摘要：目的：在细胞水平研究冷冻治疗对肝癌细胞系的影响，化疗增强冷冻治疗作用及二者在诱导细胞凋亡的作用。rn 方法：1、在-80℃、-40℃、-25℃、-20℃及-15℃的冷冻条件下，分别对肝癌细胞系Bel-7402、SMMC-7721及耐药肝癌细胞系Bel-7402/R和对照肠癌细胞系HIC-251的细胞活率的影响。比较冷冻结合化疗与单纯冷冻或化疗之间的细胞活率的差异。2、分析细胞凋亡相关分子在上述不同条件下的表达：(1)流式细胞仪检测AnnexinV的表达及凋亡抑制因子存在时AnnexinV表达的改变;(2)Western Blot分析Bax及Bcl-2的表达及不同条件下的差异;(3)RT-PcR检测Survivin的表达及变化。rn 结果：1、不同冷冻温度及作用时间对不同肿瘤细胞的细胞活率有不同影响，不同细胞对同一冷冻条件的耐受有明显差异。肝癌细胞系Bel-7402的耐受性最强，而肠癌细胞系HIC-251最敏感。肝癌耐药细胞系Bel-7402/R在不同冷冻条件下的细胞活率均较其亲本Bel-7402低。不同化疗药物作用均可降低细胞活率20-30％;2、凋亡相关分子在不同试验条件下表达量不同。单纯AnnexinV阳性和AnnexinV/PI双阳性细胞比例在Bel-7402对照、经单纯冷冻、经顺铂处理及冷冻-化疗处理后分别为0.9％和0.93％、3.9％和8.16％、6.4％和0.43％以及15.2％和24.67％。caspase-8抑制剂Z-IETD-FMK和caspase-9抑制剂Z-LEHD-FMK均明显抑制冻化疗后单纯Annexin V阳性和AnnexinV/PI双阳性细胞比例。经不同化疗药物处理、化疗结合冷冻处理Bel-7402的Bax表达明显上调;3、耐药细胞系Bel-7402/R的Bax的表达也高于Bel-7402，而Survivin mRNA的表达低于后者。rn 结论：冷冻和化疗均可以诱导肝癌细胞凋亡，且二者之间具有协同作用。
