几种植物内生真菌的分离及其次级代谢产物生物活性研究

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大量研究已证明，药用植物内生真菌已成为寻找结构新颖的活性物质的天然宝库。因此，本论文以5种天然药材作为研究对象，分离并纯化了这5种植物及其不同组织部位中的内生真菌，然后检测其代谢产物粗提物的生物活性，对部分有活性菌株代谢物的化学组成进行了初探。研究内容和结果如下：
　　1、内生真菌的分离纯化：通过组织切块法，对陇蜀杜鹃（Rhododendron przewalskii）、攀茎钩藤（Uncaria scandens）、灰绿黄堇（Corydalis adunca）、鹿蹄橐吾（Ligularia hodgsonii）、亚欧唐松草（Thalictrum minus L.）五种天然药材不同组织部位中的内生真菌进行分离、纯化，共获得31株内生真菌，分别为：陇蜀杜鹃18株；攀茎钩藤9株；灰绿黄堇1株；鹿蹄槖吾2株；亚欧唐松草1株。其中根中分离得到的内生真菌占10%，叶中分离的占19%，茎中分离的占71%，植物茎中内生真菌分布最多，叶和根中分布较少。使用 PDB培养基液态发酵技术、乙酸乙酯萃取、甲醇回流提取方法，获得了62个内生真菌粗提物。
　　2、活性初探：通过酶标法研究了所有内生真菌提取物的抗单胺氧化酶活性，多种内生真菌粗提物均有不同程度的抗单胺氧化酶活性，50%以上有3株，分别为 LSDJ-J-4、LSDJ-J-6和 QDE-6，其菌液萃取物的百分抑制率分别为51.67%、50.72%和54.65%。使用改良 Ellman法研究了62个内生真菌提取物的抗 AChE活性，结果显示菌液和菌丝体粗取物对 AChE有一定抑制活性，其中有9株内生真菌提取物的乙酰胆碱酯酶抑制率在60%以上，分别为：LSDJ-J-1、LSDJ-J-2、LSDJ-J-6、LSDJ-J-9、LSDJ-J-10、LSDJ-G-1、QDE-6、LTTW-Y-1和 TSC-J-1。采用玻片浸渍法测定了所有内生真菌提取物的杀朱砂叶螨活性，其中3株菌株的提取物，其24 h致死率达50%以上，分别为：QDE-4、QDE-5和 QDE-6。采用有毒培养基法测定所有内生真菌提取物的辣椒晚疫病菌抑制活性，研究表明有8株菌的提取物对辣椒疫霉菌的抑菌活性在80%以上，分别为：LSDJ-J-1、LSDJ-J-2、LSDJ-J-6、LSDJ-J-8、QDE-4、QDE-6、LTTW-Y-1和TSC-J-1。综合以上结果，菌株QDE-6（分自攀茎钩藤）在多种活性测定实验中均显示出较高活性，值得进一步研究其活性成分。
　　3、化学成分初探：通过 TLC薄层层析色谱、大孔树脂柱层析、硅胶柱层析、凝胶柱色谱、高效液相色谱等多种色谱手段对内生真菌LSDJ-J-6和QDE-6的次级代谢物化学成分进行了研究。共分离获得11个单体化合物，利用1H-NMR、13C-NMR等波谱技术，对这些化合物进行了结构鉴定，最终确定了其中5个单体化合物，分别是Asper giketone（5）、Gliotoxin（6）、Pseurotin A2（7）、Brevianamide F（8）、Pseurotin A1（11）。
　　4、菌种鉴定：通过分子生物学方法及形态学分析对部分活性菌株进行了菌种鉴定，确定了菌株的归属。菌株 LSDJ-J-2被鉴定为链格孢属（Alternaria sp.）真菌；菌株LSDJ-J-6被鉴定为木霉菌属（Trichoderma sp.）真菌；菌株QDE-6被鉴定为黑曲霉属（Aspergillus sp.）真菌；菌株 LTTW-Y-1被鉴定为黑曲霉属（Aspergillus sp.）真菌；菌株TSC-J-1被鉴定为镰胞菌属（Fusarium sp.）真菌。

著录项

作者
孙景云;
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作者单位

兰州理工大学;

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授予单位兰州理工大学;
学科制药工程
授予学位硕士
导师姓名杨中铎;
年度 2017
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类中药化学;植物药;
关键词
内生真菌; 活性成分; 结构鉴定; 菌种鉴定; 代谢产物; 生物活性;

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