本低、效率高，且无需借助特定的仪器、适合工业化生产，通过该方法制备得到的神经血管平滑肌细胞单细胞可用来进行单细胞测序或者其他分析，有利于深入研究神经血管平滑肌细胞的特性。

摘要： 本发明公开了CADASIL病人特异性血管平滑肌细胞与内皮细胞的制备方法。本发明提供了一种制备CADASIL疾病细胞模型的方法，包括如下步骤：a)将来源于携带NOTCH3基因杂合突变的CADASIL病人的离体成纤维细胞进行重编程得到诱导多能干细胞系；b)将所述诱导多能干细胞系定向分化为血管壁细胞，得到CADASIL疾病细胞模型。本发明将利用重编程技术和定向分化技术在体外获得CADASIL患者特异的诱导多能干细胞，并将其定向分化成血管平滑肌细胞(VSMC)与血管内皮细胞(VEC)，用于研究CADASIL小动脉病变的发病机制，并为药物筛选提供平台。

摘要： 本发明公开了一种小分子化合物组合及利用该小分子化合物组合诱导分化的细胞制备血管平滑肌细胞的方法。所述小分子组合包括按时序分开使用的第一阶段小分子化合物和第二阶段小分子化合物，所述第一阶段小分子化合物包括DNMT抑制剂和赖氨酸脱乙酰基酶抑制剂中的至少一种；所述第二阶段小分子化合物包括WNT/β‑catenin激动剂，cAMP激动剂和TG F‑beta受体抑制剂。本发明通过小分子化合物分阶段诱导，能够将分化的细胞转分化为血管平滑肌细胞，各步骤可实现精准质控，便于标准化操作和规模化生产。本发明提供的方法供体来源广泛，患者本人即是理想供体，可在较短时间内获得基础研究、临床治疗或组织工程生产所需的足够数量的血管平滑肌细胞。

摘要： 本发明公开了一种基于小肠黏膜下层无细胞基质制备平滑肌细胞载体的方法，体外成功培养出阴道平滑肌细胞，倒置显微镜下，可见培养的阴道平滑肌细胞呈现长梭状，细胞集结于培养皿上形成典型的“峰和谷”样构型。黏膜下层无细胞基质外观呈白色，半透明，有一定韧性。苏木精-伊红染色未见细胞成分存在。阴道平滑肌细胞-肠黏膜下层标本切片苏木精-伊红染色后，光镜下可见细胞成分逐渐增多，由表浅向深层部位生长。阴道平滑肌细胞-肠黏膜下层标本切片采用抗兔平滑肌α-肌动蛋白单克隆抗体免疫组化染色后，均可见抗兔α-Actin的阳性细胞。结果初步证明了猪小肠黏膜下层基质可作为一种平滑肌细胞载体。

摘要： 本实用新型公开了一种内皮细胞与平滑肌细胞共培养装置，属于细胞培养领域；所述细胞共培养装置由共培养腔、循环系统压力调节器、共培养腔压力调节器、泵、阻尼调节器、储液室、及计算机控制系统组成;整个装置除了计算机控制系统外都可以放置与CO