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地塞米松体内及体外诱导系统性红斑狼疮患者CD4<'+>CD25<'->T淋巴细胞凋亡率的研究

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研究之一　　 目的：研究系统性红斑狼疮（SLE）外周血中调节性T细胞（Treg）不同标志以及Treg细胞在SLE发病中的作用；探讨CD127与FoxP3的相关性，明确CD127定义Treg细胞的特异性；鉴定CD4+CD25+CD127low/-T细胞免疫抑制功能。　　 方法：采用四色直接荧光素标记法和多参数流式细胞术检测40例SLE患者（19例初发和21例缓解）及15例正常对照外周血CD4+CD25+T细胞、CD4+CD25+CD127low/-T细胞、CD4+CD25+FoxP3+T细胞、CD4+CD25highT细胞、CD4+CD25high CD127low/-T细胞、CD4+CD25high FoxP3+T细胞以及CD4+CD127low/-Foxp3+T细胞占CD4+T细胞的比例，并且将7组细胞比例与外周血抗dsDNA等抗体及SLEDAI评分等进行相关性分析。2、以流式细胞分选术结合细胞培养技术，检测和分析3例SLE患者和4例正常人外周血中CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞对CD4+CD25-效应性T细胞增殖的抑制作用。　　 结果：1、SLE患者组7组细胞比例分别为：6.1±1.7；3.13±1.32；2.14±1.03；1.61±0.33；0.97±0.28；0.69±0.23和 0.71±0.35。2、与正常对照组比较: SLE患者组前6组细胞比例均低于正常对照组（P＜0.05）；。CD4+CD127low/-Foxp3+T细胞比例两组没有差别（P＞0.05）。3、SLE患者组: CD4+CD25+FoxP3+、CD4+CD25high FoxP3+T细胞比例与IgA呈正相关；CD4+CD25high CD127low/-T细胞比例与抗SSB抗体呈正相关；7组细胞比例与年龄、性别、病程、ANA、IgM、尿蛋白、24小时尿蛋白、抗dsDNA、抗SSA、抗Sm、抗核糖体、抗RNP抗体抗、C1q、补体C3、C4等及SLEDAI评分等均无相关性。（P＞0.05）。4、SLE患者初发组和缓解组比较: SLE患者初发组7组细胞中除CD4+CD127low/-Foxp3+T细胞比例外，其余均低于缓解组（P＜0.05）。5、SLE患者初发组治疗前后比较: 激素治疗前6组细胞比例均低于激素治疗后（P＜0.05）。6、SLE患者初发组、缓解组和对照组中，CD4+CD25+T细胞及CD4+CD25high T细胞中Foxp3的表达与CD127低表达均呈正相关。7、SLE患者、正常人CD4+CD25-效应性T细胞的体外增殖都可以被自身CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞所抑制，但SLE患者的抑制率明显低于正常对照。　　 结论：SLE的免疫异常可能与调节性T细胞的数量和功能缺陷有关；CD127可能代替Foxp3作为调节性T细胞特异性的表面标记物。　　 研究之二　　 目的：通过体内及体外途径研究系统性红斑狼疮(SLE)患者在应用激素（地塞米松）前后外周血CD4+CD25-T淋巴细胞凋亡率的变化,探讨影响SLE患者经激素治疗后CD4+CD25+调节性T淋巴细胞（Treg）比率上调的机制。　　 方法：应用AnnexinV 检测试剂盒及流式细胞仪检测未经激素治疗的10例SLE患者经地塞米松治疗0天、1天、3天、7天后外周血单个核淋巴细胞（PBMC）中CD4+CD25-T淋巴细胞的早期凋亡率；结合细胞培养技术检测未经激素治疗时SLE患者PBMC在体外经地塞米松刺激培养1天、3天、7天后CD4+CD25-T淋巴细胞的早期凋亡率。　　 结果：1.地塞米松治疗后与未治疗之前相比，SLE 患者PBMC中CD4+CD25-T淋巴细胞早期凋亡率升高（P<0.05）,治疗0、1、3、7天的凋亡率分别是 0.21±0.03、1.39±0.22、1.57±0.11、1.83±0.31；而CD4+CD25+Treg细胞早期凋亡率无明显变化(P＞0.05)，治疗0、1、3、7天的凋亡率分别是0.44±0.06、0.47±0.04、0.43±0.07和0.35±0.07。2、未治疗的SLE患者PBMC经过体外地塞米松刺激培养后CD4+CD25-T淋巴细胞早期凋亡率升高（P<0.05）。体外培养1、3、7天的凋亡率分别是2.02±0.29、2.50±0.59和3.72±0.36。3、未治疗的SLE患者PBMC经过体外地塞米松刺激培养后，CD4+CD25-T淋巴细胞早期凋亡率随激素剂量的增加而上升（P<0.05）。体外培养7天后，DMX剂量为0、5、10、25ug时凋亡率分别为0.60±0.26、1.51±0.69、2.20±0.80和3.65±0.72。4、SLE患者CD4+CD25-T淋巴细胞早期凋亡率与抗ds-DNA抗体、抗Sm抗体、IgG、IgA、IgM、抗SSA抗体、抗SSB抗体、C3、C4等均无相关性（P＞0.05），与SLEDAI评分呈负相关（P<0.05）。　　 结论：SLE患者经过地塞米松治疗后外周血CD4+CD25-T淋巴细胞的凋亡增加并与剂量相关,引起外周血CD4+CD25-T淋巴细胞数量的减少,可能是导致CD4+CD25+Treg细胞比例相对增加的原因。

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