表达V5表位的重组猪圆环病毒2型毒株及其生物学特性鉴定

摘要

为了探讨猪圆环病毒2型(PCV2)作为表达外源表位的可行性,本研究构建了以PCV2基因组为骨架。在ORF2编码Cap蛋白的C末端插入了源自副流感病毒5型的一个含14氨基酸序列的V5表位标签,用构建感染性分子克隆重组质粒转染细胞,拯救出一株表达V5表位标签的重组毒株,命名为recPCV2/CL—V5。采用免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)、血清中和试验(SNA)、捕获ELISA及免疫电镜对重组毒株进行了鉴定。结果表明:在recPCV2/CL-V5株感染细胞中检出PCV2和V5表位抗原;PCV2阳性血清和中和性单克隆抗体(1D2)能够完全中和recPCV2/CL-V5株的细胞感染性;recPCV2/CL.V5株在繁殖动力学和形态学上与亲本病毒基本一致。鉴于recPCV2/CL-V5株插入了一个v5表位,采用PCR、IPMA和捕获ELISA与亲本毒株相鉴别。recPCV2/CL-V5株经细胞连续传10代,体外培养增殖性能稳定,毒价可达106.25TCID50、mL。拯救的带有V5表位标签的重组PCV2毒株,为深入研究该病毒复制理、抗原表位展示及分子标记疫苗和鉴别诊断等开创了新的平台。

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