• 主题
高级搜索  >
历史搜索 清空历史
首页> 中文会议>中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会会议 >抗猪输血传播病毒1型(PTTV1)Cap蛋白单克隆抗体制备及鉴定

抗猪输血传播病毒1型(PTTV1)Cap蛋白单克隆抗体制备及鉴定

页面导航
  • 摘要
  • 著录项
  • 相似文献
  • 相关主题

摘要

为表达猪输血传播病毒1型(PTTV1)Cap蛋白用于单抗的制备，以含PTTV1全长基因组的质粒(pMD18-TTV1-SY13)为模板，用高保真PCR法扩增PTTV1-ORF1(1501～2475 nt)编码的Cap蛋白C末端截短序列(324 aa)，引物两端设计了sal Ⅰ和Not Ⅰ酶切位点，将PCR产物克隆到pGEX-6P-1载体，构建的重组质粒命名为pGEX-TTV1-ORF1-C1。将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株后进行诱导表达，获得了含GST标签的PTTV1-rCap重组融合蛋白，经SDS-PAGE电泳分析和Western blot鉴定，目的蛋白获得了高效表达，分子量约为64．0kDa，以包涵体形式存在。用纯化的重组蛋白免疫BALB／c小鼠，采用淋巴细胞杂交瘤技术获得了8株稳定分泌抗PTTV1-rCap蛋白的杂交瘤细胞株，依次命名为1H4、1E9、1E11、4G12、5C5、7B8、8C2、8G2，单抗亚类鉴定均为IgG1，轻链为K型;单抗培养上清效价为400～3200倍，腹水为4．0×105～6．4×106倍;有7株单抗与PTTV1-rCap蛋白产生特异性反应，另1株单抗(1E11)呈阴性，可能针对构象表位。为验证8株单抗与真核表达的Cap蛋白的免疫反应性，将全长与截短的PTTV1-ORF1基因片段克隆到pcDNA3．1／V5-His TOPO表达载体，转染293T细胞进行蛋白表达，采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)检测表明，这8株单抗均能够与表达的Cap蛋白产生特异性反应。本研究表达的PTTV1-Cap蛋白及制备的单抗，为该病毒诊断方法的建立及抗原表位的鉴定奠定了基础。

著录项

相似文献

  • 中文文献
  • 外文文献
  • 专利
获取原文

客服邮箱：kefu@zhangqiaokeyan.com

京公网安备：11010802029741号 ICP备案号：京ICP备15016152号-6 六维联合信息科技 (北京) 有限公司©版权所有

  • 客服微信

  • 服务号