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【24h】

Inactivation of benzoylformate decarboxylase by thiamin thiazolone diphosphate.

机译：硫胺素噻唑酮二磷酸灭活苯甲酰基甲酸酯脱羧酶。

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In 1973, Gutowski and Lienhard designed and synthesized thiamin thiazolone diphosphate (TTDP) as a transition state analogue for E. coli pyruvate dehydrogenase, an enzyme which uses thiamin diphosphate as a cofactor in the conversion of pyruvate to 2-(1-hydroxyethyl) thiamin diphosphate [Gutowski, J. A., and Lienhard, G. E. (1976) J. Biol. Chem., 251, 2863--2866]. Other groups have reported different results for other ThDP-dependent enzymes. Here, we begin the investigation of the interaction between TTDP and P. putida benzoylformate decarboxylase (BFD). First, a recombinant form of BFD was expressed and purified by nickel affinity chromatography. Existing direct and coupled assays were modified to follow the activity of the enzyme with endogenously bound thiamin diphosphate and inhibition of enzyme activity with TTDP. Preliminary results suggest K i = 5 muM for TTDP which is on the same order as the Km of ThDP for the enzyme. Thus, TTDP is not a transition state analogue for BFD.
机译：1973年，Gutowski和Lienhard设计并合成了硫胺素二磷酸噻唑酮（TTDP），作为大肠杆菌丙酮酸脱氢酶的过渡态类似物，该酶利用硫胺素二磷酸作为辅因子将丙酮酸转化为2-（1-羟乙基）硫胺素。二磷酸盐[Gutowski，JA和Lienhard，GE（1976）J.Biol.Chem。化学，251，2863--2866]。其他小组报告了其他依赖ThDP的酶的不同结果。在这里，我们开始调查TTDP和恶臭假单胞菌苯甲酰甲酸酯脱羧酶（BFD）之间的相互作用。首先，表达重组形式的BFD，并通过镍亲和层析纯化。修改了现有的直接和偶联测定法，以追踪内源性结合的硫胺素二磷酸酶的酶活性和TTDP对酶活性的抑制作用。初步结果表明，TTDP的K i = 5μM，与酶的ThDP的Km相同。因此，TTDP不是BFD的过渡状态类似物。

著录项

  • 作者

    Yu, Daria Hil Ching.;

  • 作者单位

    University of Toronto (Canada).;

  • 授予单位 University of Toronto (Canada).;
  • 学科 Chemistry Biochemistry.
  • 学位 M.Sc.
  • 年度 2001
  • 页码 34 p.
  • 总页数 34
  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 eng
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