产毒素多杀性巴氏杆菌重组沙门氏菌基因工程疫苗的研究

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缩略词表

1 文献综述

1.1 猪萎缩性鼻炎的研究进展

1.1.1 猪萎缩性鼻炎的病原学

1.1.2 产毒素多杀性巴氏杆菌的毒力因子

1.1.3 猪萎缩性鼻炎的其它影响因素

1.1.4 猪萎缩性鼻炎的致病机理

1.1.5 猪萎缩性鼻炎的诊断

1.1.6 猪萎缩性鼻炎的防治与疫苗研究

1.2 猪沙门氏菌疫苗及其载体的研究

1.2.1 猪副伤寒沙门氏菌疫苗的研究

1.2.2 沙门氏菌为载体的研究

1.2.3 弱毒沙门氏菌载体的优点

1.2.4 弱毒沙门氏菌载体的缺点及改进方法

1.2.5 重组沙门氏菌载体疫苗的应用

2 目的与意义

3 材料与方法

3.1 材料

3.1.1 菌株、质粒

3.1.2 试验动物

3.1.3 酶和试剂

3.1.4 主要实验仪器

3.1.5 主要培养基及其配制

3.1.6 缓冲液及试剂配制

3.1.7 引物

3.2 方法

3.2.1 质粒的制备

3.2.2 重组质粒沙门氏菌的电转化

3.2.3 目的片段的原核表达

3.2.4 沙门氏菌和rtoxAcELISA检测方法的建立

3.2.5 巴氏杆菌重组C501菌株的构建与鉴定

3.2.6 重组菌株生物学特性的研究

3.2.7 重组菌株C501(pYA-toxAc)与亲本株C500的毒力试验

3.2.8 菌株C78-1及HN-13的LD50测定

3.2.9 重组菌株免疫小鼠试验

3.2.10 重组菌株对仔猪的免疫试验

4 结果与分析

4.1 重组菌株的构建与鉴定

4.1.1 免疫原性片段toxAc的克隆与序列分析

4.1.2 重组质粒pYA-toxAc的酶切鉴定结果

4.1.3 重组菌株的鉴定

4.2 重组菌株的生物学特性

4.2.1 重组菌株的表型特性

4.2.2 重组菌株的生长曲线

4.2.3 重组菌株的遗传稳定性

4.2.4 重组菌株C501(pYA-toxAc)的分泌表达

4.3 重组菌株对小鼠的试验

4.3.1 HN-13、菌株C78-1、C500及重组菌株的毒力实验结果

4.3.2 免疫小鼠的沙门氏菌抗体检测

4.3.3 免疫小鼠产生针对rtoxAc的抗体检测

4.3.4 免疫小鼠针对沙门氏菌感染的保护力

4.3.5 免疫小鼠针对HN-13感染保护力

4.4 重组菌对猪的免疫效力研究

4.4.1 重组菌对猪的安全性评价

4.4.2 重组菌免疫仔猪后抗体检测

5 讨论

6 结论

参考文献

致谢