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PRRS诊断基因微阵列靶标的设计与评价

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本研究目的是克隆PRRS诊断型DNA微阵列技术的靶标。试验应用ArrayDesigner2.0软件设计PRRSV诊断基因微阵列靶标引物,用一步法RT-PCR从分离毒株C14-2和疫苗株VP046 BIS扩增获得靶标并用pMD18-T载体克隆获得C14P9、PRRS PS9、U1b、Y11、Y12、E6、E8共7个靶标重组质粒,序列测定和多重序列对位排列分析靶标,结果为C14P9、PRRS_PS9、U1b、Y11和Y12均扩增自C14-2株,分别位于ORF5、5'NCR、ORF1b、ORF6和ORF7,序列全长分别为468bp、174bp、301bp、155bp和176bp,与PRU87392和A26843的同源性分别为99.57﹪和65.17﹪、99.43﹪和46.00﹪、94.31﹪和72.36﹪、98.71﹪和69.68﹪,99.43﹪和62.50﹪;E8和E6克隆自欧洲疫苗株VP046 BIS的5'NCR和ORF6基因,序列全长分别为191bp和350bp,与PRU87392和A26843比对分析其同源性分别为45.55﹪和98.43﹪、70.00﹪和96.00﹪,结果表明C14P9、PRRS_PS9、U1b、Y11、Y12系美洲型,E8和E6为欧洲型,试验设计的靶标能区分美洲型和欧洲型,可用于PRRS诊断基因微阵列的构建。杂交分析表明靶标在不同温度下杂交信号存在差异,靶标之间的非特异性交叉杂交是由靶标序列部分重叠或高同源性和杂交条件不严谨等因素造成。

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来源
《第二届中国畜牧科技论坛》|2005年|625-631|共7页
会议地点重庆
作者
肖驰; 曹三杰; 文心田;
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作者单位

中国农学会;

中国畜牧兽医学会;

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会议组织
正文语种
原文格式 PDF
中图分类
关键词
猪繁殖与呼吸综合征病毒; RT-PCR; 克隆; 微阵列;

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专利

1. 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)诊断DNA微阵列的构建 [J] . 肖驰 ,曹三杰 ,文心田 . 中国兽医学报 . 2007,第1期
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PRRS诊断基因微阵列靶标的设计与评价

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