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干扰素α1b突变体的高效表达、纯化及生物学活性研究

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目的:构建高效表达的干扰素α1b突变体菌株和开发其纯化工艺,研究干扰素α1b突变体的抗细胞增殖活性和促NK细胞杀伤活性. 方法:用PCR定点突变技术将重组干扰素α1b第86位的半胱氨酸突变为天冬氨酸,得到干扰素α1b的突变基因,并克隆到表达载体pET9a中;在大肠杆菌JM109(DE3)中以包涵体形式实现了干扰素α1b突变体的高效表达;干扰素α1b突变体经过包涵体变复性和S-Sepharose、SephacrylS-100纯化后,用MTT法检测其对三种肿瘤细胞(HL-60、K562、Raji)的生长抑制作用和其促NK细胞杀伤活性. 结果:干扰素α1b突变体蛋白在发酵培养中表达量可达109IU/L,纯化后纯度达到了99﹪,干扰素α1b突变体对三种肿瘤细胞的生长抑制作用较干扰素α1b有显著的提高,促NK细胞杀伤活性二者一致. 结论:采用S-Sepharose离子交换层析替代传统的单抗亲和层析也获得了很高的纯度,干扰素α1b突变体的抗细胞增殖活性显著提高,有希望成为新型的干扰素治疗剂.

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来源
《第八次全国生物制品学术会议》|2005年|81-84|共4页
会议地点昆明
作者
徐帆洪; 陈仰权; 童葵塘;
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作者单位

中国微生物学会;

中华预防医学会;

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会议组织
正文语种
原文格式 PDF
中图分类临床疗效试验;
关键词
干扰素α1b突变体; 蛋白纯化; 抗细胞增殖活性; 促NK细胞杀伤活性; 纯化工艺; 肿瘤细胞;

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