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黏细菌及其抗菌活性物质的筛选与鉴定

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摘要

前言

1材料与仪器

1.1材料与试剂

1.2仪器

2黏细菌的筛选与鉴定

2.1培养基

2.2黏细菌的筛选方法

2.3黏细菌的鉴定方法

2.4结果

2.5黏细菌的保存

2.6讨论

3 1号黏细菌的生长特征

3.1培养基

3.2方法

3.3结果

3.4讨论

4 1号黏细菌生物活性物质的发现

4.1培养基

4.2方法

4.3结果

4.4讨论

5 1号黏细菌胞外抗菌活性物质的分离纯化

5.1培养基

5.2方法

5.3结果

5.4讨论

6 1号菌抗菌活性物性质的鉴定

6.1方法

6.2结果

6.3讨论

小结

参考文献

文献综述：黏细菌及其生物活性物质分离纯化的研究进展

在读期间发表或待发表的文章

致谢

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摘要

黏细菌属于原核生物，是一类可滑动的、专性好氧的具有复杂多细胞行为的单细胞革兰氏阴性杆菌，不仅在细胞分化、发育和生物进化研究中占有重要地位，而且近年来作为一种可产生丰富而有用的次级代谢物的微生物类群逐渐受到世界青睐，其中有些可抗细菌、有些可抗真菌、有些抗癌、有些溶栓，这对于药物的研发具有重要意义。但分离纯化黏细菌相当困难和耗时，并且难于培养，同时方法特殊。这极大地限制了对这类微生物物种资源的开发，以致其应用研究较其它的微生物类群更为落后。所以，探索更好的分离纯化黏细菌的方法非常重要。 本研究以纯食草兔粪为原料筛选黏细菌。采用多菌灵、灰黄霉素、克霉唑抑制霉菌、丝状真菌等真菌的生长，用加热法除去不耐热的杂菌，用低温冷冻的方法除去可能存在的蠕虫以及不耐反复冻融的细菌，兼用选择培养基VY/4培养基、纤维素培养基、WCX培养基富集黏细菌。研究中得到了3株细菌，通过观察它们在VY/4培养基、纤维素培养基、WCX培养基、LB培养基中的菌落形态、生长状况及在电子显微镜下菌株的子实体、营养细胞和黏孢子的形态、结构等特征，初步鉴定这3株细菌均为嗜细菌群黏细菌中的囊球黏细菌属，发现这三株菌还未曾被报道过，被初步认为是新菌株。实验中发现多菌灵、灰黄霉素、克霉唑等均可抑制霉菌、丝状真菌等的生长，但多菌灵的抑菌效果较好。多菌灵为农业用药比先前报道的放线菌酮价廉、易得并且毒性较小。 实验重点研究了1号菌，发现其对数生长期为3.5～11h，最适起始pH为7.22，最适生长温度为34℃；同时发现1号菌胞外及胞内物中都有抗菌活性物质，且抗菌谱不同，胞外物对革兰氏阳性细菌有较明显的抑菌作用，胞内物对部分革兰氏阳性细菌及革兰氏阴性细菌如E.coli有抑菌作用，但对革兰氏阴性细菌的抑菌作用较强，两者对真菌均无抑菌作用。 将1号菌的胞外培养物60℃旋转蒸干后加水溶解，通过液相萃取、薄层层析、硅胶柱层析，得到了抑制放线菌生长的单一组分，并通过光谱法、双缩尿法、PAGE(聚丙酰胺凝胶电泳)、三氯醋酸沉淀、Molisch反应、葸酮反应等对其进行了初步鉴定，发现其在入=270nm时有最大光吸收值，初步鉴定为醛基或酮基的衍生物。 由于1号菌胞外抗菌活性物质耐热性、稳定性较好，同时其水溶性较好、对G<'+>的抗性又明显、4℃放置3个月后仍有活性，所以有较大的研究价值。 实验还发现3号菌的胞内物也可抑制大肠杆菌的生长，以上这些都表明这3株黏细菌的研究具有实用性和新颖性价值。

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