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LYRM1基因小干扰RNA表达载体的构建及干扰效率验证

摘要

目的:构建LYRM1基因的沉默表达载体并在3T3-L1脂肪细胞中验证其干扰效率.方法:针对LYRM1 mRNA设计并合成三条siRNA干扰片段,以3T3-L1前体脂肪细胞为工具细胞分别单独转染siRNA干扰片段,共同转染siRNA干扰片段和LYRM1-Cherry-RNAi Reporter质粒.荧光显微镜下观察荧光强度,荧光定量PCR检测LYRM1 mRNA表达水平,筛选有效的干扰序列.以干扰效率最高的siRNA序列构建LYRM1-RNAi载体.将LYRM1基因的沉默表达载体转染至3T3-L1前体脂肪细胞,验证干扰效率.结果:(1)siRNA297干扰效率为42%.(2)LYRM1-RNAi载体干扰效率为39%.结论;本研究成功构建LYRM1基因沉默表达载体,其干扰效率为39%,为进一步研究肥胖相关基因LYRM1的功能提供可能技术支持.

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