nephrin

摘要： 目的建立重症MRL/lpr小鼠狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)动物模型,并对模型成功与否进行验证,进一步探索狼疮性肾炎与足细胞蛋白nephrin、P-cadherin的相关性。方法将实验动物分为三组:空白组、模型组和脂多糖组。空白组为雌性C57小鼠8只,模型组及脂多糖组为雌性MRL/lpr小鼠各8只,其中脂多糖组腹腔注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),空白组及模型组每周注射等量生理盐水。20周后检测小鼠尿蛋白,处死动物,收集各组小鼠肾组织。苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)染色观察小鼠肾脏组织。RT-qPCR和Western blot检测肾组织中nephrin、P-cadherin的mRNA及蛋白表达。结果与空白组相比,模型组小鼠尿蛋白升高,肾脏病理损伤严重;与模型组相比,LPS组小鼠尿蛋白升高,肾脏损伤进一步加重;此外肾组织中nephrin、P-cadherin表达水平在三组间逐步下降(P<0.01)。结论用LPS腹腔注射的MRL/lpr小鼠可诱导加重狼疮,且狼疮性肾炎的严重程度与nephrin及P-cadherin相关。

摘要： 目的观察健脾益肾活血方对膜性肾病大鼠24 h尿蛋白定量及肾脏组织Nephrin、Podocin蛋白表达的影响。方法将40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、贝那普利组、健脾益肾活血组,每组10只。除正常组外,其余组均采用抗FxlA血清一次性尾静脉注射诱导被动型Heymann肾炎模型。造模后第1天开始,贝那普利组给予0.15 mg/mL盐酸贝那普利片悬混液灌胃,健脾益肾活血组给予2.5 g/mL的健脾益肾活血汤灌胃,正常组、模型组给予等量生理盐水灌胃,均1次/d,连续4周。每周末检测各组大鼠24 h尿蛋白定量;于灌胃4周末处死大鼠,心脏取血,检测血清总蛋白、血清白蛋白、血肌酐、总胆固醇、三酰甘油;取肾脏组织,观察病理改变;免疫组化观察肾脏组织中Nephrin、Podocin蛋白阳性表达情况。结果造模后各造模组大鼠24 h蛋白尿定量均明显高于正常组(P均0.05)。末次灌胃结束后,模型组、贝那普利组、健脾益肾活血组血清白蛋白水平和肾脏组织中Nephrin、Podocin表达平均荧光强度均明显低于正常组(P均0.05);模型组、贝那普利组及健脾益肾活血组各血清指标水平比较差异均无统计学意义(P均>0.05);贝那普利组、健脾益肾活血组Nephrin与Podocin表达平均荧光强度均明显高于模型组(P均<0.05),且健脾益肾活血组均明显高于贝那普利组(P均<0.05)。结论健脾益肾活血方可以降低膜性肾病大鼠的尿蛋白水平,能够上调肾脏组织中Nephrin、Podocin蛋白的表达。

摘要： 目的:观察大鼠在一次性力竭运动后肾脏裂孔膜蛋白的表达水平,探究PKC抑制剂对其蛋白表达水平的影响,揭示PKC在运动性蛋白尿形成中的作用机制。方法:SD雄性大鼠30只随机分为对照组(C)、运动组(E)、运动联合PKC抑制剂组(EPI),每组10只。E组和EPI组大鼠分别进行一次性跑台力竭运动(25 m/min),EPI组大鼠运动前1 d及1 h腹腔注射PKC抑制剂白屈菜红碱(chelerythrine, 5 mg/kg),C组和E组注射相应体积的生理盐水。运动后即刻麻醉后,取血液、尿液及肾脏组织,使用化学比色法检测尿蛋白、尿酸、尿糖、血尿素、血尿酸、血糖水平,使用荧光探针法检测肾脏ROS水平,使用Western blot法检测肾脏PKC、Nox2、Nox4、nephrin、podocin蛋白表达。结果:(1)与C组相比,E组尿蛋白、尿酸、尿糖、血尿素、血尿酸显著增多(P<0.05),血糖显著减少(P<0.01),肾脏ROS生成显著增多(P<0.01),肾脏nephrin、podocin蛋白表达明显降低(P<0.05),PKC、Nox2、Nox4蛋白表达明显增多(P<0.05);(2)与E组比,EPI组尿蛋白、尿糖、血尿素显著减少(P<0.05),血糖显著增加(P<0.01),肾脏ROS生成显著降低(P<0.01),EPI组肾组织中nephrin、podocin蛋白表达明显增加(P<0.05),PKC、Nox2蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论:一次性力竭运动通过PKC/NOX/ROS途径使大鼠肾脏裂孔膜蛋白nephrin、podocin表达下调;PKC抑制剂缓解力竭运动导致的肾脏裂孔膜蛋白表达下降,预防运动性蛋白尿的发生。

摘要： Nephrin是第一个被确定为狭缝隔膜(SD)细胞外成分的分子,被认为是SD细胞外部分的主体,Nephrin不仅作为细胞外SD过滤网络的核心成分,而且通过其短胞内区域的相互作用介导足细胞中重要的细胞信号通路。它与SD上的其他组成蛋白在结构和功能上有着密切的联系,在SD的结构组织、功能调节等方面有重要作用。Nephrin在足细胞狭缝隔膜上的功能障碍与几种肾小球性蛋白尿的发生有关,Nephrin可能成为治疗肾小球性蛋白尿新疗法的目标。文章就Nephrin、SD的特征及二者之间的联系进行综述。

摘要： 目的观察舒洛地特对膜性肾病(MN)大鼠肾组织中podocin、nephrin表达的影响,探讨舒洛地特对MN的保护作用。方法将40只SD大鼠随机分为正常对照组(A组)、模型组(B组)、低剂量舒洛地特组(C组)、高剂量舒洛地特组(D组),每组各10只。除A组外,其他3组大鼠进行MN模型制备。造模成功后,C组和D组每只大鼠分别按照舒洛地特10 mg/kg、20 mg/kg剂量溶于生理盐水配成溶液灌胃,A、B组每只大鼠给予相同剂量生理盐水灌胃,均连续4周。各组大鼠分别于造模前、后及药物干预4周后检测24 h尿蛋白定量,在光镜和电镜下分别观察不同染色的大鼠肾组织病理形态。采用免疫组化检测大鼠肾组织podocin、nephrin平均积分光密度(IOD)。结果造模后,与A组比较,B、C、D组大鼠24 h尿蛋白定量均显著升高(P<0.05)。治疗后,C、D组大鼠24 h尿蛋白定量较同组造模后及B组同期均降低,D组24 h尿蛋白定量较C组同期显著降低(P<0.05)。光镜下,A组大鼠肾小球无固有细胞增多,无基底膜增厚;B组大鼠肾小球固有细胞增多,基底膜明显增厚;C、D组大鼠肾小球固有细胞轻度增多,基底膜增厚较B组减轻。电镜下,A组大鼠肾小球足细胞结构清晰,足突排列整齐;B组大鼠肾小球基底膜弥漫增厚,足突广泛融合或消失;C组大鼠肾小球基底膜不规则增厚,足突部分融合;D组大鼠肾小球基底膜轻度增厚,足突部分融合。与A组比较,B、C、D组大鼠podocin、nephrin IOD均降低;与B组比较,C、D组大鼠podocin、nephrin IOD均升高;与C组相比较,D组大鼠podocin、nephrin IOD均升高(P<0.05)。结论舒洛地特可降低MN大鼠24 h尿蛋白定量,上调MN大鼠肾组织中podocin、nephrin的表达,且上述作用具有剂量依赖性。

摘要： 目的 探讨芍药苷-6′-O-苯磺酸酯(CP-25)对高胰岛素诱导足细胞损伤的保护作用及机制.方法 体外培养小鼠足细胞,分为空白对照组、高胰岛素组、高胰岛素+CP-25(0.1、1、10μmol/L)组、高胰岛素+二甲双胍组,分别处理足细胞.CCK-8法检测CP-25对高胰岛素诱导的足细胞增殖的影响;GOD-POD法检测CP-25对高胰岛素诱导的足细胞葡萄糖消耗的影响;Transwell法检测CP-25对高胰岛素诱导的足细胞迁移的影响;Annexin V-FITC/PI双染法检测CP-25对高胰岛素诱导的足细胞凋亡的影响;Western blot法检测CP-25对高胰岛素诱导的足细胞Nephrin蛋白表达的影响.结果 CCK-8结果 显示:CP-25能够增加高胰岛素诱导的足细胞的增殖能力;GOD-POD结果 显示:CP-25能够改善高胰岛素诱导的足细胞对葡萄糖的摄取能力;Transwell实验结果 显示:CP-25能够减少高胰岛素诱导的足细胞的迁移;Annex-in V-FITC/PI双染结果 显示:CP-25能够抑制高胰岛素诱导足细胞的凋亡;Western blot结果 显示:CP-25能够上调高胰岛素诱导的足细胞Nephrin蛋白表达.结论 CP-25能够改善高胰岛素诱导的足细胞的损伤,其机制可能与提高足细胞Nephrin蛋白的表达有关.

摘要： [目的]探讨温阳利水方对阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)致膜性肾病(MN)模型大鼠的治疗作用及对足细胞的保护作用机制.[方法]应用细胞计数试剂盒8(CCK-8)筛选温阳利水方水提物灌胃浓度和时间.将SD大鼠分为4组,分别为对照组、模型组、温阳利水方组、贝那普利组,每组6只.模型组、温阳利水方组、贝那普利组大鼠以C-BSA尾静脉注射法构建MN模型,对照组大鼠则给予等量生理盐水尾静脉注射.造模结束后,对照组和模型组给予双蒸水灌胃,温阳利水方组给予16.50 g·kg-1·d-1温阳利水方水提物灌胃,贝那普利组给予10.00 mg·kg-1·d-1贝那普利混悬液灌胃,连续4周.给药结束后,观察大鼠的一般情况,检测血生化指标、24 h尿蛋白定量(UTP),对肾组织分别行苏木素-伊红(HE)、马松(Masson)、过碘酸六胺银(PASM)染色光镜检查和电镜检查,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测肾皮质nephrin mRNA表达水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测尿液nephrin蛋白含量.[结果]与对照组比较,模型组大鼠血肌酐、球蛋白、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、UTP水平明显升高,白蛋白水平明显下降(均P<0.05).灌胃4周,温阳利水方组和贝那普利组水肿减轻,UTP水平下降(P<0.05),肾小球基底膜增厚减轻,蛋白管型减少,肾间质炎症细胞浸润减轻,肾皮质nephrin mRNA表达水平下降,尿nephrin蛋白含量减少.[结论]温阳利水方可改善MN大鼠水肿、降低尿蛋白、减轻肾组织病理损害,其机制可能是通过降低肾皮质nephrin mRNA异常表达、减少尿nephrin蛋白排泄,稳定足突结构发挥了足细胞保护作用.

摘要： 目的 探究加味济生肾气汤对糖尿病肾病大鼠肾脏足细胞和自噬作用的影响,为糖尿病肾病的中药治疗奠定一定基础.方法 将66只SD大鼠按照随机数字表法分成对照组,模型组,羟苯磺酸钙组,加味济生肾气汤低、中、高剂量组.造模后,各组分别以生理盐水,羟苯磺酸钙,1 mL/kg/d、4 mL/kg/d、10 mL/kg/d药物浓度的加味济生肾气汤处理.6周后,取大鼠肾脏,电镜观察肾脏足细胞形态;免疫组化检测Nephrin的表达;Western blot检测LC3II/I和P62的表达.结果 模型组大鼠肾小球基底膜可见显著增厚,足细胞排列较紊乱,数目减少,足突融合,在加味济生肾气汤中剂量组和高剂量组中上述症状得以缓解;与对照组比较,模型组大鼠肾组织中的Nephrin水平均明显降低,LC3II/I比值显著下降,P62水平显著升高.与模型组比较,加味济生肾气汤高剂量组大鼠肾组织中的Nephrin水平均明显升高,LC3II/I比值均显著升高,P62水平显著降低(P<0.05).结论 加味济生肾气汤通过提高自噬水平,减少足突发生融合,提高肾脏的过滤功能.

摘要： 目的 研究地塞米松缓释剂(sustained-release of dexa-methasone,SR Dex)肾囊内植入给药对藏红花红O家兔肾病模型的保护作用及机制.方法 采用耳缘静脉注射臧红花红O的方法建立家兔肾病模型.SR Dex手术肾囊内一次性注射给药(1.48、0.74、0.37 mg·kg-1),阳性对照灌胃给药,连续给药8周.分别于造模前后每周定时检测肾病家兔24 h尿蛋白及血肾功能指标变化;采用PAS染色测肾组织病理损伤;天狼猩红(sirius red,SR)染色测肾组织纤维化程度;免疫组化法测nephrin、TRPC6蛋白表达;Real-time PCR测nephrin、TRPC6蛋白mRNA的变化.结果 SR Dex不同剂量组均可降低肾病家兔高尿蛋白、尿素氮和血肌酐的含量;改善肾组织病理学损伤和肾小球内脂类沉积;上调nephrin的表达;下调TRPC6的表达.结论 SR Dex对家兔臧红花红O肾病具有良好保护作用,其机制可能与调节肾脏neph-rin及TRPC6的表达,增强足细胞滤过屏障功能有关.

摘要： 目的 观察宣通三焦、活血通络方对膜性肾病大鼠血尿生化指标、肾脏病理及肾组织中Nephrin、NEPH1表达的影响.方法 取40只清洁级健康SD雄性大鼠,随机选取10只作为正常组,其余大鼠采用阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)进行膜性肾病造模.将造模成功的大鼠随机分为膜性肾病组、雷公藤+激素组、中药组各10只.正常组、膜性肾病组给予生理盐水灌胃,雷公藤+激素组给予雷公藤多苷片和醋酸泼尼松片混悬液灌胃,中药组给予宣通三焦、活血通络方混悬液灌胃,均1次/d,连续4周.测定各组大鼠24h尿蛋白定量(24h UTP)及血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、白蛋白(ALB)、肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)水平,光镜、电镜、免疫荧光下观察各组大鼠肾脏病理改变,实时荧光定量PCR法测定肾组织中Nephrin和NEPH1 mRNA表达情况.结果 与正常组比较,膜性肾病组、雷公藤+激素组、中药组大鼠24 h UTP及血清TG、TC水平均明显升高(P均0.05);与膜性肾病组比较,雷公藤+激素组、中药组大鼠24 h UTP及血清TG、TC水平均明显降低(P均0.05).结论 宣通三焦、活血通络方可以降低膜性肾病大鼠蛋白尿,升高血ALB,调节脂代谢,改善肾脏病理改变,其机制可能与上调肾组织中Neph-rin、NEPH1的表达有关.

摘要： 目的：通过观察雷公藤内酯醇(Triptolide，TP)及对照药物缬沙坦(Valsartan，Val)干预高糖环境培养的足细胞肾小球足细胞裂孔隔膜(GPSD)核心蛋白nephrin的表达，来深入探讨雷公藤治疗DN蛋白尿的分子生物学机制.rn 方法：(1)将培养成熟的足细胞分为对照组1、对照组2、模型组、雷公藤内酯醇干预组及缬沙坦干预组(干预组均设低、中、高3个剂量)，培养24h后以RT-PCR法检测各组足细胞nephrin mRNA的表达.(2)将培养成熟的足细胞设为对照组、模型组，雷公藤内酯醇干预组及缬沙坦干预组，培养24h后行间接免疫荧光法检测nephrin蛋白的表达.rn 结果：(1)与模型组相比，不同剂量TP和Val组均能提高nephrin mRNA表达(P<0.05)，并且中剂量TP组和高剂量Val组效果最好(P<0.05).(2)与对照组相比，间接免疫荧光法可见模型组nephrin表达下降.经TP和Val干预24h后，TP和Val组足细胞nephrin蛋白的表达均有一定程度提高.rn 结论：雷公藤内酯醇和缬沙坦均能上调高糖诱导的足细胞nephrin的表达下降，这可能是雷公藤及缬沙坦在临床上有效治疗DN蛋白尿的机制之一.

摘要： 本发明涉及忌避因子和/或多肽用于制备用于治疗疾病例如退行性疾病的药物组合物的用途，特别地，涉及SLIT3或导蛋白1蛋白的用途。本发明还涉及SLIT3的多肽片段，包含所述多肽的药物组合物和其用途。