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神经干细胞特异性调控启动子研究

摘要

目的:研究神经干细胞特异性调控启动子。方法:PCR扩增出小鼠nestin基因启动子全序列(4000bp)、核心序列(400bp)和内含子-2;以pcDNA3.1为模板,构建6种重组质粒,分别用CMV、CMV+内含子-2、nestin基因启动子全序列、nestin基因启动子全序列+内含子-2、nestin基因启动子核心序列、nestin基因启动子核心序列+内含子-2作为启动子调控报告基因EGFP表达;6种重组质粒分别转染nestin+细胞和nestin-细胞,荧光显微镜下观察转染后细胞内EGFP表达,同时流式细胞仪法测定表达EGFP细胞表达率。结果:nestin基因启动子全序列、nestin基因启动子核心序列都能非特异性调控EGFP基因在细胞内表达,并且具有较强调控能力,与内含子-2融合后,只能特异性调控EGFP基因在nestin+细胞表达;而CMV启动子与内含子-2序列融合只具有非特异性调控能力。结论:nestin基因启动子全序列与内含子-2协同调控外源基因在nestin+细胞特异性表达。

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