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五味子提取物在神经损伤性勃起功能障碍大鼠模型中的疗效和机制

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第一章 神经损伤性勃起功能障碍大鼠模型的建立

1.1 前言

1.2 材料与方法

1.3 实验结果

1.4 讨论

1.5 参考文献

第二章 五味子提取物在神经损伤性勃起功能障碍大鼠模型中的疗效和机制

2.1 前言

2.2材料和方法

2.3 实验结果

2.4 讨论

2.5 参考文献

第三章 五味子提取物联合PDE5抑制剂在神经损伤性勃起功能障碍大鼠模型中的疗效

3.1 前言

3.2 材料和方法

3.3 结果

3.4 讨论

3.5参考文献

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附录 攻读博士学位期间已发表或收录的论文

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摘要

目的：勃起功能障碍(Erectile Dysfunction，ED)发病率逐年上升，我国40岁以上男性患病率高达40%。五型磷酸二酯酶（Phosphodiesterase5，PDE5）抑制剂作为一线药物对ED的总体有效率为70%，然而，该类药物对于根治性前列腺切除术后ED的有效率下降至43%。前列腺癌是美国男性最常见的恶性肿瘤，中国的前列腺癌发病率几乎以每年10%的速度递增。目前，根治手术是局限性前列腺癌的首选治疗，根据统计，根治性前列腺切除术后 ED发生率为80%。五味子提取物在离体实验中证实可导致家兔海绵体平滑肌浓度依赖性舒张。本研究拟通过大鼠海绵体神经损伤ED模型明确五味子提取物治疗ED的效果和其分子生物学机制，为临床应用提供理论依据和科学基础。
　　材料与方法：五味子提取物为使用95%乙醇对吉林产五味子干燥果实进行提取获得。通过钳夹双侧海绵体神经建立神经损伤性ED大鼠模型，并注射阿朴吗啡验证模型可靠性。50只8周龄雄性 SD大鼠（约250g）随机分为5组，每组10只。组一：对照组（假手术组）；组二：海绵体神经损伤模型组；其余三组大鼠在神经损伤模型建立成功后分别给予100mg/天，200mg/天，400mg/天五味子提取物，饲养2个月。通过海绵体神经电刺激监测海绵体内压力评估大鼠勃起功能（ICP法）；Western Blot法检测海绵体组织内皮型一氧化氮合成酶（eNOS）、神经元型一氧化氮合成酶（nNOS）和 RhoA蛋白表达；ELISA法检测海绵体组织内环磷酸鸟苷（cGMP）和环磷酸腺苷（cAMP）浓度；Real time PCR法检测海绵体组织eNOS和nNOS mRNA的表达水平，通过TUNEL检测阴茎海绵体平滑肌细胞凋亡指数，并评价与PDE5抑制剂合用的作用效果。
　　结果：经阿朴吗啡注射验证，双侧海绵体神经钳夹时间为1 min，1.5 min，2 min的ED模型制作成功率分别50%、70%、100%。喂食五味子提取物后所有大鼠均存活。ICP研究发现，勃起功能的改善与五味子提取物喂食剂量相关，五味子100 mg、200 mg和400 mg组的大鼠勃起功能与ED大鼠模型组对比均显著改善（P<0.01）。ELISA结果显示海绵体组织内cGMP和cAMP含量呈浓度依赖性升高（P<0.01）。Western blot和Real time PCR结果显示eNOS和nNOS的mRNA水平以及蛋白表达显著升高（P<0.01），RhoA蛋白表达下降，同时海绵体平滑肌细胞凋亡明显降低，并且与西地那非合用能够进一步增强勃起功能。
　　结论：五味子提取物能够通过影响 NO-cGMP、cAMP-PKA、RhoA/ROCK以及抑制海绵体平滑肌细胞凋亡等多条通路来改善海绵体神经损伤性ED大鼠的勃起功能，并且与PDE5抑制剂有协同作用，可以为PDE5抑制剂无效的ED患者提供新的治疗方案。

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