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人热休克蛋白10和鼠热休克蛋白10的克隆、序列分析及其原核表达

         
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摘要

提取人肝癌SMMC-7721细胞和小鼠NSO细胞总RNA,对热休克蛋白10基因(Hspl0)进行RT-PCR扩增、TA克隆和测序.结果表明,从上述2种细胞中获得的cDNA分别由312,313 bp组成,与报道的人HSPE1 mRNA(NM002157)、鼠肌肉Hspel mRNA(NM-008303)序列同源性分别为99%,97%,命名为HSPEl-1和Hspel-Ⅰ,序列分析表明,二者之间在核苷酸水平上的同源性为92%,氨基酸水平上的同源性为97%.将上述2种cDNA进行双酶切、亚克隆,成功构建了重组表达载体pET-28a-HSPE1-1与pET-28a-Hspe1-1,转化大肠杆菌并进行了诱导表达.检测结果表明,pET-28a-HSPE1-1与pET-28a-Hspe1-1均能在大肠杆菌中表达,表达蛋白分子量大小约为14 kDa,与预期大小一致.Western-Blot结果证实了其为目的蛋白,经镍树脂柱纯化,获得了相应的重组蛋白.为进一步研究这2种蛋白的结构、功能及临床应用奠定了基础.%RT-PCR was used to study the expression of heat-shock 10 kDa protein. The results showed that there were two different HSP transcriptons of varied sizes in Homo liver cancer SMMC-7721 and Mus NSO. One HSP cDNA was composed of 312 bp (named HSPE1-1) and held 99% homology with HSPE1 mRNA reported ( NM-002157). The other HSP gene cDNA was consisted of 313 bp ( named Hspel-1) and had 97% homology with Hspel mRNA reported (NM-008303). The homology between HSPE1-1 and Hspel-1 was 92% in nucleotide sequence and 97% in amino acid sequence. Prokaryotic expression plasmids pET-28a-HSPEl-l and pET-28a-Hspel-1 for producing HSPE1 and Hspel proteins were constructed successfully. Its molecular weight was 14 kDa. Anti-His6 monoclonal antibody was used to demonstrate the identity of the proteins in Western Blot. The corresponding proteins were obtained after purification by Ni-NTA chromatography. The purified corresponding proteins would be helpfulin further studies of their molecular structure, biological function and clinical application.

著录项

  • 来源
    《华北农学报》 |2011年第3期|56-59|共4页
  • 作者

    王丽; 杜晓明; 王林林; 史西保; 藤蔓; 李功权; 权凯; 郭军庆; 张改平;

  • 作者单位

    河南省农业科学院农业部动物免疫学重点实验室;

    河南省动物免疫学重点实验室;

    河南郑州450002;

    河南省农业科学院农业部动物免疫学重点实验室;

    河南省动物免疫学重点实验室;

    河南郑州450002;

    河南省农业科学院农业部动物免疫学重点实验室;

    河南省动物免疫学重点实验室;

    河南郑州450002;

    河南省农业科学院农业部动物免疫学重点实验室;

    河南省动物免疫学重点实验室;

    河南郑州450002;

    河南省农业科学院农业部动物免疫学重点实验室;

    河南省动物免疫学重点实验室;

    河南郑州450002;

    河南省农业科学院农业部动物免疫学重点实验室;

    河南省动物免疫学重点实验室;

    河南郑州450002;

    河南省农业科学院农业部动物免疫学重点实验室;

    河南省动物免疫学重点实验室;

    河南郑州450002;

    河南省农业科学院农业部动物免疫学重点实验室;

    河南省动物免疫学重点实验室;

    河南郑州450002;

    河南省农业科学院农业部动物免疫学重点实验室;

    河南省动物免疫学重点实验室;

    河南郑州450002;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 基因工程（遗传工程）;
  • 关键词

    热休克蛋白; 人热休克蛋白1; 鼠热休克蛋白1; 基因克隆; 原核表达;

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