首页> 中文学位 >真核生物多顺反子mRNA翻译起始研究
【6h】

真核生物多顺反子mRNA翻译起始研究

代理获取

目录

文摘

英文文摘

声明

前言

第一章多顺反子mRNA中下游阅读框的翻译起始研究

1.1材料与试剂

1.1.1主要实验仪器

1.1.2主要实验试剂及耗材

1.1.3细胞与菌种

1.1.4主要试剂配制

1.2方法

1.2.1多顺反子表达载体的设计

1.2.2引物设计

1.2.3表达载体的构建

1.2.4 Bel-7402细胞的培养

1.2.5细胞转染及荧光显微镜观察GFP表达

1.2.6流式细胞仪检测GFP表达效率

1.3结果

1.3.1酶切鉴定重组表达载体

1.3.2测序鉴定重组表达载体

1.3.3 Bel-7402细胞中GFP的荧光表达

1.3.4流式细胞仪检测GFP的表达效率

1.4讨论

1.5结论

第二章多顺反子mRNA中重叠阅读框的翻译起始研究

2.1材料与试剂

2.1.1主要实验仪器

2.1.2主要实验试剂及耗材

2.1.3主要试剂配制

2.2方法

2.2.1表达载体的设计

2.2.2引物设计

2.2.3表达载体的构建

2.2.4细胞转染及GFP荧光观察

2.2.5 Western Blot检测融合阅读框表达

2.2.6流式细胞仪检测GFP表达效率

2.3结果

2.3.1酶切鉴定重组表达载体

2.3.2测序鉴定重组表达载体

2.3.3细胞转染后GFP绿色荧光表达

2.3.4 Westren Blot检测融合阅读框的表达

2.3.5流式细胞仪检测GFP表达效率

2.4讨论

2.5结论

参考文献

综述:真核生物翻译起始的调控

致谢

攻读硕士学位期间主要研究成果

展开▼

摘要

真核生物与原核生物一个很重要的区别就在于真核生物mRNA是单顺反子结构,而原核生物mRNA是多顺反子结构。自从Kozak等提出了扫描机制模型后,这种起始方式就成为了真核生物mRNA翻译过程中最重要的机制之一。是否存在其他翻译的起始方式,真核生物中是否存在多顺反子mRNA,这些问题对于更清楚的了解真核生物的翻译过程以及目前对于真核生物中基因的认识和研究都有着十分重要的作用。为了对真核生物mRNA的翻译起始方式进行更全面的探讨,我们以GFP基因的开放阅读框为基础,利用PCR的方法对其进行改造,得到一系列处于不同阅读顺序和相同阅读顺序下的多顺反子结构,进而构建得到了一系列重组表达载体。将这些重组表达载体转染人肝癌Bel-7402细胞后,通过荧光显微镜观察、Western Bolt、流式细胞仪检测等多种方式,证明了在不同阅读顺序下,间隔很近的两个起始密码子都可以起始相应阅读框的翻译,而在同一阅读顺序下,多个间隔较远的起始密码子中只有第一个密码子能够起始相应阅读框的翻译。从而表明真核细胞中多顺反子mRNA在一定条件下可以同时翻译,其翻译的起始方式可能有别于经典的扫描机制模型。并提出了在真核生物mRNA翻译过程中,一部分起始前复合物能够通过第一个起始密码子,继续向3’端扫描并识别下游的AUG密码子,但AUG密码子对起始前复合物具有一定的促降解作用,起始前复合物在越过AUG密码子后的扫描是一个逐步降解过程的假设,为今后更全面的研究真核生物翻译起始机制提供了参考。

著录项

相似文献

  • 中文文献
  • 外文文献
  • 专利
代理获取

客服邮箱:kefu@zhangqiaokeyan.com

京公网安备:11010802029741号 ICP备案号:京ICP备15016152号-6 六维联合信息科技 (北京) 有限公司©版权所有
  • 客服微信

  • 服务号