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ART1与PART-1在CDDP诱导的CT26细胞凋亡中协同作用的初步研究

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英汉缩略语名词对照表

摘要

前言

1．材料与方法

1．1．实验材料

1．2．实验方法

1．3．统计学处理

2．实验结果

2．1．慢病毒转染CT26细胞以及ART1-cDNA基因表达鉴定

2．2．ART1和PARP-1对CDDP诱导的CT26细胞凋亡的影响

2．3．相关凋亡蛋白检测

3．讨论

全文小结

参考文献

文献综述 腺苷二磷酸核糖基化转移酶与腺苷二磷酸核糖基化水解酶作用

致谢

硕士攻读期间发表的论文

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摘要

目的:初步探讨精氨酸特异性单腺苷二磷酸核糖基化转移酶（ART1）与聚腺苷二磷酸核糖基化聚合酶（PARP-1）在CDDP诱导的小鼠结肠癌CT26细胞凋亡中的协同作用及其机制。
　　方法:以携带ART1-cDNA的慢病毒感染小鼠结肠癌CT26细胞，以ART1-shRNA CT26细胞、un-transfected CT26细胞以及LV-controlCT26细胞为对照。采用顺铂(CDDP)作为凋亡诱导剂。采用RT-PCR、Westren Blot方法检测ART1 mRNA和ART1蛋白表达;采用流式细胞术、Hochest33342检测各组CT26细胞的凋亡率;Western Blot方法检测RhoA、ROCK1、NF-κB、Cox-2、Caspase3、PARP1以及PARP1裂解片段的表达。
　　结果:
　　1.ART1-cDNA慢病毒成功转染CT26细胞，RT-PCR以及WesternBlot检测结果显示:与ART1-shRNA CT26细胞、LV-control CT26细胞以及untransfected CT26细胞相比，ART1-cDNA CT26细胞中ART1表达水平显著增高(P＜0.05)。
　　2.ART1与PARP-1对CDDP诱导的CT26细胞凋亡的影响:
　　①流式细胞术检测显示:经CDDP诱导后各组细胞凋亡率均增高，ART1-cDNA CT26细胞与ART1-shRNA CT26细胞、un-transfected CT26细胞以及LV-control CT26细胞相比，其凋亡率明显降低(P＜0.05)。
　　②Hochest33342检测发现:予以CDDP诱导凋亡的各组CT26细胞均见凋亡小体形成。与ART1-shRNA CT26细胞、LV-control CT26细胞以及un-transfected CT26细胞相比，ART1-cDNA CT26细胞凋亡率明显降低(P＜0.05)。ART1-cDNA CT26细胞经5-AIQ、CDDP处理后其凋亡率较只给予CDDP处理的ART1-cDNA CT26细胞及未处理的ART1-cDNA CT26细胞凋亡率明显增加(P＜0.05)。
　　3.Western Blot检测相关凋亡蛋白表达:
　　①在予CDDP诱导的细胞中，ART1-cDNA CT26细胞与ART1-shRNA CT26细胞，LV-control CT26细胞和un-transfected CT26细胞相比，RhoA、ROCK1、NF-κB、Cox-2、PARP-1表达明显增加，而caspase3和PARP-1裂解片段(p89)的表达则降低。在未给予CDDP诱导的细胞中，caspase3为未激活状态，无PARP-1裂解片段(p89)形成(P＜0.05)。
　　②经5-AIQ处理的untransfected CT26细胞与未予处理的untransfected CT26细胞相比，ROCK1与ART1的表达无明显差异。Untransfected CT26细胞经Y-27632处理后，与未给予Y-27632的untransfected CT26细胞相比，细胞中PARP-1的表达明显下降(P＜0.05)，而ART1无明显改变。
　　③予以5-AIQ及CDDP处理的ART1-cDNA CT26细胞，与仅给予CDDP处理的ART1-cDNA CT26细胞和未处理的ART1-cDNA CT26细胞相比，其NF-kB与Cox-2的表达明显降低而caspase3的表达明显增高(P＜0.05)。
　　结论:ART1基因沉默可增加CT26细胞凋亡，ART1高表达可抑制CT26细胞凋亡，ART1与PARP-1在CDDP诱导的小鼠结肠癌CT26细胞中具有协同作用，其机制可能与ART1调节RhoA/ROCK通路进而影响NF-κB、PARP-1、Cox-2、caspase3的表达有关。

著录项

  • 作者

    况晶;

  • 作者单位

    重庆医科大学;

  • 授予单位 重庆医科大学;
  • 学科 病理学与病理生理学
  • 授予学位 硕士
  • 导师姓名 王娅兰;
  • 年度 2014
  • 页码
  • 总页数
  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 中文
  • 中图分类 R735.35;
  • 关键词

    结肠癌; 细胞凋亡; 协同作用; 动物模型; 蛋白表达;

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