神经干细胞特异性启动子调控能力的研究

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目的：研究能够调控外源基因在神经干细胞中特异性表达的启动子。
　　方法：PCR扩增出小鼠Nestin启动子全序列(4000bp)、核心序列(400bp)和内含子-2；以pcDNA3.1为模板，构建6种重组质粒，分别用CMV、CMV+内含子-2、Nestin启动子全序列、Nestin启动子全序列+内含子-2、Nestin启动子核心序列、Nestin启动子核心序列+内含子-2作为启动子调控报告基因EGFP表达；6种重组质粒分别转染Nestin+、Nestin-细胞，荧光显微镜下观察转染后细胞内EGFP表达，同时采用流式细胞仪法测定细胞EGFP表达率。用Nestin启动子核心序列与内含子-2序列融合作为启动子，构建慢病毒载体，感染神经干细胞，检测启动子在神经干细胞中调控能力。RT-PCR获得小鼠IGF-1基因的cDNA，构建IGF-1基因重组表达质粒，转染COS-7细胞，ELISA、Western blot检测其表达，进一步验证相关启动子调控真核基因的能力。经质粒抽提、酶切，琼脂糖凝胶电泳鉴定获取克隆的IGF-1重组质粒。
　　结果：经测序鉴定，克隆出的Nestin启动子序列、内含子-2与Genbank中公布序列一致。酶切鉴定结果显示构建的重组质粒完全正确。Nestin启动子全序列及核心序列都能非特异性调控EGFP基因在细胞内表达，并且具有较强调控能力；与内含子-2融合后，只能特异性调控EGFP基因在Nestin+细胞和神经干细胞内表达，CMV启动子与内含子-2序列融合只具有非特异性调控能力。克隆的IGF-1基因cDNA测序与Genbank公布序列一致，Nestin启动子核心序列和内含子-2融合后，能够调控IGF-1在COS-7细胞中表达。
　　结论：Nestin启动子全序列以及核心序列与内含子-2能分别协同调控外源基因在Nestin+细胞特异性表达。序列融合后，能够作为特异性调控外源基因在神经干细胞内表达的启动子。

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作者
张丽;
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作者单位

徐州医科大学;

徐州医学院;

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授予单位徐州医科大学;徐州医学院;
学科神经生物学
授予学位硕士
导师姓名朱孝荣;
年度 2012
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类中枢神经系（脑、脊髓）;
关键词
神经干细胞; 特异性启动子; 调控能力; 外源基因; 流式细胞仪法;

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