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杨树胚性悬浮细胞系建立与原生质体融合研究

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第一章文献综述

1植物细胞悬浮培养研究概况

1.1植物细胞悬浮培养的概念和特点

1.2植物细胞悬浮培养

1.3林木细胞悬浮培养

1.4影响悬浮细胞系建立和再生的因素

2植物原生质体分离和培养

2.1植物原生质体培养概况

2.2植物原生质体融合研究概况

2.3植物体细胞融合研究

3杨树细胞工程研究现状

4本论文的研究目的

第二章杨树胚性细胞悬浮培养与植株再生研究

1材料与方法

1.1植物材料

1.2愈伤组织诱导

1.3继代培养及筛选

1.4胚性细胞悬浮培养

1.5悬浮细胞系生长特性的测定

1.6悬浮细胞系的分化与植株再生

1.7体细胞胚胎发生的细胞学观察

2结果与分析

2.1愈伤组织诱导及胚性愈伤组织筛选培养和保持

2.2悬浮细胞系的建立

2.3悬浮细胞系的保持与生长特性

2.4悬浮细胞系的分化与植株再生

2.5体细胞胚胎发生的细胞学观察

3讨论

3.1愈伤组织培养

3.2悬浮细胞系的建立与保持

3.3悬浮细胞系的胚状体发生

3.4悬浮细胞系植株再生的影响因子

第三章杨树原生质体融合研究

1材料与方法

1.1植物材料

1.2 CPW溶液

1.3混合酶液组成

1.4原生质体制备

1.5 PEG结合高PH高钙法诱导的原生质体融合

1.6观察与摄影

2结果与分析

2.1对原生质体分离的影响因素

2.2 PEG结合高PH高钙法诱导原生质体融合体系

3讨论

第四章结论

图版

参考文献

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摘要

该研究以杨树优良无性系为材料,选择组培苗叶片和茎段诱导愈伤组织,建立杨树悬浮细胞系并植株再生,进而筛选原生质体分离的最佳条件;在此基础上,应用PEG一高Ca2+高pH法开展杨树原生质体成对融合,为创造杨树新种质提供依据.主要结论如下:1不同基因型材料的愈伤组织诱导率几乎没有差异.2,4-D浓度介于lmg/L和3mg/L之间,经过5次调控继代的愈伤组织,形成的愈伤组织由色泽淡黄而鲜艳的小颗粒组成,生长速度快,适宜建立胚性悬浮细胞系.2胚性愈伤组织转入液体培养基时,杨树种不同建立稳定的悬浮细胞系所需的时间相差不大.以MS培养基为基本培养基,附加1.0~2.0mg/L的2,4-D,悬浮细胞培养起始密度以40ml的液体培养基加入鲜重4g悬浮细胞,5~8d左右继代一次有利于杨树胚性悬浮细胞系的建立和保持.3在悬浮培养条件下,杨树细胞先形成细胞团,再由一些胚性细胞团发育形成一个或几个胚状体.诱导胚状体发生时较高浓度的BA可诱导胚性愈伤组织产生较多的胚状体,低浓度的BA十NAA则可促进胚状体伸长.4酶液的成分组成与浓度对原生质体的游离有明显影响.本实验采用1.0%纤维素酶Cellulase RS、0.5%果胶酶Pectolyase Y23、0.5%半纤维素酶Hemicellulase和1.0%离析酶Macerozyme R-10组合酶液来游离原生质体,其中添加0.6mol/L甘露醇Mannitol、1470mg/LCaCl2·2H2O和95mg/L KH2PO4,pH值为5.8.5不同材料和不同取材时间对原生质体产量和活力有显著影响:采用继代3d的悬浮细胞游离原生质体所得的产量最高;试管苗则采用继代25d的叶片能获得最高的产量,而且原生质体活力也最高;悬浮细胞游离原生质体得率和活力均明显高于试管苗叶片游离的原生质体.酶解时间对原生质体产量和活力也存在影响:酶解8h的悬浮细胞原生质体产量基本上达到最高产量,酶解10h后,有些原生质体开始破裂,原生质体活力下降.渗透势对游离原生质体的影响则不明显.6 PEG-高Ca2高pH法诱导原生质体融合研究结果表明,35%的PEG浓度能使原生质体融合获得较高的杂种融合率,同时原生质体不易破裂,是杨树PEG--高pH高钙法诱导原生质体融合的适宜浓度.

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